苗艷 閻磊 邵鳳民 曹慧霞 朱清

血漿可溶性P選擇素與炎癥因子對(duì)糖尿病腎病的影響

苗艷 閻磊 邵鳳民 曹慧霞 朱清

目的探討血漿可溶性P-選擇素(sP-selectin)及炎癥因子對(duì)糖尿病腎病的影響。方法138例糖尿病腎病患者根據(jù)尿白蛋白排泄率(UAER)分為正常蛋白尿組(DM組)、早期糖尿病腎病組(DN1組)及臨床糖尿病腎病組(DN2組)，收集相關(guān)臨床資料并檢測(cè)血漿糖化血紅蛋白(HbAlc)、空腹C肽(FCP)、三酰甘油(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、白介素6(IL-6)、UAER及sP-selectin。結(jié)果糖尿病病程、CRP、IL-6、UAER及sP-selectin在DM、DN1、DN2 3組間依次遞增，且組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);FCP的水平在DM、DN1、DN2 3組間依次遞減，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);在所有糖尿病患者中sP-selectin與糖尿病病程、LDL-C、CRP、IL-6、UAER呈正相關(guān)(r=0.17，P＜0.05;r=0.23，P＜0.05;r=0.39，P＜0.05;r=0.31，P＜0.05;r=0.56，P＜0.05);與FCP呈負(fù)相關(guān)(r=-0.35，P＜0.05)。多元線性回歸分析結(jié)果顯示FCP、IL-6、UAER是sP-selectin的獨(dú)立影響因素(P＜0.05)。結(jié)論可溶性P-選擇素與CRP、IL-6及LDL-C、FCP等一起參與了糖尿病腎病的發(fā)生及發(fā)展。

可溶性P-選擇素;炎癥因子;糖尿病腎病

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病的主要微血管病變，是糖尿病患者致殘、致死的主要原因。P-選擇素(P-selectin)是細(xì)胞黏附分子選擇素家族的重要成員，被認(rèn)為與糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展明顯相關(guān)［1］，但其作用機(jī)制仍不十分明確，可能與其介導(dǎo)的細(xì)胞黏附、血栓形成及促進(jìn)炎癥有關(guān)。本文通過對(duì)糖尿病腎病患者血漿中可溶性P-選擇素(soluble P-selectin，sP-selectin)及炎癥因子的研究了解P-選擇素及炎癥反應(yīng)對(duì)糖尿病腎病的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇符合WHO1999年2型糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，于2008年6月至2010年12月在我院內(nèi)分泌、腎病內(nèi)科門診和住院的2型糖尿病患者，所有患者血清肌酐(SCr)＜133 μmol/L，腎損害原因不明確者行經(jīng)皮腎活檢。排除標(biāo)準(zhǔn):合并其他原發(fā)性或繼發(fā)性腎臟疾病;進(jìn)入觀察期前4周內(nèi)曾合并感染性疾病、自身免疫性疾病、急性冠脈綜合征、嚴(yán)重肝功能不全、腦血管意外、惡性腫瘤;進(jìn)入觀察期前4周內(nèi)應(yīng)用抗血小板藥物、非甾體類抗炎藥、激素、免疫抑制劑等。入組患者共138例，根據(jù)尿白蛋白排泄率(UAER)分為3組: UAER＜30 mg/24 h為正常白蛋白尿組(DM組)，共45例，其中男21，女24例，平均年齡(56.1±16.8)歲，平均病程(4.8 ±2.4)年;UAER 30～300 mg/24 h為微量白蛋白尿組，即早期糖尿病腎病組(DN1組)共43例，其中男23例，女20例，平均年齡(58.7±16.4)歲，平均病程(6.8±4.7)年;UAER＞300 mg/24為大量白蛋白尿組，即臨床糖尿病腎病組(DN2組)共50例，其中男28例，女22例，平均年齡(61.3±22.1)歲，平均病程(9.6±6.2)年。

1.2 方法

1.2.1 收集患者一般資料如年齡，性別，糖尿病病程等?；颊咴谌虢M后第2天空腹12 h后抽取靜脈血，分離血清，測(cè)定血糖化血紅蛋白(HbAlc)、空腹C肽(FCP)、三酰甘油(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDLC);應(yīng)用免疫透射比濁法測(cè)定C反應(yīng)蛋白(CRP);另收集空腹靜脈血標(biāo)本2 ml，在4℃以3000r/min離心5 min分離血清，-80℃保存，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定sP-selectin及白介素6(IL-6);所有患者于采血當(dāng)天留取24 h尿，混勻后記錄總量，用放免法測(cè)定尿白蛋白濃度，并計(jì)算UAER。

1.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示;兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本均數(shù)比較的t檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析和多元線性回歸分析;P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料分析(見表1)。

表1 各組患者臨床資料

2.1.1 3組間年齡、性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但糖尿病病程在DM、DN1、DN2 3組間依次延長(zhǎng)，且組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

2.1.2 DN2組HbAlc較DN1組升高(P＜0.05)，而其余組間的HbAlc差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。FCP的水平在DM、DN1、DN2 3組間依次遞減，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。

2.1.3 血漿HDL-C在DM與DN1組、DN1與DN2組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而在DM與DN2組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;LDL-C在DM與DN2組、DN1與DN2組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，而在DM與DN1組間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TG、CH在3組間均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.1.4 CRP、IL-6、UAER及sP-selectin在DM、DN1、DN2 3組間依次遞增，組間均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。

2.2 sP-selectin與各指標(biāo)的相關(guān)性分析在所有糖尿病患者中sP-selectin與糖尿病病程、LDL-C、CRP、IL-6、UAER呈正相關(guān)(r=0.17，P＜0.05;r=0.23，P＜0.05;r=0.39，P＜0.05;r =0.31，P＜0.05;r=0.56，P＜0.05)，與FCP呈負(fù)相關(guān)(r=-0.35，P＜0.05)。

2.3 多元線性回歸分析結(jié)果以sP-selectin為因變量，患者年齡、糖尿病病程、HbAlc、FCP、TG、TC、HDL-C、LDL-C、CRP、IL-6、UAER為自變量進(jìn)行多元線性回歸分析，結(jié)果顯示FCP、IL-6、UAER是sP-selectin的獨(dú)立影響因素(P＜0.05)。

3 討論

糖尿病腎病是糖尿病的微血管并發(fā)癥之一，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，可能與多種因素如代謝紊亂、血流動(dòng)力學(xué)改變、晚期糖基化終末產(chǎn)物、氧化應(yīng)激、內(nèi)皮損傷、細(xì)胞因子有關(guān)。近年來免疫、炎癥等引起的內(nèi)皮功能紊亂對(duì)糖尿病腎病的影響備受關(guān)注，認(rèn)為其與糖尿病發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［2］。

P-選擇素為選擇素黏附分子家族中的成員之一，其表達(dá)于血小板和內(nèi)皮細(xì)胞上，與中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞上的配體結(jié)合后介導(dǎo)白細(xì)胞的黏附、滾動(dòng)、聚集及活化并釋放炎癥遞質(zhì)，參與炎癥過程，既是啟動(dòng)早期炎性反應(yīng)的重要分子又是維持慢性炎癥狀態(tài)的重要因素。P-選擇素有兩種變型:可溶性的P選擇素和膜的P選擇素?？扇苄訮選擇素是內(nèi)皮損傷或血小板活化時(shí)由部分表達(dá)于細(xì)胞表面的P選擇素釋放到血液中形成的，可以反映體內(nèi)血小板活化及內(nèi)皮損傷程度［3，4］。

已有多種證據(jù)表明在原發(fā)及繼發(fā)性腎小球疾病中，P-選擇素在腎小球系膜區(qū)、內(nèi)皮細(xì)胞及小管上皮細(xì)胞高表達(dá)，參與了腎小球及腎小管間質(zhì)的炎癥反應(yīng)［5-7］。研究表明，P-選擇素與糖尿病微血管病變尤其是DN發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。Hirata等［8］用免疫組化方法對(duì)DN患者腎活檢組織中P-選擇素進(jìn)行檢測(cè)，與其他腎小球疾病比較發(fā)現(xiàn)，P-選擇素在DN患者腎組織的表達(dá)程度要顯著高于正常對(duì)照組和其他腎小球疾病組; Omoto等［9］發(fā)現(xiàn)DN患者血液中可溶性P-選擇素水平顯著高于無并發(fā)癥組與健康對(duì)照組。本研究中亦發(fā)現(xiàn)可溶性P-選擇素水平與糖尿病病程及尿微量白蛋白率呈正相關(guān)，且尿微量白蛋白率是影響可溶性P-選擇素水平的獨(dú)立影響因素，這與上述的研究結(jié)果一致，即P-選擇素的持續(xù)表達(dá)可能與DN進(jìn)展有關(guān)。

此外，晚近研究揭示DN的發(fā)病在代謝紊亂與血流動(dòng)力學(xué)機(jī)制基礎(chǔ)上，炎癥機(jī)制是其持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵因素［10，11］。本研究證實(shí)可溶性P-選擇素與炎癥因子CRP、IL-6呈正相關(guān)，IL-6也是影響可溶性P-選擇素水平的獨(dú)立影響因素，進(jìn)一步證實(shí)在體內(nèi)高糖環(huán)境下P-選擇素參與慢性微炎癥狀態(tài)的持續(xù)發(fā)展，是DN進(jìn)展不可忽略的因素。

本研究還發(fā)現(xiàn)，可溶性P-選擇素水平與LDL-C水平呈正相關(guān)，這就提示我們高水平的LDL-C可以導(dǎo)致內(nèi)皮損傷，從而加重糖尿病腎損害。其機(jī)制可能與脂質(zhì)過氧化加重氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)［12］。

在本研究中FCP與可溶性P-選擇素水平有著負(fù)相關(guān)性且為其獨(dú)立影響因素，這在以前的研究中尚未見報(bào)道。生理濃度的C肽在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究中發(fā)現(xiàn)具有糖尿病微血管保護(hù)作用，如降低腎小球高濾過、減少尿蛋白、抑制腎小球系膜基質(zhì)的增加延緩腎臟損害［13，14］;降低視網(wǎng)膜毛細(xì)血管通透性，延緩糖尿病視網(wǎng)膜病變進(jìn)展等［15］。本研究結(jié)果提示C肽可能是通過對(duì)血管內(nèi)皮的保護(hù)而發(fā)揮微血管保護(hù)作用的，隨著糖尿病病程的延長(zhǎng)及胰島功能的衰竭導(dǎo)致C肽的減少可能是糖尿病腎損害的原因之一。

綜上所述，本研究證實(shí)了P-選擇素與炎癥因子CRP、IL-6及LDL-C、FCP等一起參與了糖尿病腎病的發(fā)生及發(fā)展，彼此之間相互影響、相互加重。為延緩糖尿病腎病進(jìn)展中的抗炎、降脂及抗黏附治療提供了一定的理論依據(jù)。

［1］王鋒，汪年松，喻明.P-選擇素與糖尿病腎病.中華糖尿病雜志，2005，13(5):396-397．

［2］Ritzel RA，Butler PC.Replication increases B-cell vulnerability to human isletamyloidpolypeptide-inducedapoptosis.Diabetes，2003，52:1701．

［3］Salah A，Medhat S.P-selectin levels in dibetes mellitus patients with coronary artery disease.Hematology，2005，10(3)，183-187．

［4］Nagata K，Tsuji T，Todoroki N.Activated platelets induce superoxide anion release by monoeytes and neutrophils through P-selectin (CD62).J Immunol，1993，151(6):3267-3273．

［5］周同，李曉，郝翠蘭，等.黏附分子P選擇素在人類腎小球疾病中表達(dá)及其意義.中華腎臟病雜志，1998，14(3):155-158．

［6］Chaudhury PR，Wu B，King G，et al.Adhesion molecule interactions in human glomerulonephritis:importance of the tubulointerstium.Kid Int，1996，49:127-134．

［7］Chikako S，Takashi W，Masayoshi T，et al.In situ expression and soluble form of P-selection in human glomerulonephritis.KidInt，1997，52(4):1054-1063．

［8］Hirata K，Shikata K，Matsoda M，et al.Increased expression of selectins in kidneys of patients with diabetic nephropathy.Diabetologia，1998，41:185-192．

［9］Omoto S，Nomura S，Souza A，et al.Significance of platelet derived micro particles and activated platelets in diabetic nephropathy. Nephron，1999，81:271-277．

［10］Navarro JF，Mora C，Maca M，et al.Inflammatory parameters are independently associated with urinary albumin in type 2 diabetes mellitus.Am J Kidney Dis，2003，42:53-61．

［11］Saraheimo M，Teppo AM，F(xiàn)orsblom C，et al.Diabetic nephro-pathy is associated with low-grade inflammation in type 1 diabetic patients.Diabetologia，2003，46:1402-1407．

［12］Kitada M，Koya D，Sugimoto T，et al.Translocation of glomerular p47phox and p67phox by protein kinase C-activation is required for oxidative stress indiabeticnephropathy.Diabetes，2003，52: 2603-2614．

［13］Samnegard B，Jacobson SH，Jaremko G，et al.C-peptide prevents glomerular hypertrophy and mesangial matrix in diabetic rats．Nephrol Dial Transplant，2005，20:532-538．

［14］Johansson BL，Kernell A，Sjoberg S.et al.Inffluence of combined C-peptide and insulin administration on renal function and metabolic control in diabetes type 1．J Clin Endocrinol Metab，1993，77:976-98l．

［15］Ido Y，Vindigni A，Chang K，et al.Prevention of vascular and neural dysfunction in diabetic rats by C-peptide．Science，1997，227:563-566．

The effects of serum soluble P-selectin and inflammatory factors in patients with diabetic nephropathy

MIAO Yan，YAN Lei，SHAO Feng-min，et al．Department of Rheumatism and Nephrology，Henan Provincial People's Hospital，Zhengzhou 450003，China

ObjectiveTo investigate the effect of serum sP-select and inflammatory factors in patients with diabetic nephropathy(DN).Methods138 diabetic nephropathy patients were divided into three groups according to their urinary albumin excretion rate(UAER):normal albuminuria group(DM)，incipient DN group (DN1)and overt DN group(DN2).The relationship of clinical data was analyzed.All patients were tested for HbAlc，F(xiàn)CP，TG，TC，HDL-C，LDL-C，CRP，IL-6，UAER and sP-selectin.ResultsThe duration of diabetes and the level of serum CRP，IL-6，UAER，sP-selectin were more and more higher in group DM、DN1 and DN2(P＜0.05或P＜0.01)，the level of serum FCP were more and more lower in group DM、DN1 and DN2(P＜0.05或P＜0.01).The level of serum sP-selectin in all patients with diabetic nephropathy showed positive correlation with the duration of diabetes and the level of LDL-C，CRP，IL-6，UAER(r=0.17，P＜0.05;r=0.23，P＜0.05; r=0.39，P＜0.05;r=0.31，P＜0.05;r=0.56，P＜0.05)，but showed negative correlation with the level of FCP(r=-0.35，P＜0.05).The multivariate linear regression analysis showed that the level of FCP，IL-6 and UAER seemed independent risk factors for sP-selectin(P＜0.05)．ConclusionP-selectin maybe involved in the pathogenesis of diabetic nephropathy with CRP、IL-6、LDL-C and FCP．

Soluble P-selectin;lnflammatory factors;Diabetic nephropathy

450003河南省鄭州人民醫(yī)院腎病風(fēng)濕免疫科

邵鳳民Email:fengminshao@medmail.com.cn