任亞浩，李巖溪，于飛，趙越，鄭曉南，王博涵，詹志鵬，袁媛，康思雯，楊軍

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)1.公共衛(wèi)生學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生教研室；2.第90期臨床醫(yī)學(xué)七年制，沈陽(yáng) 110001）

白藜蘆醇對(duì)高脂高膽固醇飼料喂養(yǎng)小鼠脂質(zhì)過(guò)氧化水平的影響

任亞浩1，李巖溪2，于飛1，趙越1，鄭曉南1，王博涵1，詹志鵬1，袁媛1，康思雯1，楊軍1

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)1.公共衛(wèi)生學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生教研室；2.第90期臨床醫(yī)學(xué)七年制，沈陽(yáng) 110001）

目的觀察不同劑量的白藜蘆醇對(duì)喂飼高脂高膽固醇飼料的小鼠血清和肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化水平的影響。方法 將50只昆明種小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為基礎(chǔ)組（n=10）和高脂組（n=40），分別喂飼基礎(chǔ)飼料和高脂高膽固醇飼料。4周后，按體質(zhì)量和血清總膽固醇水平將高脂組隨機(jī)分為 4組：高脂對(duì)照組、白藜蘆醇低（5mg·kg-1·d-1）、中（22.5mg·kg-1·d-1）、高（45mg·kg-1·d-1）組?；A(chǔ)組和高脂對(duì)照組均給予0.5%羧甲基纖維素鈉溶液灌胃；白藜蘆醇低、中、高組小鼠分別經(jīng)灌胃給予相應(yīng)劑量的白藜蘆醇羧甲基纖維素鈉溶液。干預(yù)6周后測(cè)定小鼠血清和肝臟中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、超氧化物歧化酶、丙二醛和總抗氧化能力的水平。結(jié)果 基礎(chǔ)組、白藜蘆醇低、中、高組小鼠肝臟丙二醛水平均低于高脂對(duì)照組小鼠（P<0.05）。結(jié)論白藜蘆醇能夠抑制喂飼高脂高膽固醇飼料小鼠肝臟中丙二醛水平的升高。

白藜蘆醇；脂質(zhì)過(guò)氧化；丙二醛

心血管疾病已成為嚴(yán)重危害健康的疾病，而脂質(zhì)過(guò)氧化在其發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色［1］。白藜蘆醇是一種天然多酚類物質(zhì)，廣泛存在于葡萄、虎杖和花生等多種植物中。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究證明，白藜蘆醇具有降血脂、抗氧化和抗癌等多種生物學(xué)作用［2～4］。但有關(guān)白藜蘆醇對(duì)高脂高膽固醇飲食小鼠肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化水平影響的報(bào)道很少，本研究以不同劑量的白藜蘆醇對(duì)喂飼高脂高膽固醇飼料的小鼠進(jìn)行干預(yù)，觀察了白藜蘆醇對(duì)其血清和肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化水平的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑與儀器：膽固醇、膽鹽（北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司）；白藜蘆醇（西安冠宇生物技術(shù)有限公司）；羧甲基纖維素鈉（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）?？偰懝檀迹╰otal cholesterol，TC）試劑盒（北京中生北控生物科技股份有限公司），谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）和考馬斯亮蘭試劑盒（南京建成生物工程研究所）。KDC-1042低速離心機(jī)（安徽科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）；IKA T10 Basic分散機(jī)（德國(guó)IKA公司）；Multiskan MK3酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo公司）；LIBROR AEL-40SM電子天平（日本Shimadzu公司）；恒溫?cái)嚢柩h(huán)水浴箱（江蘇省常州國(guó)華電器有限公司）。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)雄性昆明種小鼠50只，8周齡，體質(zhì)量18～22g，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（遼）2003-0009；使用許可證號(hào)：SYXK（遼）2003-0013。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組與處理：將50只小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為：（1）基礎(chǔ)組（n=10）：喂飼基礎(chǔ)飼料（由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供）；（2）高脂組（n=40）：喂飼高脂高膽固醇飼料（92%的基礎(chǔ)飼料、6.75%豬油、1%膽固醇和0.25%膽鹽混合而成，脂肪總含量為10%）。4周后，由內(nèi)眥靜脈采血0.5ml，測(cè)定血清TC水平，按TC水平和體質(zhì)量均衡原則再將高脂組隨機(jī)分為4組：高脂對(duì)照組、白藜蘆醇低、中、高組，每組10只?；A(chǔ)組與高脂對(duì)照組分別繼續(xù)喂飼基礎(chǔ)飼料和高脂高膽固醇飼料，并給予0.5%羧甲基纖維素鈉溶液灌胃；白藜蘆醇低、中、高組小鼠喂飼高脂高膽固醇飼料，同時(shí)分別經(jīng)灌胃給予不同濃度（5mg·kg-1·d-1、22.5mg·kg-1·d-1和 45mg·kg-1·d-1）的白藜蘆醇羧甲基纖維素鈉溶液進(jìn)行干預(yù)，干預(yù)時(shí)間為6周。動(dòng)物分組和高脂高膽固醇飼料配方參照文獻(xiàn)［5］，并對(duì)飼料配方略作調(diào)整。實(shí)驗(yàn)期間，小鼠自由攝食、飲水，每周稱2次體質(zhì)量。

1.2.2 血清及肝臟MDA、SOD、GSH-Px和T-AOC水平檢測(cè)：干預(yù)期末，禁食12h，將小鼠用乙醚麻醉后摘眼球取血0.5～1.0ml，分離血清；分離肝臟，取0.2g肝組織，加1.8ml 0.85%冷生理鹽水，在冰浴中用IKA T10Basic分散機(jī)制成勻漿，離心后取上清；按試劑盒說(shuō)明在Multiskan MK3酶標(biāo)儀上測(cè)定小鼠血清和肝臟勻漿上清液中MDA、SOD、GSH-Px和TAOC的含量，并測(cè)定肝臟勻漿上清液中蛋白含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)分學(xué)析

2 結(jié)果

2.1 干預(yù)前各高脂組小鼠血清TC水平

干預(yù)前，高脂對(duì)照組、白藜蘆醇低、中、高組小鼠血清 TC 水平分別為（3.03±0.36），（2.98±0.41），（2.98±0.39），（3.00±0.41）mmol/L，各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 不同劑量白藜蘆醇對(duì)小鼠血清MDA、SOD、GSH-Px和T-AOC水平的影響

如表1所示，各組小鼠血清中MDA、SOD、GSHPx和T-AOC水平的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但相對(duì)于基礎(chǔ)組和高脂對(duì)照組，不同劑量的白藜蘆醇干預(yù)組均顯示出小鼠血清SOD水平較高的趨勢(shì)。

2.3 不同劑量白藜蘆醇對(duì)小鼠肝臟MDA、SOD、GSH-Px和T-AOC水平的影響

如表2所示，高脂對(duì)照組小鼠肝臟MDA水平高于基礎(chǔ)組，各白藜蘆醇干預(yù)組MDA水平均低于高脂對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。各組小鼠間SOD、GSH-Px和T-AOC水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

3 討論

表2各組小鼠肝臟MD A、S O D、G S H-P x和T-A O C的水平（±s）T a b.2T h e l e v e l s o f MD A，S O D，G S H-P x a n d T-A O Ci n l i v e r i n a l l g r o u p s（±s）Group n MDA（nmol/mg·prot） SOD（U/mg·prot） GSH-Px（U/mg·prot） T-AOC（U/mg·prot）Control 10 2.02±0.381） 118.31±14.87 2004.98±338.32 0.34±0.07High-fat diet control 10 2.92±0.91 117.55±29.46 1707.65±625.87 0.33±0.12Low-dose resveratrol 10 2.05±0.471） 111.52±27.30 1657.87±482.83 0.27±0.09Intermediate-dose resveratrol 10 2.33±0.731） 106.67±37.27 1865.61±175.80 0.36±0.12High-dose resveratrol 10 2.05±0.471） 108.43±23.76 1809.40±507.89 0.38±0.041）P<0.05vs high-fat diet control group.GSH-Px，glutathione peroxidase；SOD，superoxide dismutase；MDA，malondialdehyde；TAOC，total antioxidant capacity.

生理狀態(tài)下，機(jī)體自由基的產(chǎn)生與清除處于動(dòng)態(tài)平衡中，一旦產(chǎn)生過(guò)多而不能及時(shí)清除，就會(huì)有較多的自由基攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化，從而可能引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化和衰老等。作為一種多酚類物質(zhì)，白藜蘆醇具有酚羥基結(jié)構(gòu)，是活性氧自由基的清除劑、金屬螯合劑和某些抗氧化酶的調(diào)節(jié)劑［6］。朱立賢等分別用 30mg·kg-1·d-1和70mg·kg-1·d-1的白藜蘆醇對(duì)喂飼高脂高膽固醇飼料的大鼠進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果表明這兩種干預(yù)劑量的白藜蘆醇均能降低大鼠血清MDA水平，還能升高大鼠血清 SOD、過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）、GSH-Px和T-AOC水平［7］，但沒(méi)有觀察其對(duì)肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化水平的干預(yù)效果。國(guó)外有關(guān)白藜蘆醇抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用的研究多采用鏈脲霉素誘導(dǎo)的糖尿病動(dòng)物模型［8，9］，因?yàn)椴捎酶咧吣懝檀硷暳衔癸暤姆椒ㄋ钑r(shí)間較長(zhǎng)，但是考慮到后者更接近自然的病理過(guò)程，所以本研究觀察了不同劑量的白藜蘆醇對(duì)喂飼高脂高膽固醇飼料的小鼠血清及肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化水平的影響，結(jié)果表明 5、22.5、45mg·kg-1·d-1的白藜蘆醇均降低了小鼠肝臟MDA水平，與Silan和Roghani等［8，9］的研究結(jié)果一致。Pfluger等[10］的研究證明，沉默信息調(diào)節(jié)因子（silent information regulator 1，SIRT1）至少可通過(guò)以下兩種機(jī)制對(duì)高脂膳食誘導(dǎo)的代謝損傷起保護(hù)作用：誘導(dǎo)錳-超氧化物歧化酶和核呼吸因子，刺激過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ共激活因子1α的表達(dá)；并減少促炎細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子α和白細(xì)胞介素6的激活，抑制核因子κB的活性等。而白藜蘆醇是SIRT1的天然激動(dòng)劑，Ahn等［2］證明，白藜蘆醇可使小鼠肝臟中SIRT1表達(dá)增加，所以白藜蘆醇降低小鼠肝臟MDA水平的作用可能是由于它上調(diào)了SIRT1表達(dá)的結(jié)果。MDA是機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物之一，它的降低表明了機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化程度的減弱。本研究結(jié)果表明，5～45mg·kg-1·d-1的白藜蘆醇均可抑制高脂高膽固醇飼料導(dǎo)致的小鼠肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化，而脂質(zhì)過(guò)氧化是心血管疾病發(fā)生發(fā)展的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素［1］，本研究結(jié)果對(duì)心血管疾病的防治可能會(huì)產(chǎn)生有益作用。但本研究并未發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇降低小鼠肝臟MDA水平的作用在5～45mg·kg-1·d-1的范圍內(nèi)具有劑量依賴性，因此我們認(rèn)為從抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用來(lái)看，低劑量的白藜蘆醇（5mg·kg-1·d-1）即是最佳劑量。

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（編輯王又冬，英文編輯鄭華川）

Effects of Resveratrol on Lipid Peroxidation in Mice with High Fat and High Cholesterol Diet

REN Ya-hao1，LI Yan-xi2，YU Fei1，ZHAO Yue1，ZHENG Xiao-nan1，WANG Bo-han1，ZHAN Zhi-peng1，YUAN Yuan1，KANG Si-wen1，YANG Jun1
（1.Department of Nutrition and Food Hygiene，School of Public Health，China Medical University，Shenyang 110001，China；2.The 90th Class，Seven-Year System，Clinical Medicine，China Medical University，Shenyang 110001，China）

ObjectiveTo study the effects of resveratrol on lipid peroxidation in mice with high fat and high cholesterol diet.MethodsFifty mice were randomly assigned to the following two groups：the mice of control group （n=10）were given a normal diet，and the mice in high-fat diet group（n=40）given high fat diet for 4weeks.And then the mice in high-fat diet group were randomly assigned to the following four groups according to body weight and serum total cholesterol level：high-fat diet control group；low-dose resveratrol group（5mg·kg-1·d-1）；intermediate-dose resveratrol group（22.5mg·kg-1·d-1）；high-dose resveratrol group（45mg·kg-1·d-1）.The resveratrol was dissolved in 0.5%sodium carboxymethyl cellulose and given by intragastric administration.The levels of glutathione peroxidase（GSH-Px），superoxide dismutase（SOD），malondialdehyde（MDA），total antioxidant capacity（T-AOC）were measured after the treatment lasted for 6weeks.ResultsThe MDA levels in high-fat diet control group are higher than those in other groups（P<0.05）.ConclusionResveratrol（5～45mg/kg·d-1） could decrease MDA levels in liver of mice with high fat and high cholesterol diet.

resveratrol；lipid peroxidation；malondialdehyde

R151.3

A

0258-4646（2011）01-0017-03

遼寧省教育廳高校科研計(jì)劃項(xiàng)目（2009A720）

任亞浩（1982-），男，助教，碩士.

楊軍，E-mail：yangjun@mail.cmu.edu.cn

2010-10-19