姜建國，宋更申，張西如，高燕霞

（河北省藥品檢驗(yàn)所，石家莊市 050011）

頂空氣相色譜法測(cè)定洛伐他汀原料藥中的有機(jī)溶劑殘留量

姜建國＊，宋更申，張西如，高燕霞

（河北省藥品檢驗(yàn)所，石家莊市 050011）

目的：建立測(cè)定洛伐他汀原料藥中乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯4種有機(jī)溶劑殘留量的方法。方法：采用頂空氣相色譜法。色譜柱為DB-624石英毛細(xì)管柱，柱溫采用程序升溫，檢測(cè)器為氫火焰離子化檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度為280℃，進(jìn)樣口溫度為160℃。結(jié)果：乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯的檢測(cè)濃度的線性范圍分別為10.0～250（r＝1.0000）、10.0～250（r＝0.9999）、10.0～250（r＝0.9999）、1.78～89μg·mL－1（r＝0.9997）；平均回收率為97.6%～99.1%（RSD＝0.9%～1.9%），定量限為0.22～5.61μg·mL－1；4批樣品中4種有機(jī)溶劑殘留量均符合《中國藥典》2005年版要求。結(jié)論：該方法操作簡便、精密度好，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

洛伐他??；頂空氣相色譜法；有機(jī)溶劑；殘留量

洛伐他汀原料藥（Lovastatin）是微生物來源的羥甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑類降膽固醇藥物，其主要的產(chǎn)生菌為土曲霉、桔青霉和紅曲霉。在從發(fā)酵液中萃取洛伐他汀和重結(jié)晶時(shí)，筆者根據(jù)不同的生產(chǎn)工藝所涉及的、《藥品注冊(cè)的國際技術(shù)要求·質(zhì)量部分》（ICH）規(guī)定應(yīng)控制的有機(jī)溶劑的品種，將乙醇、丙酮、乙酸乙酯和甲苯等4種有機(jī)溶劑作為檢測(cè)對(duì)象。本文根據(jù)ICH[1]的指導(dǎo)原則和《中國藥典》2005年版[2]的相關(guān)規(guī)定，并參考有關(guān)文獻(xiàn)[3～5]，采用靜態(tài)無溶劑頂空氣相色譜法，同時(shí)測(cè)定上述4種溶劑在原料藥中的殘留量。該方法可有效避免溶劑不純導(dǎo)致的對(duì)測(cè)定結(jié)果的干擾，經(jīng)驗(yàn)證，該方法操作簡便、精密度好，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

1 儀器與試藥

6890 型氣相色譜儀、7694E型頂空進(jìn)樣器（美國Agilent公司）；BP 211D型電子天平（德國Sartorius公司）。

洛伐他汀原料藥樣品（由國內(nèi)4家公司提供，批號(hào)分別為091006、20080203、E1003101、091102，含量分別為 99.2%、99.4%、99.5%、99.0%）；乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）均為色譜純（美國Fisher公司）；試驗(yàn)用水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為DB-624石英毛細(xì)管柱（60m×530μm×3μm），柱溫：82℃維持6.5min，以20℃·min－1的速率升至160℃，維持6min；氫火焰離子化檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度：280℃；分流進(jìn)樣，分流比：1∶1；進(jìn)樣口溫度：160℃；載氣：氮?dú)?，流速?.5mL·min－1；頂空進(jìn)樣，平衡溫度：90℃，平衡時(shí)間：30min，頂空定量環(huán)體積：1mL，定量環(huán)溫度：100℃，傳輸線溫度：110℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品貯備液。精密稱取乙醇500mg、丙酮500mg、乙酸乙酯500mg、甲苯89mg，置于同一100mL容量瓶中，加DMF溶液25mL使溶解，再用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品貯備液5mL，置于50mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液5mL，置于20mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封，搖勻，即得。

2.2.3 供試品。精密稱取本品約0.5g，置于15mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

照“2.2”項(xiàng)下的方法制備對(duì)照品溶液和供試品，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，見圖1。

圖1結(jié)果顯示，4種溶劑分離良好，理論板數(shù)均不低于5000。

2.4 線性關(guān)系

精密稱取甲苯89mg，置于100mL容量瓶中，加入DMF 25mL使溶解，再用水稀釋至刻度，搖勻。精密量取10mL，置于50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。再分別精密量取5、25、15、5、2、1mL分別置于10、100、100、100、100、100mL容量瓶中，分別用水稀釋至刻度，搖勻。

精密稱取乙醇500mg、丙酮500mg、乙酸乙酯500mg，置于同一100mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取5、3、2、1、0.5、0.2mL分別置于100mL容量瓶中，分別用水稀釋至刻度，搖勻。

圖1 氣相色譜圖A.對(duì)照品；B.供試品；1.乙醇；2.丙酮；3.乙酸乙酯；4.甲苯Fig1 GC chromatogramsA.reference substances；B.test sample；1.alcohol；2.acetone；3.ethyl acetate；4.methylbenzene

分別精密量取上述各溶液5mL，置于20mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，濃度（c）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果（n＝6）Tab1 Linear ranges of organic solvents（n＝6）

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取本品（批號(hào)：091006）約0.5g，置于15mL頂空進(jìn)樣瓶中，共6份，密封，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，檢出本品中乙醇為0.04%（RSD＝0.9%），乙酸乙酯為0.02%（RSD＝1.1%），丙酮、甲苯均未檢出。

2.6 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知各溶劑含量的樣品（批號(hào)：091006）0.5g，置于15mL頂空進(jìn)樣瓶中，共9份，分別精密加入對(duì)照品貯備液0.40、0.50、0.60mL，各3份，密封，搖勻。按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，按外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果，乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯的平均回收率分別為98.8%、98.2%、99.1%、97.6%，RSD分別為1.6%、1.2%、0.9%、1.9%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取“2.2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，于室溫下放置0、1、2、4、8、12h，分別按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果，乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯在12h內(nèi)測(cè)定的峰面積的RSD分別為1.1%、1.8%、1.5%、1.3%，表明本溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 檢出限與定量限

用逐步稀釋法進(jìn)行測(cè)定，以信噪比約為3時(shí)計(jì)算檢出限，以信噪比約為10時(shí)計(jì)算定量限。結(jié)果乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯的檢出限分別為1.81、1.02、0.25、0.07μg·mL－1，定量限分別為5.61、3.08、0.76、0.22μg·mL－1。

2.9 樣品中有機(jī)溶劑殘留量的測(cè)定

為了考查基質(zhì)效應(yīng)對(duì)待測(cè)溶劑活度的影響導(dǎo)致的測(cè)定結(jié)果的差異，本文將無溶劑法測(cè)定結(jié)果與以水為溶劑的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了比較，結(jié)果如下。

2.9.1 無溶劑法。取4批樣品，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備對(duì)照品溶液和供試品，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，按外標(biāo)法計(jì)算4種有機(jī)溶劑的含量。

2.9.2 以水為溶劑法。取4批樣品，分別精密稱取約0.5g，置于20mL頂空進(jìn)樣瓶中，精密加水5mL，使均勻分散，密封，即得。按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，按外標(biāo)法計(jì)算4種有機(jī)溶劑的含量。

2種方法的測(cè)定結(jié)果見表2。表2結(jié)果表明，2種方法測(cè)定結(jié)果基本一致。

表2 2種方法的測(cè)定結(jié)果比較Tab2 Comparison of results determined by two kinds of methods

3 討論

目前殘留溶劑測(cè)定大多數(shù)是針對(duì)1個(gè)企業(yè)的產(chǎn)品而建立的方法，由于不同的生產(chǎn)企業(yè)采用的生產(chǎn)工藝可能不同，從而使用的有機(jī)溶劑的種類也可能有所不同，導(dǎo)致同一品種不同來源的樣品中殘留溶劑的種類可能不盡相同。另外有的生產(chǎn)企業(yè)出于保密的目的或其他原因，提供的生產(chǎn)工藝或許不完整，這就使殘留溶劑測(cè)定具有很大的不確定性，因此應(yīng)該廣泛收集樣品取得不同的生產(chǎn)工藝信息，根據(jù)試驗(yàn)建立相應(yīng)的多種溶劑的檢測(cè)方法。此次試驗(yàn)涉及的樣品覆蓋了國內(nèi)幾乎所有的洛伐他汀生產(chǎn)企業(yè)，而不是針對(duì)某一個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的樣品，故而所建立的方法具有普遍性。

ICH[1]和《中國藥典》2005年版[2]都規(guī)定，甲苯屬第2類在藥品中應(yīng)限制殘留量的溶劑，限度為0.089%；乙醇、丙酮、乙酸乙酯均屬第3類低毒性殘留溶劑，應(yīng)控制其殘留量，限度均為0.5%。結(jié)果本試驗(yàn)4批樣品殘留溶劑的測(cè)定結(jié)果均符合規(guī)定。

本方法4種有機(jī)溶劑的定量限為0.22～5.61μg·mL－1，靈敏度完全可以滿足洛伐他汀中有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定的需要。

有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定中，水是較理想的溶解介質(zhì)，應(yīng)盡量采用；對(duì)于水不溶性待測(cè)有機(jī)溶劑，在制備對(duì)照品溶液時(shí)，可先用高沸點(diǎn)、無干擾的中極性溶劑溶解后再溶于水。本試驗(yàn)將待測(cè)溶劑先溶于DMF后，再用水稀釋，結(jié)果表明DMF不干擾測(cè)定。

本文采用無溶劑法測(cè)定洛伐他汀中的殘留溶劑，由于加入頂空瓶中的對(duì)照品溶液的體積為5mL，采用20mL頂空瓶，而供試品未加溶劑，為了使頂部氣體的濃度保持一致，采用15mL頂空瓶。經(jīng)無溶劑法與以水為溶劑方法測(cè)定結(jié)果的比較，兩者測(cè)定結(jié)果基本一致，表明基質(zhì)效應(yīng)對(duì)待測(cè)溶劑活度的影響導(dǎo)致的測(cè)定結(jié)果的差異在可接受的范圍之內(nèi)，說明該方法可行。

[1] 周海鈞.藥品注冊(cè)的國際技術(shù)要求·質(zhì)量部分[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：343.

[2] 國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：54-57.

[3] 宋更申，姜建國，劉紅莉，等.頂空氣相色譜法測(cè)定美羅培南中有機(jī)溶劑的殘留量[J].中國藥房，2010，21（5）：447.

[4] 宋更申，姜建國，張西如，等.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定羅庫溴銨中8種有機(jī)溶劑殘留量[J].中國藥學(xué)雜志，2010，45（7）：93.

[5] 宋更申，周 麗，孫玉靜.頂空氣相色譜法測(cè)定羥乙基淀粉中的殘留溶劑[J].中國藥業(yè)，2010，19（8）：31.

Determination of Residual Organic Solvents in Lovastatin by Headspace Gas Chromatography

JIANG Jian-guo，SONG Geng-shen，ZHANG Xi-ru，GAO Yan-xia
（Hebei Institute for Drug Control，Shijiazhuang 050011，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of residual organic solvents in lovastatin，i.e.alcohol，acetone，ethyl acetate and methylbenzene.METHODS：Headspace GC was adopted.The determination were separated on DB-624capillary column using temperature programming.FID was used as detector with a temperature of 280℃，and the inlet temperature was 160℃.RESULTS：The linear ranges of alcohol，acetone，ethyl acetate and methylbenzene were 10.0~250μg·mL－1（r＝1.0000），10.0～250μg·mL－1（r＝0.9999），10.0～250μg·mL－1（r＝0.9999），1.78～89μg·mL－1（r＝0.9997），respectively.The average recoveries ranged from 97.6%to 99.1%with RSD of 0.9%～1.9%.The determination limits were 0.22～5.61μg·mL－1.The residual levels for the 4organic solvents in 4batches of samples were all up to the standard stipulated inChinese Pharmacopeia（2005edition）.CONCLUSION：The method is simple，precise，accurate and reliable.

Lovastatin；Headspace gas chromatography；Organic solvents；Residual

R927.11；R972+.4

A

1001-0408（2011）17-1607-02

＊主任藥師，碩士。研究方向：藥物分析。電話：0311-85212008-8037。E-mail：JiangJG216@yahoo.com.cn

2010-07-02

2010-08-23）