高鵬 張麗娜 吳愛軍

慢性肺源性心臟病患者血小板糖蛋白CD61、CD62p表達(dá)及應(yīng)用丹紅的影響

高鵬 張麗娜 吳愛軍

目的 通過檢測慢性肺源性心臟病(簡稱肺心病)患者在使用丹紅治療前、后血小板CD61、CD62p表達(dá)水平變化,探討丹紅注射液在肺心病治療中的作用。方法 將入選的肺心病患者分為治療組和對(duì)照組,治療前、后采靜脈血,在流式細(xì)胞儀下,檢測 CD61、CD62p陽性血小板百分率,對(duì)比兩組患者治療前、后血小板CD61、CD62p表達(dá)和血小板活化狀態(tài)變化。結(jié)果 肺心病患者治療組治療前CD61、CD62p陽性血小板百分率分別為(85.23±4.51)%,(46.73±6.68)%,丹紅治療7 d后,陽性血小板百分率分別為(79.65±6.74)%,(41.69±7.86)%,肺心病患者對(duì)照組治療前陽性血小板百分率分別為(83.79±4.92)%,(48.25±4.84)%,對(duì)照組治療7 d后,陽性血小板百分率分別為(82.93± 5.02)%,(47.41±5.37)%,兩組患者治療前CD61、CD62p陽性血小板百分率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,丹紅治療前、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 丹紅注射液可抑制肺心病患者外周血小板表面 CD61、CD62p表達(dá),血小板活性下降。

肺心病;CD61;CD62p;血小板活化;丹紅注射液

有資料顯示,在肺心病死亡患者的尸檢中約有 89.8%的病例存在著肺細(xì)小動(dòng)脈原位血栓形成[1]。表明肺心病患者易致血栓形成。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)肺心病患者血小板表面CD61、CD 62p表達(dá)增強(qiáng),體內(nèi)存在血小板活化,這可能是導(dǎo)致血栓形成的一個(gè)主要原因,故肺心病患者在治療過程中,抑制血小板表面CD 61、CD62p表達(dá)對(duì)防止肺血栓形成,有重要意義。本研究比較肺心病患者在使用丹紅治療前、后血小板CD61、CD 62p表達(dá)水平變化,探討丹紅注射液在肺心病治療中的作用。

1 材料與方法

1.1 病例資料 2009年 10月至 2010年 2月間于長春市中心醫(yī)院呼吸科住院的肺心病急性發(fā)作患者 60例,男 46例,女14例,年齡 52～71歲,平均 61.5歲。共分兩組,治療組 30例和對(duì)照組 30例。對(duì)照組在入院時(shí)及治療后 7 d采血,本組患者治療方案為抗炎、化痰、平喘、改善通氣、保護(hù)胃黏膜治療。治療組加用丹紅注射液(濟(jì)南步長制藥有限公司)治療,其余采血時(shí)間、治療方案與對(duì)照組相同。臨床診斷符合 1977年全國第二次肺心病專業(yè)會(huì)議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)。所有觀察者均無慢性肝腎疾病、糖尿病、心腦血管及血液系統(tǒng)疾病,未使用阿司匹林、潘生丁、肝素等影響血小板功能的藥物。

1.2 試劑與儀器 ①Beckman-Coulter公司生產(chǎn)的EPICS ELITE型流式細(xì)胞儀;②北京離心機(jī)廠生產(chǎn)LDZ-5-2型自動(dòng)平衡離心機(jī);③日本三洋MPR-510型試劑冷藏柜;④異硫氫酸熒光素(FITC)標(biāo)記的抗CD 61(Beckman-Coulter公司)單克隆抗體(Beckman-Cou lter公司),藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的抗CD 62p單克隆抗體(Beckman-Coulter公司);⑤PBS緩沖液(本室自配)。

1.3 檢測步驟 ①取EDTA-K 2抗凝血5μl分別加入對(duì)照管和檢測管管底,再加入100μl PBS;②取同型陰性對(duì)照 10μl加入對(duì)照管,取CD 61-FITC和CD 62p-PE各10μl加入到檢測管,輕輕混勻,室溫避光孵育15 min;③加入2～3 ml PBS (1.0%PFA)終止反應(yīng);④24 h內(nèi)上機(jī)分析。

1.4 分析方法 ①統(tǒng)計(jì)學(xué)比較治療組與對(duì)照組治療前CD61、CD 62p陽性血小板百分率;②統(tǒng)計(jì)學(xué)比較治療組治療前、后CD 61、CD 62p陽性血小板百分率;③統(tǒng)計(jì)學(xué)比較對(duì)照組治療前、后CD 61、CD 62p陽性血小板百分率;④CD61,CD62p陽性血小板百分率用均值 ±標(biāo)準(zhǔn)差（±s)表示,統(tǒng)計(jì)學(xué)比較采用 t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

表1 兩組治療前后CD61,CD 62p陽性血小板百分率比較

2.1 CD61的表達(dá)

2.1.1 治療組治療前CD61陽性血小板百分率(85.23± 4.51)%,對(duì)照組治療前(83.79±4.92)%,t=1.18,組間比較P＞0.05。

2.1.2 治療組治療前CD61陽性血小板百分率(85.23± 4.51)%,治療組治療后(79.65±6.74)%,t=3.77,組間比較P＜0.05。

2.1.3 對(duì)照組治療前CD61陽性血小板百分率(83.79± 4.92)%:對(duì)照組治療后(82.93±5.02)%,t=0.67,組間比較P＞0.05。

2.2 CD62p的表達(dá)

2.2.1 治療組治療前CD62p陽性血小板百分率(46.73± 6.68)%,對(duì)照組治療前(48.25±4.84)%,t=1.01,組間比較P＞0.05。

2.2.2 治療組治療前CD62p陽性血小板百分率(46.73± 6.68)%,治療組治療后(41.69±7.86)%,t=2.67,組間比較P＜0.05。

2.2.3 對(duì)照組治療前CD62p陽性血小板百分率(48.25± 4.84)%,對(duì)照組治療后(47.41±5.37)%,t=0.63,組間比較P＞0.05。

3 討論

血小板活化表達(dá)出多種分子標(biāo)志物,CD 61、CD 62p是最具特異的血小板活化分子標(biāo)志物。CD61介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)相互作用的表面糖蛋白,靜息及活化血小板表面均有大量GPⅡb/Ⅲa分子表達(dá),當(dāng)強(qiáng)烈的激活劑刺激血小板活化時(shí),以隱蔽狀態(tài)分布的 GPⅡb/Ⅲa也表達(dá)在血小板表面[2]。CD 62p是血管黏附分子家族中的一員,主要儲(chǔ)存在血小板α顆粒及中等以上大血管內(nèi)皮細(xì)胞的Weiber-Palade小體內(nèi),當(dāng)血小板和血管內(nèi)皮細(xì)胞受到凝血酶、組胺、TNF-α、缺氧、氧自由基等刺激后,α顆粒和Weiber-Palade小體質(zhì)膜迅速與細(xì)胞膜融合,幾秒至幾分鐘內(nèi) CD 62p在細(xì)胞表面表達(dá)到高峰[3-5]。CD 62p是血小板活化最特異的分子標(biāo)志,其表達(dá)強(qiáng)度在活化和非活化血小板之間差別最明顯[6],因此是目前最常用的血小板活化標(biāo)志物。有研究報(bào)道,肺心病患者由于感染、缺氧、氧自由基、組胺等作用,CD 61、CD 62p表達(dá)增加,血小板存在明顯活化,并參與、促進(jìn)肺心病患者微小血栓形成,加重肺動(dòng)脈高壓。

丹紅注射液的君藥丹參,臣藥紅花,其活性成分可擴(kuò)血管,抑制血小板,增加纖維蛋白的溶解活性,抑制血栓形成[7],丹紅亦可有效保護(hù)細(xì)胞免受由缺血引發(fā)的氧化損傷及內(nèi)皮屏障完整性。本實(shí)驗(yàn)中觀察了應(yīng)用丹紅治療肺心病患者前、后血小板表面CD 61、CD62p表達(dá)變化,結(jié)果顯示血小板表面CD61、CD 62p表達(dá)下降,較對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示在肺心病患者治療過程中,可以應(yīng)用丹紅改善微循環(huán)、抑制血小板聚集、緩解肺動(dòng)脈高壓、減輕心功能不全,達(dá)到改善預(yù)后,縮短治療療程的作用。

[1] 王辰,杜敏捷.慢性肺源性心臟病急性發(fā)作期肺細(xì)小動(dòng)脈血栓形成的病理觀察.中華醫(yī)學(xué)會(huì)雜志,1997,02:44-46.

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[7] 陳克永.丹紅注射液對(duì)血液流變學(xué)影響的臨床觀察.中國現(xiàn)代醫(yī)生,2008,04:97.

130051長春市中心醫(yī)院干部一療區(qū)(高鵬),消化內(nèi)科(張麗娜)