劉金彪 王新征 侯永強(qiáng) 丁斌

七葉皂甙鈉對肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

劉金彪 王新征 侯永強(qiáng) 丁斌

為探討七葉皂甙鈉對肝臟缺血再灌注損傷的作用，通過預(yù)先對大鼠肝臟缺血再灌注模型靜脈注射七葉皂甙鈉，經(jīng)測定肝組織內(nèi)ATP、AMP、ADP的含量，肝臟的細(xì)胞能荷，及血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶，谷草轉(zhuǎn)氨酶，堿性磷酸酶、γ-GT等各項(xiàng)指標(biāo)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用藥組單純?nèi)毖俟嘧φ崭谓M織內(nèi)ATP含量高，損害較輕，結(jié)果表明:七葉皂甙鈉對肝臟缺血再灌注造成的損傷有明顯的預(yù)防作用。

肝臟;缺血再灌注;七葉皂甙

七葉皂甙系由婆羅子的干燥成熟果實(shí)中提取的一種皂甙制成。我們在原位肝臟缺血再灌注模型上，觀察七葉皂甙對I/R損傷的影響，旨在探討該藥減輕I/R，損傷的作用，為臨床應(yīng)用七葉皂甙鈉防治肝臟I/R損傷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 藥品及動物 注射用七葉皂甙鈉為武漢愛民制藥廠生產(chǎn)。雄性wistar大鼠25只，體重200～250 g，有同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法及觀察指標(biāo)

1.2.1 實(shí)驗(yàn)鼠隨機(jī)分3組:正常組9只，缺血再灌注組8只和七葉皂甙鈉治療組8只。實(shí)驗(yàn)前12 h進(jìn)食，飲水不限，采用戊巴比妥50 mg/kg體重腹腔麻醉，正中切口開腹，暴露肝門部，小血管夾阻斷尾狀葉及左葉肝臟血流，但不阻斷右葉血流。以防門靜脈及腸道淤血，待檢查肝組織標(biāo)本取自尾狀葉前部，用巾鉗暫時關(guān)閉腹腔，在阻斷血流40 min后，放開血管夾，再灌注2 h。正常對照組僅作肝門部血管稍分離而不阻斷。用藥組按20 mg/kg體重靜脈注射七葉皂甙鈉，分別在阻斷血流前及再灌注前10 min，各按上述劑量半量，從股靜脈緩慢推注。

1.2.2 肝組織ATP，ADP AMP的測定:取肝臟組織后標(biāo)本立即置液氮中冷凍保存至檢測，首先從液氮內(nèi)取出標(biāo)本立即稱重500 mg，加HclO4勻漿，置高速冷凍離心機(jī)內(nèi)1200轉(zhuǎn)/min共15 min，提取上清液，再加K2CO3，充分混勻，離心5000轉(zhuǎn)/min共10 min，取上清液，樣品處理完后，用高效液相色譜法檢測波長測定ATP，ADP，AMP含量。肝細(xì)胞的能量狀態(tài)用能荷表示，能荷的計(jì)算公式:

1.2.3 血清酶檢測取下腔靜脈血標(biāo)木送生化室測，ALT、AST、AKP、γ-GT 等

1.2.4 數(shù)據(jù)處理全部數(shù)據(jù)采用計(jì)算機(jī)SAS程序SLM過程處理。

2 結(jié)果

2.1 肝組織ATP、ADP、AMP及能荷變化，見表1。

2.2 肝功能檢測結(jié)果用七葉皂貳鈉治療組ALT、AST、AKP、γ-GT等均較缺血再灌注組下降差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表1 七葉皂貳鈉對缺血再灌注損傷肝細(xì)胞ATP、ADP、AMP含量及能荷影響(例，±s)

表1 七葉皂貳鈉對缺血再灌注損傷肝細(xì)胞ATP、ADP、AMP含量及能荷影響(例，±s)

注:△同對照組比P＜0.01，▲同對照組比P＞0.05，﹡同缺血再灌注組比P＜0.05

組別 例數(shù) ATP(g/mg) ADP(g/mg) AMP(g/mg)08 0.64±0.15 I/R損傷 8 724.03±143.09 2.89.04±303.05 4580.43±1734.08△ 0.25±0.07△藥物治療 8 1376.28±34.8 1610.36±510.21 317.94±241.32▲ 0.52±0.18 Engery charge對照 9 1081.99±155.08 898.53±323.8 1284.15±982.﹡

組別 例數(shù) ATP(g/mg) ADP(g/mg) AMP(g/mg)86±1.81 I/R損傷 8 2103.50±976.20 1485070±778.88△ 394.82±63.93 07.50±4.46△藥物治療 8 599.38±95.35 588.38±215.12﹡ 183.22±64.35 4.14±1.57 Engery charge對照 7 131.33±77.25 378.50±211.77 89.00±14.85 3.﹡

3 討論

缺血肝臟再灌注后，常使原缺血的組織細(xì)胞的損傷加重，謂之肝臟的缺血再灌注損傷，肝臟的I/R是臨床工作經(jīng)常面臨的一個問題，如休克后的肝臟功能衰竭，肝移植及肝臟損傷及腫瘤的手術(shù)等。雖然肝細(xì)胞的損害可直接由缺血引起，但大量的證據(jù)說明大部分損傷發(fā)生于再灌注［1］，造成肝臟I/R損傷的原因是多因素的且十分復(fù)雜［2，3］，臨床工作中尚無十分有效的預(yù)防措施。實(shí)驗(yàn)證明某些藥物可一定程度緩解損傷。七葉皂貳鈉具有抗?jié)B出、維持細(xì)胞膜穩(wěn)定性、恢復(fù)毛細(xì)血管正常通透性、改善微循的作用［4］。國內(nèi)張氏等的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，其抑制炎性滲出的作用為氫化可的松的4～5倍，并有抑制毛細(xì)血管通透性增加的作用，其強(qiáng)度為氫化可的松的7～8倍。具有對抗磷酸組織胺和緩激膚等炎性介質(zhì)的作用［6］。我們通過預(yù)先對大鼠肝臟I/R模型靜脈注射七葉皂甙鈉后，觀察到用藥組較組大鼠的肝細(xì)胞內(nèi)ATP含量明顯提高，能荷有所恢復(fù)，血清酶ALT、AST、AKP、γ-GT等的釋出減少實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明七葉皂貳鈉具有抗I/R損傷的作用，七葉皂甙鈉保護(hù)肝臟的機(jī)制尚不十分清楚，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果及該藥的藥理作用，我們推測七葉皂甙鈉可能通過以下幾個環(huán)節(jié)減輕I/R造成的損傷:

3.1 增加肝細(xì)胞的能量，抑制ATP的過分消耗。七葉皂貳鈉可顯著減少缺血再灌注大鼠肝細(xì)胞ATP含量及能荷的下降，進(jìn)而減少次黃喋吟大量堆積，因此可使再灌注時OFR的生成減少，七葉皂甙鈉增加肝細(xì)胞的能量，抑制了I/R生成的OFR啟動環(huán)節(jié)。

3.2 抗炎、維護(hù)細(xì)胞膜的穩(wěn)定性:七葉皂甙鈉可提高ACTH和皮質(zhì)酮類的血濃度，血液中，糖皮質(zhì)激素增加將會抑制水腫，毛細(xì)血管擴(kuò)張可減少中性白細(xì)胞數(shù)目抑制白細(xì)胞的附壁及移行血管外，并可抑制磷酸脂酶A2、花生四稀酸、白三稀等的形成這些物質(zhì)對化學(xué)趨向和炎癥起重要的作用［5，6］。

［1］ Parks DA，Granger DN.Contribution of ischemia and reperfusion to mucosal lesion formation.Am J Physiol，1986，250:749.

［2］ Ratych RE.Chukyiska RS，BullKley GB.The primary localization of free radical generation after anoxia/reoxy genetion in isolated endothehal cell.Surgery，1987，102:122.

［3］ Welbourn CRB.Goldman G，Paterson IS.Pathophysiogy of ischaemia reperfusion injury:rentral roal of the neutrophil.Br Sury，1991;78:651.

［4］ 新藥手冊.中國藥學(xué)雜志.天津科學(xué)技術(shù)出版社，1991，5:450-452.

［5］ 李家泰.臨床藥理學(xué).人民衛(wèi)生出版社，1991，799.

［6］ 張麗新.婆羅子皂甙的藥理研究.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，1997，7:337.

471003河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外三科