王曉瑜，馬滿玲，楊麗杰，陳 巖

（哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，哈爾濱市 150001）

不同類型的磷脂對三氧化二砷脂質(zhì)體外觀穩(wěn)定性的影響Δ

王曉瑜＊，馬滿玲#，楊麗杰，陳 巖

（哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，哈爾濱市 150001）

目的：研究不同類型的磷脂對三氧化二砷（As2O3）脂質(zhì)體外觀穩(wěn)定性的影響。方法：采用A、B廠家生產(chǎn)的濃縮磷脂和C、D廠家生產(chǎn)的粉狀磷脂，分別應(yīng)用薄膜分散法、乙醚注入法、逆相蒸發(fā)法制備脂質(zhì)體，以樣品是否發(fā)生分層凝聚現(xiàn)象為指標(biāo)觀察其在1、7d，1、6、12個(gè)月內(nèi)的外觀穩(wěn)定性。結(jié)果：A、B 2廠家磷脂制備的As2O3脂質(zhì)體在1年內(nèi)全部出現(xiàn)分層凝聚現(xiàn)象，C、D廠家磷脂制備的As2O3脂質(zhì)體保存1年仍未見分層凝聚現(xiàn)象。結(jié)論：C、D 2個(gè)廠家所生產(chǎn)的磷脂制備的As2O3脂質(zhì)體穩(wěn)定性更好，不同類型的磷脂對所制備的脂質(zhì)體的外觀穩(wěn)定性具有一定影響。

三氧化二砷；脂質(zhì)體；磷脂；類型；外觀穩(wěn)定性

2000年三氧化三砷（As2O3）作為治療急性早幼粒細(xì)胞白血病的Ⅱ類新藥通過美國食品和藥品管理局（FDA）的審批后，國內(nèi)、外學(xué)者對其進(jìn)行了更深入的研究。越來越多的體內(nèi)、外研究[1]提示As2O3的抗瘤譜非常廣泛，有著廣闊的臨床應(yīng)用前景。但由于其毒性大的缺點(diǎn)，限制了其應(yīng)用。

馬滿玲等[2]將As2O3制備成具有較好包封率的脂質(zhì)體，為進(jìn)一步研究其在臨床中的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。As2O3脂質(zhì)體的成功研制，減少了藥物的使用劑量、降低了藥物的毒副作用、改變了藥物的體內(nèi)分布，并具有靶向釋藥特點(diǎn)[3]。在脂質(zhì)體的制備中，磷脂是常用的載體材料，不同類型的磷脂對制備的脂質(zhì)體的包封率、穩(wěn)定性等各方面均具有不同的影響[4]。為此，在本文中，筆者初步研究不同類型的磷脂對制備的As2O3脂質(zhì)體外觀穩(wěn)定性的影響。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

R-215旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）；KQ-100E型超聲波清洗器（江蘇昆山市超聲儀器有限公司）；FA2004N型電子天平（上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試藥

As2O3（湖南衡陽市鳳凰化學(xué)工業(yè)廠，批號：0606088，純度：99.9%）；As2O3脂質(zhì)體（自制，規(guī)格：1mg·mL－1）；卵磷脂（A，批號：20071202，產(chǎn)地：上海；B，批號：20010206，產(chǎn)地：上海；C，批號：20021025，產(chǎn)地：北京；D，批號：20060428，產(chǎn)地：上海）；膽固醇（天津虔誠偉業(yè)科技發(fā)展有限公司，批號：20080512）。

A、B廠磷脂為濃縮磷脂，C、D廠磷脂為粉狀磷脂，4廠家磷脂外觀和技術(shù)指標(biāo)情況見表1。

表14 廠家磷脂外觀和技術(shù)指標(biāo)情況Tab1 Appearance and technological index of phospholipids from 4factories

2 方法與結(jié)果

2.1 制備方法

精確稱取As2O30.2g，置于200mL的燒瓶中，加入NaOH（0.25mol·L－1）水溶液，充分搖勻；加熱20min，待其全部溶解，放至室溫，鹽酸調(diào)節(jié)使其pH值為7.0，然后加入蒸餾水至200mL，過濾后制成藥物溶液，備用。為了排除制備方法對其外觀穩(wěn)定性結(jié)果的影響，分別采用以下3種方法制備脂質(zhì)體。

2.1.1 薄膜分散法。將磷脂與膽固醇質(zhì)量比為4∶1的脂質(zhì)成分溶于適量的氯仿中，于35℃水浴的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，使有機(jī)溶劑揮發(fā)，脂質(zhì)混合物在圓底燒瓶底部形成均勻的薄膜，加入濃度為0.1g·L－1的As2O3水溶液（pH 7.0）充分水化，超聲使膜完全脫落后得到脂質(zhì)體混懸液，再用水浴超聲法獲得粒徑較小的As2O3脂質(zhì)體溶液[5]。

2.1.2逆相蒸發(fā)法。將磷脂與膽固醇質(zhì)量比為4∶1的脂質(zhì)成分溶于適量的氯仿中，再加入濃度為0.1g·L－1的As2O3水溶液（pH 7.0），充分混勻，經(jīng)超聲波清洗儀超聲形成W/O乳液，再于35℃水浴的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膠狀，后繼續(xù)減壓蒸發(fā)至徹底除去氯仿，即得As2O3脂質(zhì)體混懸液。用生理鹽水調(diào)節(jié)體積后超聲40min，使其形成均勻的乳狀溶液，即為As2O3脂質(zhì)體溶液[6]。

2.1.3 乙醚注入法。將磷脂與膽固醇質(zhì)量比為4∶1的脂質(zhì)成分溶于乙醚中，所得的類脂溶液緩慢勻速注入恒溫40℃的、濃度為0.1g·L－1的As2O3水溶液（pH 7.0）中，含有脂質(zhì)的乙醚溶液被大量的As2O3水溶液所稀釋，油相在水相中不溶從而迅速形成小的脂質(zhì)體顆粒，繼續(xù)恒溫?cái)嚢柚烈颐淹耆M，得到As2O3脂質(zhì)體混懸液，再水浴超聲30min使粒徑達(dá)到要求，即得As2O3脂質(zhì)體[7]。

采用4廠家磷脂分別用上述3種方法制備脂質(zhì)體，制備的樣品各取10個(gè)，在4℃的條件下保存1、7d，1、6、12月，觀察其分層凝聚現(xiàn)象。

2.2 結(jié)果

穩(wěn)定性較好的脂質(zhì)體在外觀上應(yīng)長時(shí)間呈現(xiàn)均勻混懸的狀態(tài)，若短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)分層凝結(jié)現(xiàn)象，可以證明其穩(wěn)定性不好。在確保制備的脂質(zhì)體可以長時(shí)間的保持均勻混懸狀態(tài)的前提下，下一步再考察載藥量、包封率、滲漏率等其他指標(biāo)。

以觀察時(shí)間點(diǎn)為橫坐標(biāo)，以未分層凝聚的樣品數(shù)/總的樣品數(shù)×100%為縱坐標(biāo)（r），繪制外觀穩(wěn)定性曲線圖，結(jié)果見圖1。

圖14 廠家磷脂采用不同方法制備脂質(zhì)體的分層凝聚情況（n＝10）Fig1 Hierarchical clotted appearance of liposome prepared by phospholipids from 4factories（n＝10）

圖1結(jié)果顯示，C、D 2個(gè)廠家所生產(chǎn)的磷脂制備的As2O3脂質(zhì)體在1年內(nèi)未出現(xiàn)分層凝聚現(xiàn)象，A、B 2個(gè)廠家所生產(chǎn)的磷脂制備的As2O3脂質(zhì)體在1年內(nèi)全部出現(xiàn)分層凝聚現(xiàn)象，表明C、D 2個(gè)廠家磷脂制備的As2O3脂質(zhì)體比A、B 2個(gè)廠家磷脂制備的As2O3脂質(zhì)體的外觀穩(wěn)定性好。

3 討論

本試驗(yàn)所使用的磷脂均為大豆磷脂，這類磷脂是精制植物油時(shí)經(jīng)脫膠過程除去的物質(zhì)。磷脂本身為一種混合物，其主要成分包括磷脂酰膽堿（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰肌醇（PI）和磷脂酸（PA），同時(shí)磷脂中還包括其他幾種酯類如糖脂、非極性脂，以及極少量的其他物質(zhì)如糖類和雜質(zhì)等。脫膠過程的目的是降低油中磷脂的含量，經(jīng)過脫膠得到的是粗制磷脂，油料種子的質(zhì)量和來源對卵磷脂粗品的組成和質(zhì)量具有重要的影響[8]。得到粗制磷脂后，還需對磷脂進(jìn)行進(jìn)一步的加工，如標(biāo)準(zhǔn)化、卵磷脂的修飾、溶劑提取等。

根據(jù)中華人民共和國行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中磷脂通用技術(shù)條件規(guī)定[4]判斷，A、B 2個(gè)廠家生產(chǎn)的磷脂應(yīng)為濃縮磷脂，C、D 2個(gè)廠家生產(chǎn)的磷脂為粉狀磷脂。濃縮磷脂為水化磷脂經(jīng)真空脫水、濃縮等工序而制成的塑狀或黏稠狀產(chǎn)品，粉狀磷脂為濃縮磷脂經(jīng)脫脂、分離、干燥等工序而制成的粉粒狀產(chǎn)品。粉狀磷脂是以濃縮磷脂為原料，根據(jù)中性油脂和游離脂肪酸易溶于丙酮而磷脂難溶于丙酮的原理，經(jīng)丙酮萃取除去油脂得到。丙酮分離萃取后，得到的粉狀磷脂在乳化能力和水中的分散力都得到大大的改善。

另外，經(jīng)過丙酮去油的過程后，磷脂中成分的含量也有一些變化。粉狀磷脂因丙酮去油后其中性脂質(zhì)的含量大量降低的同時(shí)，PC、PE、PI、PA的含量的百分比相應(yīng)升高，在脂質(zhì)體的制備中，PC、PE、PI、PA的含量對制備的脂質(zhì)體的性質(zhì)有主要的影響[9]。脂質(zhì)體的Zeta電位絕對值的大小會(huì)影響脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，制備出的脂質(zhì)體Zeta電位的絕對值較大時(shí)脂質(zhì)體相對穩(wěn)定。當(dāng)磷脂中的PA和PI含量較高時(shí)，其制備出的脂質(zhì)體Zeta電位的絕對值比較大，這是由于PC和PE是電中性，PA和PI帶有負(fù)電荷，因此磷脂中PA和PI含量較高時(shí)其制備的脂質(zhì)體Zeta電位的絕對值較大，脂質(zhì)體的穩(wěn)定性也比較好。粉狀磷脂中的PA和PI的含量要高于濃縮磷脂中的PA和PI的含量，這是C、D 2個(gè)廠家所生產(chǎn)的磷脂制備的As2O3脂質(zhì)體外觀穩(wěn)定性好的原因之一。

本試驗(yàn)中使用A、B、C、D 4個(gè)廠家的磷脂，分別用薄膜分散法、乙醚注入法、逆相蒸發(fā)法3種方法制備As2O3脂質(zhì)體，在4℃的條件下保存12個(gè)月觀察其外觀穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，采用C、D 2個(gè)廠家的磷脂制備的As2O3脂質(zhì)體比A、B 2個(gè)廠家的磷脂制備的As2O3脂質(zhì)體外觀穩(wěn)定性好，表明在制劑過程中選用磷脂時(shí)應(yīng)注意其產(chǎn)品類型。

[1] 白建剛，李漢生.三氧化二砷抗腫瘤研究進(jìn)展[J].中國藥事，2008，22（12）：1105.

[2] 馬滿玲，陳 巖.三氧化二砷脂質(zhì)體的制備及其包封率的測定[J].中國藥師，2008，11（9）：1019.

[3] 王廣義，劉晶玉，張 旭，等.三氧化二砷脂質(zhì)體透過載瘤大鼠血腦屏障的實(shí)驗(yàn)研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008，8（10）：1816.

[4]SB/T 10206-1994，中華人民共和國行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)——磷脂通用技術(shù)條件[S].

[5] 張躍珍，林 軍.天然藥物脂質(zhì)體制備研究進(jìn)展[J].中國藥房，2007，18（21）：1671.

[6] 穆筱梅，梁世強(qiáng).脂質(zhì)體的制備方法及其研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2008，19（7）：1784.

[7] Meure LA，F(xiàn)oster NR，Dehghani F.Conventional and dense gas techniques for the production of liposomes：a review[J].AAPS PharmSciTech，2008，9（3）：798.

[8] 張卓勇，羅 茜.吉林大豆中卵磷脂的成分提取與分析[J].東北師大學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2001，33（2）：38.

[9] 穆筱梅，鐘振聲.大豆磷脂脂質(zhì)體的制備[J].大豆科學(xué)，2007，26（3）：386.

Effect of Different Types of Phospholipids on the Appearance Stability of Arsenic Trioxide Liposome

WANG Xiao-yu，MA Man-ling，YANG Li-jie，CHEN Yan
（Dept.of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Harbin Medical University，Harbin 150001，China）

OBJECTIVE：To study the effect of different types of phospholipids on the appearance stability of Arsenic trioxide（As2O3）liposome.METHODS：The liposome was prepared using concentrated phospholipids produced by factory A and B and powdered phospholipids produced by factory C and D by film dispersion method，ether injection method and reverses phase evaporation method.The appearance stability at 1d，7d，1month，6months and 12months was observed according to stratified clotting of samples.RESULTS：Arsenic trioxide liposome produced by phospholipids from factory A and B appeared stratified clotting during 1year while that produced by phospholipids from factory C and D not.CONCLUSION：Arsenic trioxide liposome produced by phospholipids from factory C and D has better stability，and different types of phospholipids affect the appearance stability of liposome.

Arsenic trioxide；Liposome；Phospholipids；Type；Appearance stability

R943；R979.1；R927.11

A

1001-0408（2011）17-1587-02

Δ黑龍江省科學(xué)技術(shù)廳基金資助項(xiàng)目（GB05C401-04）

＊碩士研究生。研究方向：藥理學(xué)。E-mail：wxy19841223@126.com

#通訊作者：主任藥師，碩士研究生導(dǎo)師。研究方向：藥理學(xué)、臨床藥學(xué)。電話：0451-53642755。E-mail：mamanling@126.com

2010-07-23

2010-08-18）