陳倩倩， 唐建陽

(福建省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)生物資源研究所， 福建 福州 350003)

自然界中能夠分泌乳汁的植物極為普遍，植物中的各種分泌細胞、分泌道、分泌腺起著隔離并貯存乳汁的作用。植物乳汁是植物的次生代謝產(chǎn)物，植物的次生代謝及其產(chǎn)物在植物與環(huán)境互作和整個生命活動中行使著重要的功能。它們構(gòu)成植物體系的一部分，參與植物的逆境脅迫反應(yīng)，在植物防御中起著重要作用[1]。植物乳汁作為植物次生代謝產(chǎn)物，具有抑菌抗蟲作用，許多植物的乳汁還具有重要的經(jīng)濟價值。

虎皮楠(Daphniphyllumoldhami)系金縷梅綱交讓木屬植物，能夠分泌乳汁，含有生物堿、黃酮和三萜等成分，主要化學成分是生物堿類[2]。目前從該科植物中分離到的生物堿已超過120種[3-6]。該科植物主要有愈合和消炎的作用，可以用來治療哮喘、風濕、發(fā)熱、流行性感冒、腸胃炎、濕疹等，對腫瘤細胞增殖也具有明顯的抑制作用[7-8]。杜仲(Eucommiaulmoides)產(chǎn)生杜仲膠的分泌細胞稱為含膠細胞，田蘭馨等于1990年首次經(jīng)過變性處理對杜仲含膠細胞進行了觀察[9]。但目前尚未有虎皮楠分泌細胞的相關(guān)研究報道。本實驗以杜仲含膠細胞為對照，對虎皮楠的分泌細胞分別作變性和不變性處理，觀察細胞分布、形態(tài)等生物學特征，為虎皮楠乳汁相關(guān)研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

選取生長健壯的虎皮楠和杜仲。

1.2 材料的固定

分別采集虎皮楠和杜仲的幼莖部位，用解剖刀切至約0.5 cm×0.5 cm大小,投入FAA中固定。之后用酒精梯度洗脫至無色，進行下步處理。

1.3 變性

脫水后組織在冰醋酸中浸泡后，放入變性劑(溴-碘-冰醋酸試劑)中室溫處理24 h。不做變性處理的材料放置于乙醇中。

1.4 透明

先將材料置于酒精二甲苯混合液，逐漸過渡到純二甲苯中，每次處理約1 h。

1.5 制作石蠟切片

組織透蠟后進行包埋。包埋好的蠟塊進行干燥處理。將蠟塊修至大小、角度合適后，用Leica RM2016切片，切片的厚度為7-10 μm。將明膠粘連劑涂于載玻片中央，蒸餾水展片。

1.6 染色

采用鐵釩-蘇木精染色法染色。

2 結(jié)果與分析

顯微觀察顯示，對照杜仲含膠細胞經(jīng)過變性處理后呈紅褐色(圖1A)，說明試驗方法是可行的。經(jīng)過變性處理的虎皮楠分泌細胞(圖1B)和未變性處理的分泌細胞都被染成紫紅色(圖2A)。

A.杜仲；B.虎皮楠圖1 經(jīng)變性處理的莖部Figure 1 Stem by denaturalization treatment

2.1 分泌細胞的形態(tài)學特征

虎皮楠幼莖分泌細胞的橫斷面多為圓形、橢圓形，少數(shù)為卵狀三角形、三角形、半圓形或不規(guī)則形(圖2A)；縱切面多為不規(guī)則的圓柱形(圖2B)，與周圍細胞相比較，分泌細胞較長。

2.2 分泌細胞在組織中的分布情況

從圖2A可以看出，虎皮楠的分泌細胞分布于形成層與皮層之間的組織，形成層以內(nèi)的韌皮部沒有發(fā)現(xiàn)分泌細胞，在皮層薄壁組織和靠近形成層的木質(zhì)部部分，分泌細胞的密度比較大。

A.橫切圖；B.縱切圖圖2 未經(jīng)變性處理的虎皮楠Figure 2 D.oldhami by no-denaturalization treatment

2.3 分泌細胞在組織中的密度

相同部位取材，放大100倍視野，在同樣面積內(nèi)(直徑0.5 μm)，觀察發(fā)現(xiàn)經(jīng)過變性處理的虎皮楠莖部的分泌細胞數(shù)目為52；未變性處理的分泌細胞數(shù)量為52.6。表明變性處理前后分泌細胞的數(shù)目大致相同。

2.4 乳汁成分在細胞內(nèi)的分布情況

從縱切圖可以看出，虎皮楠分泌細胞內(nèi)的乳汁呈顆粒狀，聚集貼近細胞膜分布(圖2B)；而杜仲分泌細胞中杜仲膠呈束狀分布于細胞內(nèi)部(圖1B)。虎皮楠乳汁的分布密度和緊實度遠小于杜仲膠。

3 結(jié)論

虎皮楠分泌細胞不需要經(jīng)過變性處理就可觀察到，細胞呈圓柱狀，分布于木質(zhì)部中，分泌細胞內(nèi)的乳汁成分呈顆粒狀分布，與杜仲分泌細胞(杜仲膠)不同。推測是由于2種分泌細胞分泌的乳汁成分不同。植物乳汁的成分復(fù)雜，構(gòu)成乳汁的粗分散相的成分可分為7類[10]，杜仲膠是一種以反式異戊二烯聚合物為主的硬性橡膠，虎皮楠乳汁所含成分可能沒有異戊二烯聚合物，而是其它次生代謝產(chǎn)物。因此，用變性劑處理虎皮楠分泌細胞不會產(chǎn)生異戊二烯聚合物所特有的硬化反應(yīng)?；⑵ら姆置诩毎植加谇o部的皮層與形成層之間，這個部位也是虎皮楠生物堿含量較為豐富的區(qū)域。研究人員已從虎皮楠科植物中分離鑒定出13種骨架類型的生物堿128個[2,11]，其中僅有少數(shù)生物堿對淋巴瘤細胞表現(xiàn)出強的抑制活性[8]。

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