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        新疆烏頭草的急性毒性觀察和心臟毒性的測(cè)定※

        2011-02-01 05:56:30李光來(lái)管小江侯新華蘇振磊田春霞于拔萃鄭秋生
        中國(guó)民間療法 2011年7期
        關(guān)鍵詞:烏頭灌流左心室

        李光來(lái) 管小江 侯新華 蘇振磊 田春霞 于拔萃 鄭秋生

        1.新疆哈密紅星醫(yī)院,839000

        2.新疆特種植物藥資源教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室石河子大學(xué)藥學(xué)院

        新疆烏頭草的急性毒性觀察和心臟毒性的測(cè)定※

        李光來(lái)1管小江1侯新華1蘇振磊1田春霞1于拔萃2鄭秋生2

        1.新疆哈密紅星醫(yī)院,839000

        2.新疆特種植物藥資源教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室石河子大學(xué)藥學(xué)院

        烏頭草是毛茛科烏頭屬多年生草本植物,因植株體內(nèi)含有烏頭堿而具一定毒性。新疆烏頭草分布較廣,田邊、林帶、山坡均生長(zhǎng)茂盛,哈密分布以天山北坡為主。由于近年來(lái)草場(chǎng)過(guò)度放牧,草場(chǎng)退化導(dǎo)致生態(tài)失衡,烏頭草每年以5%~10%的速度遞增而泛濫成災(zāi)。隨著人民生活水平的提高,回歸大自然,食用野菜已成為一種新的消費(fèi)觀念。由于烏頭草外型色澤與野芹菜極為相似,采集野芹菜中夾雜烏頭草事件日益頻繁和增多,因誤食烏頭草引起中毒的病例逐年增加[1]。對(duì)于烏頭堿中毒的臨床表現(xiàn)和作用機(jī)制的研究屢見不鮮,然而關(guān)于新鮮烏頭草中毒的實(shí)驗(yàn)研究很少。本文就新鮮烏頭草的急性毒性進(jìn)行了報(bào)道,可為臨床治療烏頭草中毒病人的治療提供依據(jù),為制定《防治烏頭草中毒的指南》提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和基礎(chǔ)。

        材料與方法

        1.受試藥物:天山烏頭草新鮮莖葉500 g,由新疆哈密市紅星醫(yī)院醫(yī)務(wù)科主任管小江老師鑒定提供。加入適量液氮,冷凍粉碎,再加入 500 m l蒸餾水榨汁,過(guò)濾收集到600 m l烏頭草汁液。-80℃冷藏備用。

        2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:昆明種小鼠120只,雌雄各半,體重18~22 g,由新疆地方疾病控制中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供,合格證號(hào):SCXK(新)2010-00103。在動(dòng)物房適應(yīng)5天后開始試驗(yàn)。

        3.實(shí)驗(yàn)方法:

        (1)預(yù)實(shí)驗(yàn):取體重18~22 g小鼠20只(雌雄各半),禁食不禁水12 h,分5組,每組4只。

        用5倍稀釋的不同劑量烏頭草汁灌胃,造成不同程度動(dòng)物死亡,參照文獻(xiàn)方法進(jìn)行 LD50的測(cè)定[2]。分別用0/4與 4/4致死劑量組,遞增或遞減一定比例的劑量,再次實(shí)驗(yàn),找出0%和100%死亡劑量的所在范圍。

        (2)急性毒性實(shí)驗(yàn):取體重18~22 g小鼠50只(雌雄各半),灌胃前禁食不禁水12 h,分5組,每組10只。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)的致死情況,計(jì)算出烏頭草汁中毒的相應(yīng)劑量,并由此配制出一系列不同濃度的藥液。將不同濃度的藥液分別給各組動(dòng)物灌胃給藥1次,均為20 m l/kg。給藥后每日觀察,連續(xù)2周,正常飲食。記錄動(dòng)物毒性反應(yīng)及死亡數(shù)。觀察的指標(biāo)包括一般指標(biāo):動(dòng)物外觀、行為、分泌物、排泄物;動(dòng)物死亡情況:死亡時(shí)間、瀕死前反應(yīng)。記錄所有的死亡情況、出現(xiàn)的癥狀以及癥狀起始的時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間、是否可逆。對(duì)于所有的試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行解剖,器官出現(xiàn)體積、顏色、紋理改變時(shí)記錄并進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

        (3)組織病理學(xué)檢查:用脊椎脫臼法處死小鼠,解剖并肉眼觀察心臟、腦、腎臟、肝臟各主要器官的變化,用10%的福爾馬林溶液固定、脫水、石蠟包埋、切片,經(jīng)HE染色,光鏡檢查。

        (4)離體心臟灌注模型[3]:取大鼠稱重,腹腔注射60 mmo l/L的水合氯醛(0.35 g/kg)麻醉。迅速開胸取出心臟,置于95%O2和5%CO2混合氣體充分飽和4℃的K-H(NaC l118.3 mmol/L、KCl 4.74mm ol/L、CaCl2 1.2 mmol/L、KH2 PO4 1.18 mmol/L、M gCl2 1.2mmol/L、NaHCO3 24.9 mm ol/L、Glucose(葡萄糖)11 mmol/L,HCl調(diào)節(jié)pH值為7.4)液中,然后將心臟固定于Langendoff裝置上,用95%O2和5% CO2混合氣體充分飽和的 K-H緩沖液恒壓逆行灌流。剪開左心耳,球囊從左心耳插入左心室,球囊內(nèi)壓調(diào)至5~10 mm Hg。球囊導(dǎo)管連接壓力換能器,與生物多導(dǎo)儀相連,連續(xù)記錄心功能左心室舒張壓(LVEDP)、左心室收縮壓(LVSP)、左心室發(fā)展壓(LVDP,LVDP=LVSP-LVEDP),生物記錄軟件自動(dòng)分析左心室壓力升高速率 、左心室壓力降低速率以及心率(H R),以計(jì)滴器實(shí)時(shí)記錄冠脈流量(CF)。

        新鮮烏頭草灌注離體心臟分組給藥處理如下:①對(duì)照組:以K-H液平衡灌流100 min;②高劑量組:以K-H液平衡灌流30 min,改用含75μg/m l天山烏頭草的K-H液灌流10 m in,以K-H液再灌流60 min;③中劑量組:以K-H液平衡灌流30 min,改用含70μg/m l天山烏頭草的K-H液灌流10 min,以K-H液再灌流60m in;④低劑量組:以K-H液平衡灌流30 min,改用含60μg/m l天山烏頭草的K-H液灌流10 m in,以K-H液再灌流60 min。以生理記錄儀記錄灌流全過(guò)程心功能變化情況,以軟件自動(dòng)分析再灌注 5 m in、10 min、20 m in、30 min、40 m in、50 m in和60 m in時(shí)間點(diǎn)各指標(biāo)情況以反映心功能狀況。以給藥前30 min數(shù)值為基礎(chǔ)值100%,實(shí)驗(yàn)結(jié)果以缺血前心功能百分率表示。

        治療結(jié)果

        1.組織病理學(xué)檢查結(jié)果:組織切片檢查各器官均無(wú)明顯差異。

        2.離體心臟灌注數(shù)據(jù):

        (1)新鮮烏頭草對(duì)心率的影響:與對(duì)照組相比,給藥組給藥開始的很短的時(shí)間內(nèi)心臟有明顯心率失常;隨著時(shí)間的增加,心臟心率有升高的現(xiàn)象。具體見表1。

        表1 烏頭草給藥后各組間心率變化情況

        (2)新鮮烏頭草對(duì)左心室發(fā)展壓的影響:與對(duì)照組相比,給藥組在給藥后短時(shí)間內(nèi)下降,停藥之后略有恢復(fù),具體見表2。說(shuō)明烏頭草使得心肌收縮功能明顯下降。

        表2 烏頭草給藥后各組之間LVDP變化情況

        (3)新鮮烏頭草對(duì)冠脈流量的影響見表3。

        表3 烏頭草給藥后各組之間CF變化情況

        與對(duì)照組相比,給藥組在給藥后冠脈流量呈下降趨勢(shì),停藥后沒有恢復(fù),仍有降低的趨勢(shì)。

        結(jié)論

        綜上所述,在烏頭草對(duì)小鼠急性毒性中灌胃給藥的LD 50是7.749 g/kg。可能由于烏頭草急性毒性發(fā)作時(shí)間較短,沒有明顯的組織學(xué)變化。通過(guò)離體心臟灌流實(shí)驗(yàn)表明,給藥后心臟心率失常,左心室發(fā)展壓下降,冠脈流量下降,再次證明了烏頭草導(dǎo)致小鼠死亡的主要原因是其心臟毒性。

        [1]管小江,李光來(lái),張忠民,等.新疆天山烏頭草急性中毒41例臨床救治探討.中國(guó)民間療法,2009,17(5):52-53.

        [2]黃世佐,明海霞,劉家駿,等.單葉細(xì)辛的急性毒性觀察及半數(shù)致死量的測(cè)定.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2005,12(9): 23-25.

        [3]Ji,Y.,Pang,Q,F.,Guang Xu,et al.Exogenous hydrogen sulfide postconditioning protects isolated rathearts against ischem ia-reperfusion injury.European Journal of Pharmaco logy,2008,587:1-7.

        新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)科委2009年科技計(jì)劃(2009GG52)

        2011-02-03)

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