符旭東，劉祖雄，李瑞花

(1.廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院藥劑科，430070;2.咸寧學(xué)院藥學(xué)院臨床藥學(xué)系，437100)

復(fù)發(fā)性口腔潰瘍是臨床常見口腔黏膜病，目前尚無特效治療方法［1］。復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍(recurrent aphthous ulcer，RAU)發(fā)病率約20%，其中輕型阿弗他潰瘍(minor aphthous ulcer，MAU)約占80%。RAU疼痛明顯，反復(fù)發(fā)作，且缺乏特效治療方法，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。因此，尋找安全、有效、方便的局部用藥很有必要［2］。氨來咕諾(amlexanox)是抗炎抗變態(tài)反應(yīng)藥，由武田公司于1987年在日本開發(fā)上市［3］，是治療復(fù)發(fā)性阿弗他口腔炎(recurrent aphthous stomatitis，RAS)的一種有效藥物，1996年美國食品藥品管理局批準(zhǔn)該藥作為治療有免疫活性的口腔潰瘍疾病的首選藥物。氨來呫諾可抑制白三烯生成，防止組胺的游離，從而起到抗炎作用［4］。

目前國內(nèi)有氨來呫諾糊劑和貼片上市。但氨來呫諾糊劑在口腔黏膜局部貼附時間較短(1.0～1.5 h)，且糊劑中加入了液體石蠟，影響口感。貼片的口感較糊劑有改善，但異物感明顯。將氨來呫諾制成含片，既能增加藥物在病變部位的滯留時間，又可以改善糊劑和口腔貼片使用過程中的不適感，能夠增加患者的依從性，而且含片的制備工藝更簡單，更容易實(shí)現(xiàn)制劑的批量配制。為此，筆者開發(fā)了氨來呫諾的新劑型、新工藝，制備了氨來呫諾含片，并建立了質(zhì)量控制方法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 1100HPLC儀，AB204-N型電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)，78X-2B型片劑四用測定儀(上海黃海藥檢儀器有限公司)，RC-806型溶出實(shí)驗(yàn)儀(天津市天大天發(fā)科技有限公司)，BY-300A片劑硬度計(上海黃海藥檢儀器有限公司)，CH-30型混合機(jī)(武昌隆昌制藥機(jī)械廠)，CT-C-IA型熱風(fēng)循環(huán)烘箱(江蘇一步干燥設(shè)備有限公司)，VFP-9型旋轉(zhuǎn)式變速壓片機(jī)(常州市龍城晨光藥化機(jī)械公司)，DPB-88型自動鋁塑包裝機(jī)(浙江瑞安華聯(lián)制藥機(jī)械股份有限公司)。

1.2 試藥 氨來呫諾對照品及原料(山東科源制藥有限公司，批號:1001001，純度:99.2%)，甘露醇原料(mannitol，青島明月海藻集團(tuán)有限公司，批號:100806029)，羥丙甲基纖維素(HPMC-K4M，上?？房蛋录夹g(shù)有限公司，批號:080703)，卡波姆(CP-940，固安希星藥業(yè)有限公司，批號:20090101)，硬脂酸鎂原料(magnesium stearate，安徽山河藥用輔料有限公司，批號:090320)，二氧化硅原料(aerosil，安徽山河藥用輔料有限公司，批號:090301)，乙醇(ethanol，湖南九典制藥有限公司，批號:F12101004)，純化水(purified water，廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院藥劑科自制)，磷酸二氫銨(ammonium phosphate monobasic，天津市廣成化學(xué)試劑有限公司，分析純，批號:20080521)，甲醇(methanol，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，色譜純，批號:T20100824)。

2 處方與制備

2.1 處方 氨來呫諾2.0 g，甘露醇17.5 g，羥丙甲基纖維素(k4M)22.5 g，卡波姆 940 7.5 g，硬脂酸鎂0.5 g，二氧化硅0.5 g，30% 乙醇適量，制成 1 000 粒。甘露醇為填充劑，羥丙甲基纖維素(k4M)、卡波姆940為粘合劑，硬脂酸鎂為潤滑劑，二氧化硅為助流劑，30%乙醇為潤濕劑。

2.2 制備工藝及操作要求 分別稱取氨來呫諾［過篩孔內(nèi)徑0.180 mm(80目)篩］、羥丙甲基纖維素(k4M)、卡波姆940、甘露醇，依照等量遞加，分次加入，初步混合。將30%乙醇加入上述混合的物料中，制成適用于制粒的軟材，過篩孔內(nèi)徑1.18 mm(16目)篩制粒，將制好的濕顆粒烘干至含水1% ～3%，過篩孔內(nèi)徑0.850 mm(20目)篩整粒;再加入處方量硬脂酸鎂和二氧化硅混合均勻。混勻后的顆粒經(jīng)含量測定后計算片質(zhì)量，按每片含氨來呫諾2 mg壓片，制得的素片應(yīng)完整光潔，硬度＞80 N。生產(chǎn)過程中注意將空氣濕度盡量控制在＜50%。將制得的片劑按每板7片的規(guī)格進(jìn)行鋁塑壓膜包裝。

3 質(zhì)量控制

3.1 含量限度 本品含氨來呫諾(C16H14N2O4)應(yīng)為標(biāo)示量的90.0% ～110.0%。

3.2 性狀 本品為白色或類白色片。

3.3 檢查

3.3.1 含量均勻度 取本品1片，置100 mL量瓶中，加甲醇約35 mL，置80℃水浴加熱15 min，充分振搖，使藥物溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，置冰箱冷藏室中30 min，取出立即過濾。取經(jīng)孔徑0.45μm微孔濾膜濾過的續(xù)濾液進(jìn)樣，按含量測定項(xiàng)下方法測定，應(yīng)符合《中華人民共和國藥典》2010版二部附錄X E規(guī)定。3批樣品的含量均勻度檢查結(jié)果分別為10.3，9.8，10.2。3 批樣品的 A+1.80S 均≤15.0，含量均勻度符合規(guī)定。

3.3.2 溶化性 照《中華人民共和國藥典》2010版二部附錄X A崩解時限檢查法檢查，10 min內(nèi)不應(yīng)完全崩解或溶化。3批含片10 min內(nèi)均沒有全部崩解或溶化，結(jié)果符合規(guī)定。

3.3.3 脆碎度檢查 依照《中華人民共和國藥典》2010版附錄脆碎度檢查法XG檢查，3批含片的減失質(zhì)量分別為0.2%，0.1%和 0.2%，均＜1%，符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

3.4 含量測定 照《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄ⅤD高效液相色譜法測定。

3.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 色譜柱為漢邦Lichrospher C18(250 mm ×4.6 mm，5μm)，甲醇-0.01 moL·L-1磷酸二氫氨溶液(70∶30)為流動相，流速1.0 mL·min-1，檢測波長350 nm，柱溫25 ℃，進(jìn)樣體積20 μL。理論塔板數(shù)按氨來呫諾計算應(yīng)不低于2 000。

3.4.2 供試品溶液的制備 取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱定適量(相當(dāng)于氨來呫諾10 mg)，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇約35 mL，置80℃水浴加熱15 min，充分振搖，使藥物溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，置冰箱冷藏室中30 min，取出立即過濾，精密量取續(xù)濾液5 mL，置于50 mL量瓶，加流動相稀釋至刻度，搖勻，用孔徑0.45μm微孔濾膜濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液。

3.4.3 對照品溶液的制備 取氨來呫諾10 mg，精密稱定，置50 mL量杯中，加甲醇約35 mL，超聲使藥物溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置25 mL量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用孔徑0.45μm微孔濾膜濾過，制成每毫升含氨來呫諾20 μg的溶液，對照品溶液。

3.4.4 陰性對照溶液 按處方組成比例，制備不含氨來呫諾的陰性對照樣品，再按供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。

3.4.5 專屬性實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各20 μL，按照“3.4.1”項(xiàng)下的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果供試品在與氨來呫諾對照品色譜相應(yīng)的位置上出現(xiàn)相同的色譜峰，而陰性對照液在與對照品相同保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對照無干擾。

3.4.6 線性關(guān)系考察 精密稱取氨來呫諾對照品10 mg，加甲醇適量，超聲處理5 min，使溶解并定容至100 mL，配制成100 μg·mL-1作為標(biāo)準(zhǔn)儲備液。分別精密量取不同體積的標(biāo)準(zhǔn)儲備液 0.25，1.5，3.0，4.5，6.0 mL，置25 mL容量瓶，加甲醇稀釋成濃度分別為1，6，12，18，24 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)溶液，精密吸取各溶液20 μL，注入液相色譜儀中測定。以標(biāo)準(zhǔn)稀釋液的濃度為橫坐標(biāo)，以氨來呫諾峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸，得方程:Y=10 103X+1 347.2，R2=0.999 8。結(jié)果表明氨來呫諾在 1 ～24 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.4.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密制備同一批號(批號:20091111)樣品溶液6份，照給定的色譜條件測定，平均含量為100.02%，RSD 為0.36%(n=6)。

3.4.8 方法回收率實(shí)驗(yàn) 采用空白回收率實(shí)驗(yàn)法［5］，按照處方量比例不含主藥輔料混合物，分別稱取0.25 g各9份分置于50 mL量瓶中，分別精密稱取氨來呫諾對照品8，10，12 mg各3份，置于上述裝有空白輔料的50 mL量瓶中，按照“3.4.2”項(xiàng)方法配制供試液。按照“3.4.3”方法配制 20 μg·mL-1氨來呫諾對照品溶液。按照上述色譜條件測定峰面積，按照外標(biāo)法以峰面積計算各樣品的測得量，計算回收率和平均回收率及 RSD，測定結(jié)果見表2。平均回收率100.07%，RSD=1.46%。

表1 氨來呫諾回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Recovery of amlexanox n =9

3.4.9 精密度實(shí)驗(yàn) 取15 μg·mL-1氨來呫諾對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果平均峰面積119 798.67，RSD 為0.79%。

3.4.10 溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 將20 μg·mL-1氨來呫諾供試品溶液在25℃分別放置6 h，測定溶液的穩(wěn)定性，結(jié)果平均峰面積183 955，RSD為0.03%。表明溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.4.11 含量測定結(jié)果 按照制訂的含量測定方法測定3批供試品含量，結(jié)果批號為20091111，20091112，20091113的樣品，標(biāo)示含量分別為101.3%，100.8%，101.9%。平均標(biāo)示含量101.33%，RSD=0.54%。3批樣品含量均在標(biāo)示量的90.0% ～110.0%范圍內(nèi)。3.5 鑒別 在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應(yīng)與氨來呫諾對照品主峰的保留時間一致。取陰性樣品(不含主藥的輔料)，按照“3.4.5”項(xiàng)下操作，說明輔料不干擾藥物檢測，鑒別方法可行。

4 討論

氨來占喏是唯一獲美國食品藥品管理局批準(zhǔn)的治療口腔潰瘍的藥物。1996年氨來占喏糊劑在美國上市(商品名:Aphthasol)，用于治療口腔黏膜潰瘍。國外采用多中心、隨機(jī)、雙盲、對照基質(zhì)和不治療的平行對照的方法對氨來呫諾糊劑治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的療效及安全性進(jìn)行評價，結(jié)果顯示其可加速潰瘍愈合［6-8］。

本制劑的處方根據(jù)《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄片劑通則下有關(guān)含片的要求，結(jié)合藥物的理化性質(zhì)和劑型特點(diǎn)，制備了氨來呫諾含片，并建立了測定氨來呫諾含片的高效液相色譜法。

參照氨來呫諾口腔貼片的規(guī)格，將氨來呫諾含片的規(guī)格確定為每片2 mg。制得含片外觀、硬度、含量均勻度、溶化性、脆碎度均符合規(guī)定?？诟袩o異味、無沙粒感、無刺激性，酸苦甜適中，表面光滑美觀、色澤均勻、硬度適中、服用方便。氨來呫諾含片的處方采用正交因子設(shè)計，在處方中甘露醇為填充劑;羥丙甲基纖維素(k4M)、卡波姆940為粘合劑;硬脂酸鎂為潤滑劑;二氧化硅為助流劑;30%乙醇為潤濕劑。甘露醇化學(xué)穩(wěn)定性好，無引濕性，常用作片劑的填充劑(10% ～90%)，其顆粒易干燥，可以改善片劑的口感?？紤]到本品為含片，所以選擇甘露醇作為填充劑。甘露醇在處方中的含量為34.65%。

因?yàn)楸酒肥怯糜谥委熆谇粷儯虼藨?yīng)在兼顧口感的同時，盡量延長藥物在口腔的滯留時間。參考有關(guān)文獻(xiàn)，擬選擇卡波姆和羥丙甲基纖維素k4M作為粘合劑。少量水分可以使卡波姆的分子鏈伸展，與黏膜組織產(chǎn)生相互滲透，產(chǎn)生粘附作用，但是大量水分滲入到分子鏈中，可減弱了粘附劑與黏膜組織的相互作用，導(dǎo)致粘附時間降低。羥丙甲基纖維素的吸水性小于卡波姆，其纏繞的長鏈結(jié)構(gòu)可阻止水分的過度進(jìn)入。兩者以不同比例配伍，可以使水分以適宜的速度滲入片芯，因而可延長粘附時間。以顆粒的休止角盡可能小、含化時間盡可能長作為優(yōu)化目標(biāo)，選定卡波姆和羥丙甲基纖維素在處方中的總量為60%，卡波姆和羥丙甲基纖維素的比例為1∶3。硬脂酸鎂做為常用的潤滑劑，易與顆?；靹颍Ａ肯驴娠@著改善素片外觀。微粉硅膠可以是良好的助流劑，考慮到甘露醇制得的顆粒，流動性較差，經(jīng)單因素考察后選定潤滑劑和助流劑的用量為處方量的1%。

筆者在本實(shí)驗(yàn)中建立了有效的控制氨來呫諾含片質(zhì)量的方法。該方法快速、簡便，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性好。

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