胡 偉

株洲中醫(yī)傷科醫(yī)院關(guān)節(jié)外科，湖南株洲 412000

內(nèi)臟脂肪組織來源的絲氨酸蛋白酶抑制劑（visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor，Vaspin）是一種新發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞因子，它屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑Serpin家族[1]。先前的研究表明Vaspin與胰島素抵抗（IR）、肥胖以及2型糖尿?。═2DM）的發(fā)病密切相關(guān)[2-4]。近年來Seeger等研究發(fā)現(xiàn)長期行血液透析治療的患者血清C反應(yīng)蛋白（CRP）水平與血清Vaspin水平呈獨(dú)立負(fù)相關(guān)，而且是血清Vaspin濃度的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子[5]。Ladislav Senolt等研究也發(fā)現(xiàn)RA患者滑膜液Vaspin水平明顯高于骨關(guān)節(jié)炎患者[6]。提示血清Vaspin可能與炎癥反應(yīng)有關(guān)，在RA的發(fā)病中具有重要的作用。然而Vaspin在RA發(fā)生和發(fā)展中的作用機(jī)制目前并不十分清楚。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一個(gè)累及周圍關(guān)節(jié)為主的多系統(tǒng)炎癥性的自身免疫病，病因不明。其特征為多個(gè)對(duì)稱性周圍關(guān)節(jié)的慢性炎癥病變，最常侵犯的部位是四肢小關(guān)節(jié)，可引起全身的關(guān)節(jié)腫脹疼痛及功能障礙，病變呈持續(xù)、反復(fù)發(fā)作的過程。本實(shí)驗(yàn)中，觀察RA患者與正常人血清中Vaspin及相關(guān)炎性細(xì)胞因子濃度的差別，分析RA與相關(guān)炎性細(xì)胞因子的關(guān)系，從而探討Vaspin在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生過程中可能的作用機(jī)制，進(jìn)一步闡明Vaspin的生理功能。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2009年9月～2010年12月我院門診或住院的RA患者60例作為RA組，所有患者均符合美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（ARA）1987年修訂的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)。RA患者按病情活動(dòng)分為RA活動(dòng)亞組（32例）和非活動(dòng)亞組（28例）。活動(dòng)RA患者活動(dòng)性指標(biāo)包括：晨僵＞30 min；3個(gè)以上關(guān)節(jié)腫脹；5個(gè)或5個(gè)以上關(guān)節(jié)壓痛；血沉＞30 mm/h。RA患者年齡18～75歲，平均（50.4±9.0）歲；BMI 18.2～29.0 kg/m2，平均（20.5±2.3） kg/m2。 正常對(duì)照組28例，為健康體檢或自愿者，年齡20～70歲，平均（49.8±8.5）歲，BMI17.9～30.0kg/m2，平均（21.0±2.3） kg/m2。 兩組的年齡、性別及BMI比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所有患者及對(duì)照組均無高血壓、糖尿病、腫瘤、妊娠、內(nèi)分泌疾病及其他自身免疫病。

1.2 標(biāo)本采集及檢測(cè)方法

受試者隔夜14 h采集空腹靜脈血5 ml。其中1 ml用15%EDTA-K2?？鼓笤贏LIFAXS.P.A公司的TEST-I型全自動(dòng)血沉儀上測(cè)定血沉（ESR），其余4 ml離心后分離血清，置-70℃冰箱保存用于其他項(xiàng)目檢測(cè)。α1-酸性糖蛋白（α1-acid Glycoprotein，AAG）和 C-反應(yīng)蛋白（CRP）測(cè)定采用免疫比濁法，在IMMAGE儀器上檢測(cè)，試劑由美國貝克曼庫爾特公司提供。類風(fēng)濕因子（RF）測(cè)定采用免疫速率散射比濁法（上海申能公司）。腫瘤壞死因子α（TNF-α）測(cè)定采用放射免疫分析（RIA）法。空腹血清Vaspin濃度采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定（北京愛迪博生物科技有限公司藥盒）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 16.0軟件完成，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)均經(jīng)過自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換。組內(nèi)自身對(duì)比與兩組間對(duì)比用t檢驗(yàn)，指標(biāo)間的關(guān)系判定采用直線相關(guān)分析及多元線性回歸分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RA組與對(duì)照組生化指標(biāo)比較

RA 組 ESR、AAG、CRP、RF、TNF-α 顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。 見表1。

2.2 血清Vaspin水平比較

2.2.1 RA組與對(duì)照組血清Vaspin水平比較 RA組血清Vaspin水平明顯高于對(duì)照組[（1.58±0.20） μg/L vs（0.71±0.09） μg/L]（P＜0.01）。 見圖 1。

表1 RA組與對(duì)照組臨床生化指標(biāo)比較（±s）

表1 RA組與對(duì)照組臨床生化指標(biāo)比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.01

RA組對(duì)照組組別 例數(shù) TNF-α（μg/L）60 28 2.37±0.80*0.90±0.33 AAG（mg/L）1328.2±272.6*491.0±180.70 CRP（mg/L）17.53±4.08*8.40±2.23 RF（IU/ml）29.01±2.64*9.05±1.84 ESR（mm/h）34.70±11.05*11.93±5.76

2.2.2 RA患者活動(dòng)亞組與非活動(dòng)亞組血清Vaspin水平比較 RA患者活動(dòng)亞組血清Vaspin水平明顯高于非活動(dòng)亞組[（1.98±0.15 ） μg/L vs（1.32±0.12） μg/L]（P＜0.01）。 見圖 2。

2.2.3 不同性別血清Vaspin水平比較 RA組和對(duì)照組中所有女性患者血清Vaspin高于男性患者，其中，RA組、對(duì)照組中女性患者血清Vaspin分別低于男性患者，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 血清Vaspin水平與其他指標(biāo)相關(guān)性分析

RA組血清Vaspin與TNF-α及CRP呈正相關(guān)（r=0.64，P＜0.01；r=0.47，P＜0.05）。 以血清 Vaspin 為因變量， 以 ESR、AAG、CRP、RF、TNF-α為自變量進(jìn)行多元回歸分析表明，RA組人群中TNF-α是影響空腹血清Vaspin水平的獨(dú)立相關(guān)因素（YVaspin=7.350+0.082XTNF-α）。

3 討論

近年來研究表明脂肪因子如 leptin、adiponectin、resistin、visfatin不僅參與糖脂代謝的調(diào)節(jié)，而且在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)及炎癥反應(yīng)中具有重要作用并與RA發(fā)病及RA的嚴(yán)重程度密切相關(guān)[7-12]。Vaspin是由內(nèi)臟脂肪組織分泌的一種屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族的細(xì)胞因子，與肥胖和胰島素敏感性有關(guān)。Ladislav Senolt等研究發(fā)現(xiàn)RA患者滑膜液Vaspin水平明顯高于骨關(guān)節(jié)炎患者，滑膜液Vaspin水平與DAS28有相關(guān)的趨勢(shì)[6]。提示血清Vaspin可能在RA患者炎癥反應(yīng)中發(fā)揮了重要的作用。為此，本研究測(cè)定了RA患者血清Vaspin水平，并與正常人群進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RA患者血清Vaspin水平明顯高于對(duì)照組，RA患者活動(dòng)亞組血清Vaspin水平明顯高于非活動(dòng)亞組。這進(jìn)一步提示Vaspin參與了RA的發(fā)病，在RA的發(fā)病機(jī)制中具有重要的作用。

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）是一種以關(guān)節(jié)組織慢性炎癥性病變?yōu)橹饕憩F(xiàn)的自身免疫性疾病，其關(guān)節(jié)壓痛、腫脹都與炎癥存在一定關(guān)系，許多細(xì)胞因子參與了其病理過程，其中腫瘤壞死因子（TNF-α）被認(rèn)為在RA的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中起中心作用，通過多種途徑參與關(guān)節(jié)的炎癥反應(yīng)，促進(jìn)滑膜細(xì)胞增殖和介導(dǎo)關(guān)節(jié)軟骨及骨質(zhì)損害；α1-酸性糖蛋白（AAG）和CRP一樣，都屬于急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，可反映RA病情的活動(dòng)性，可作為判斷RA疾病活動(dòng)性的指標(biāo)之一；CRP、血沉（ESR）、類風(fēng)濕因子（RF）均已被認(rèn)為與本病活動(dòng)性有一定關(guān)系。目前證據(jù)表明上述細(xì)胞因子在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者中均有異常升高。

本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 RA 患者 ESR、AAG、CRP、RF、TNF-α較正常對(duì)照組明顯增高，這與國內(nèi)外相關(guān)研究結(jié)果類似。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)血清Vaspin水平與TNF-α、CRP成明顯正相關(guān)，而與AAG、ESR、RF無相關(guān)性。多元回歸分析表明血清TNF-α是影響RA患者血清Vaspin水平的獨(dú)立相關(guān)因素。這些結(jié)果進(jìn)一步提示Vaspin與RA的發(fā)生和發(fā)展可能具有重要的關(guān)系。但是促進(jìn)炎癥發(fā)生還是對(duì)炎癥具有抑制作用現(xiàn)在也沒有明確的定論。本研究通過查閱文獻(xiàn)及歸納分析，推測(cè)Vaspin可能在RA患者炎癥反應(yīng)中對(duì)機(jī)體發(fā)揮一定的保護(hù)作用，其升高可能提示了其在炎癥狀態(tài)下的一種代償機(jī)制，這與2型糖尿病患者及肥胖患者血清Vaspin水平升高是IR的一種代償性機(jī)制相類似，但其作用的具體環(huán)節(jié)及機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

實(shí)驗(yàn)中筆者還發(fā)現(xiàn)女性血清Vaspin水平較男性有升高趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。直線相關(guān)分析也提示了血清Vaspin水平與性別不相關(guān)。這在文獻(xiàn)中也有報(bào)道，但原因還未明了，可能是女性雌激素和孕激素對(duì)脂肪細(xì)胞分泌具有促進(jìn)作用。

綜上所述，本研究結(jié)果表明RA患者血清Vaspin水平明顯升高，與炎癥反應(yīng)指標(biāo)TNF-α、CRP成明顯正相關(guān)。因此，筆者推測(cè)Vaspin可能是一種在RA患者炎癥反應(yīng)中對(duì)機(jī)體發(fā)揮保護(hù)作用的脂肪細(xì)胞因子，而其具體的作用機(jī)制，尚需進(jìn)一步研究。

[1]Hida K,Wada J,Eguchi J,et a1.Visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor：a unique insulin-sensitizing adipocytokine in obesity[J].Proc Natl Acad Sci,2005,102(30)：10610-10615.

[2]Zvonic S,Lefevre M,Kilroy G,et al.Secretome of primary cultures of human adipose-derived Stem cells：modulation of serpins by adipogenesis[J].Mol Cell Proteomics,2007,6(1)：18-28.

[3]Kloting N,Berndt J,Kralisch S,et al.Vaspin gene expression in human adipose tissue：association with obesity and type 2 diabetes[J].Biochem Biophys Res Commum,2006,339(1)：430-436.

[4]Youn BS,Kloting N,Kratzsch J,et al.Serum vaspin concentrations in human obesity and type 2 diabetes[J].Diabetes,2008,57(2)：372-377.

[5]Seeger J,Ziegelmeier M,Bachmann A,et a1.Serum levels of the adipokine vaspin in relation to metabolic and renal parameters[J].J Clin Endocrinol Metab,2008,93(1)：247-251.

[6]Senolt L,Polanska M,Filkova M,et a1.Vaspin and omentin：new adipokines differentially regulated at the site of inflammation in rheumatoid arthritis[J].Ann Rheum Dis,2010,69(7)：1410-1411.

[7]Lago F,Dieguez C,Gomez Reino J,et al.Adipokines as emerging mediators of immune response and inflammation[J].Nat Clin Pract Rheumatol,2007,3(12)：716-724.

[8]Tilg H,Moschen AR.Adipocytokines：mediators linking adipose tissue,inflammation and immunity[J].Nat Rev Immunol,2006,6(10)：772-783.

[9]Bokarewa M,Bokarew D,Hultgren O,et al.Leptin consumption in the inflamed joints of patients with rheumatoid arthritis[J].Ann Rheum Dis,2003,62(10)：952-956.

[10]Schaffler A,Ehling A,Neumann E,et al.Adipocytokines in synovial fluid[J].JAMA,2003,290(13)：1709-1710.

[11]Senolt L,Housa D,Vernerova Z,et al.Resistin is abundantly present in rheumatoid arthritis synovial tissue,synovial fluid,and elevated serum resistin reflects disease activit[J].Ann Rheum Dis,2007,66(4)：458-463.

[12]Brentano F,Schorr O,Ospelt C,et al.Pre-B cell colony-enhancing factor/visfatin,a new marker of inflammation in rheumatoid arthritis with proinflammatory and matrix-degrading activities[J].Arthritis Rheum,2007,56(9)：2829-2839.