李 波 宋順鵬 史月君

遼寧省大連市皮膚病醫(yī)院(遼寧大連116021）

雷公藤治療作用廣泛，療效獨(dú)特，毒性甚大。本研究綜合中醫(yī)相殺、解毒、佐制、調(diào)和、扶正配伍諸法，結(jié)合雷公藤毒性靶標(biāo)選取藥物，組成復(fù)方雷公藤湯，拆方實(shí)驗(yàn)干預(yù)腎病綜合征，探討配伍減毒增效的可行性，篩選最佳藥物組合。減毒以血液白細(xì)胞（WBC）、血小板（PLT）為考察指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取普通級(jí)wistar大鼠110只 (遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），雌雄各半（均為雌性），體質(zhì)量（200±10）g，7~8周齡,未曾交配。動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（遼）2004-0016。

1.2 藥物與試劑 中藥：雷公藤（福建）、何首烏（四川）、當(dāng)歸（甘肅）、黃芪（內(nèi)蒙古）、金錢(qián)草（浙江）、甘草（內(nèi)蒙古），購(gòu)于沈陽(yáng)天益堂藥房。注射用鹽酸阿霉素：10mg/支，浙江海正藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)060504。強(qiáng)地松片：5mg/片，天津太平洋制藥有限公司，批號(hào)060401。20%烏拉坦：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)臨床藥理基地提供。

1.3 主要儀器 ES-J系列電子分析天平：沈陽(yáng)龍騰電子稱(chēng)量?jī)x器公司、SF 3000血細(xì)胞分析儀、Sigma冷凍離心機(jī)。

1.4 分組與造模 將大鼠完全隨機(jī)化原則分為11組：其中腎病模型組9組（雷公藤組、雷何組、雷歸組、雷芪組、全方組、雷金組、雷甘組、強(qiáng)地松組、模型空白組），空白組2組（正?？瞻捉M、正常雷公藤組），每組10只，分籠飼養(yǎng)。參照Fermandez-Llama等［1］方法，一次性尾靜脈注射阿霉素復(fù)制大鼠微小病變腎病模型,其形態(tài)學(xué)改變和臨床表現(xiàn)與人的微小病變腎病相似。模型組：非麻醉下按6.5mg/kg一次性尾靜脈注射2%阿霉素0.65mL。模型評(píng)估：造模3d后大鼠逐漸出現(xiàn)食欲減退、行動(dòng)遲緩、皮毛無(wú)光澤、腹水、煩躁廝咬。造模7d后用代謝籠收集24h尿液測(cè)尿蛋白定量，呈漸進(jìn)性增多。與文獻(xiàn)報(bào)道一致，造模成功。

1.5 給藥方法 空白組：同法注射0.65mL生理鹽水。6味中藥按大鼠-人體表面積換算法確定各藥劑量。全方和拆方各藥劑量均相同：雷公藤 60g，何首烏 39.2g，黃芪 49g，當(dāng)歸 19.6g，甘草19.6g，金錢(qián)草68.6g。各方入水量2000mL，先煎雷公藤1h后下諸藥，常規(guī)煎煮2次，去藥渣后合并藥液，濃縮成300mL。各方含生藥量分別為：雷公藤方0.2g/mL、雷何方0.33g/mL、雷歸方0.264g/mL、雷芪方 0.363g/mL、全方 0.853g/mL、雷金方 0.428g/mL、雷甘方0.264g/mL。各組從造模第15日起開(kāi)始灌胃2mL，每日1次。強(qiáng)地松組將強(qiáng)地松片按5mg/kg溶成2mL溶液灌胃。

1.6 標(biāo)本采集與檢測(cè) 眶靜脈取血，毛細(xì)采血管沿目外眥快速進(jìn)入采1滴在EDTA-2Na抗凝，混勻，立即進(jìn)行血細(xì)胞檢測(cè)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0軟件，試驗(yàn)結(jié)果為正態(tài)分布，滿足方差齊性，以表示，采用配對(duì)t檢驗(yàn)和兩組獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間差異顯著性檢驗(yàn)用單因素方差分析,組間比較用SNK（q）檢驗(yàn),各處理組與對(duì)照組比較用Dunnett t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠干預(yù)前后對(duì)尿蛋白的影響 見(jiàn)表1。 全方組、雷芪組、雷甘組治療24h尿蛋白較模型雷公藤組減少（P＜0.05），起到增效作用。

表1 各組大鼠干預(yù)前后24h尿蛋白比較 （mg/24h

表1 各組大鼠干預(yù)前后24h尿蛋白比較 （mg/24h

與模型空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與本組治療前比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型雷公藤組比較，▲P＜0.05。

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2.2 各組大鼠干預(yù)后對(duì)白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板的影響 見(jiàn)表2。 全方組、雷何組、雷芪組、雷甘組、雷歸組、雷金組較模型雷公藤組WBC、PLT差異顯著（P＜0.05），起到減低血液系統(tǒng)毒性作用。各配伍組均有對(duì)抗雷公藤血液系統(tǒng)毒性，全方組、雷何組、雷金組較雷芪組、雷歸組和雷甘組好。

表2 各組大鼠干預(yù)后白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板比較

表2 各組大鼠干預(yù)后白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板比較

與模型雷公藤組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

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3 討 論

對(duì)有毒中藥實(shí)施減毒增效，歷代發(fā)明了炮制減毒法、配伍減毒法、煎煮減毒法、調(diào)節(jié)用量減毒法、服法減毒法等。配伍減毒法又派生相殺減毒法、佐制減毒法、解毒減毒法、調(diào)和減毒法、扶正減毒法等。復(fù)方雷公藤湯據(jù)諸法組合而成，含雷公藤20g，制何首烏 20g，炙黃芪 25g，酒當(dāng)歸 10g，金錢(qián)草 35g，生甘草 10g，功用解毒化濁，益氣養(yǎng)血，利水消腫。以雷公藤活血解毒、消腫除濕為君藥。何首烏、黃芪和當(dāng)歸三藥補(bǔ)氣血，益精血，扶正以防雷公藤戕伐之害，共為臣藥。金錢(qián)草清熱解毒、利水消腫，助君藥之力，兼殺其毒，為佐藥。甘草補(bǔ)中益氣以扶正，解藥毒緩君藥之性，另可調(diào)和諸藥，故為使藥。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在減少尿蛋白方面，雷芪組和雷甘組效果優(yōu)于其他配伍組，推測(cè)是黃芪、甘草參與免疫調(diào)節(jié)和具有皮質(zhì)激素樣作用。正常雷公藤組2周后出現(xiàn)尿蛋白，較正常空白組有統(tǒng)計(jì)意義，提示長(zhǎng)期服雷公藤對(duì)腎臟確有損害。

在降低血液系統(tǒng)毒性方面，防止WBC、PLT下降，雷何組、雷金組較雷芪組、雷歸組、雷甘組好。金錢(qián)草殺雷公藤毒，何首烏有促進(jìn)造血功能，何首烏對(duì)小鼠粒系祖細(xì)胞的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，可使骨髓造血干細(xì)胞明顯增加，顯著提高?！獑蜗底婕?xì)胞產(chǎn)生率，使骨髓紅系祖細(xì)胞值明顯升高。何首烏提取物可使外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞比例上升。研究表明，黃芪多糖能升高正常大鼠RBC比容，增加紅細(xì)胞數(shù)。黃芪能升高血虛模型大鼠紅細(xì)胞比容，升高血虛模型小鼠的血紅蛋白含量，紅細(xì)胞比容。還能防治因輻射而造成的外周血白細(xì)胞、骨髓有核細(xì)胞數(shù)量的減少，促進(jìn)造血干細(xì)胞分化和增殖。當(dāng)歸補(bǔ)血功效與其促進(jìn)機(jī)體造血功能有關(guān)。當(dāng)歸能促使外周血紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血紅蛋白等含量增加，對(duì)因化學(xué)藥物引起的骨髓造血功能抑制，當(dāng)歸促造血作用更為顯著。當(dāng)歸多糖是促進(jìn)造血功能的主要有效成分之一。當(dāng)歸能顯著增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，對(duì)環(huán)磷酰胺或強(qiáng)地松引起的吞噬功能降低有對(duì)抗作用。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方雷公藤湯及拆方對(duì)腎病大鼠確有減毒作用，其降低腎病尿蛋白起到了增效作用；減低血液系統(tǒng)毒性以全方、雷何組、雷金組為佳。綜合毒效分析，全方組為毒效最優(yōu)化復(fù)方,為本方臨床應(yīng)用和新藥開(kāi)發(fā)提供了前期研究基礎(chǔ)。

［1］ Fernandez Llama P,Andrews P,Nielsen S,et al.Impairedaquapor2inandureatransporter expression in rats with adriamycin-inducene phroticsyndrome［J］.Kidney Int,1998,53（5）:1244-1253.