劉建軍，鐘巧妮

(湖北省醫(yī)藥工業(yè)研究院有限公司，武漢 430061)

筆者在本實(shí)驗(yàn)中考察乙氧苯柳胺軟膏工藝改變前后的透皮效果，將乙氧苯柳胺工藝改變前后的兩批樣品分別涂于鼠皮，利用40%乙醇/pH7.4的磷酸溶液作為接收介質(zhì)，通過(guò)不同時(shí)間點(diǎn)取樣，采用高效液相色譜法測(cè)定接收介質(zhì)中乙氧苯柳胺含量，通過(guò)各時(shí)間點(diǎn)乙氧苯柳胺累積透過(guò)皮膚量比較工藝改變前后是否一致［1-2］。

1 儀器與試藥

透皮儀TT-6，Agilent1200高效液相色譜儀，色譜柱:ODS 柱(150 mm×4.6 mm，5μm)，流動(dòng)相:甲醇∶水(67∶33)用磷酸調(diào) pH 至 2.6，流速:1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng):UV290 nm，柱溫:室溫，進(jìn)樣量:20 μL。工作對(duì)照品(標(biāo)準(zhǔn)品，含量:99.8%，山東新華制藥股份有限公司提供)，乙氧苯柳胺軟膏樣品(規(guī)格:每支10 g，山東新華制藥股份有限公司提供，批號(hào):0910003，0911015)，甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 鼠皮的制備 取健康雄性大鼠，剃凈腹部毛，斷頸處死，立即剝離皮膚，去凈皮下脂肪，用0.9%氯化鈉溶液反復(fù)沖洗，剪成適宜大小，浸于0.9%氯化鈉溶液中，放入冰箱中－20℃保存待用，于一周內(nèi)用完。每次實(shí)驗(yàn)前目測(cè)檢查鼠皮完整性，不得有任何破損。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 精密稱取乙氧苯柳胺10.01 mg(含量:99.8%)，置 200 mL 容量瓶，接收介質(zhì)溶解并稀釋至刻度，搖勻，得49.9 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

2.2.2 供試品溶液的制備 將不同處方的乙氧苯柳胺軟膏各0.25 g分別均勻涂布于皮膚角質(zhì)層上。接受池中加入40%乙醇/pH7.4磷酸鹽緩沖液12.0 mL作為接受介質(zhì)，37℃恒溫水浴，釋放面積為1.77 cm2。定速攪拌，于2，4，6，8，10，22 h 取接受液1.0 mL，同時(shí)向接受池中加入等量同溫的空白接收介質(zhì)。將所取接受液經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取準(zhǔn)備好的鼠皮兩張，采用透皮儀進(jìn)行實(shí)驗(yàn)［3］，將皮膚分別置于接收池和供給池之間，角質(zhì)層面向上，其中一張鼠皮作為空白，另一張皮膚上涂不含乙氧苯柳胺的軟膏基質(zhì)，作為含基質(zhì)的空白。然后在接受池中加入40%乙醇/pH7.4磷酸鹽緩沖液12.0 mL作為接受介質(zhì)，37℃恒溫水浴，釋放面積1.77 cm2。定速攪拌，24 h后取接受液3 mL，將所取接受液經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾，作為空白溶液。

2.3 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.3.1 專屬性實(shí)驗(yàn) 分別取標(biāo)準(zhǔn)品溶液、陰性對(duì)照溶液進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果空白液在標(biāo)準(zhǔn)品主峰處均無(wú)吸收峰出現(xiàn)。

2.3.2 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下儲(chǔ)備液，依次稀釋成濃度為 0.100，0.499，0.999，4.995，9.990和 19.980 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，取 20 μL 進(jìn)樣，記錄峰面積。以濃度(C)對(duì)峰面積(A)進(jìn)行線性回歸，得線性方程:Y=76.309X－6.667 3，結(jié)果可見(jiàn)本品在 0.100 ～19.980 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 8。

2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn) 取“2.3.2”項(xiàng)下4.995 μg·mL-1的乙氧苯柳胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)測(cè)定6次。結(jié)果峰面積分別為 366.939，367.335，367.175，367.448，367.245，367.008，平均 367.192，RSD=0.05%?？梢?jiàn)本品精密度較好。

2.3.4 回收率實(shí)驗(yàn) 取輔料基質(zhì)0.203 2 g，置于100 mL量瓶，加接收介質(zhì)液溶解，并稀釋至刻度，作為輔料儲(chǔ)備液;分別精密吸取線性項(xiàng)下49.9 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和輔料儲(chǔ)備液，配制線性濃度范圍內(nèi)高、中、低濃度的乙氧苯柳胺樣品溶液各3份，高效液相色譜法測(cè)定，由標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算其濃度測(cè)定值，測(cè)定值與真實(shí)值的比值得回收率，結(jié)果見(jiàn)表1，平均回收率99.45%，RSD=1.0%?？梢?jiàn)本品回收率較高。

表1 乙氧苯柳胺回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 體外透皮釋藥研究

3.1 實(shí)驗(yàn)條件 接收介質(zhì):筆者對(duì)pH7.4磷酸緩沖液、10%乙醇/pH7.4磷酸緩沖液、20%乙醇/pH7.4磷酸緩沖液、30%乙醇/pH7.4磷酸緩沖液、40%乙醇/pH7.4磷酸緩沖液、30%丙二醇/pH7.4磷酸緩沖液等不同接收介質(zhì)進(jìn)行了溶解性對(duì)比。結(jié)果顯示，樣品在前3種接收介質(zhì)條件下較難溶解，在30%乙醇/pH7.4磷酸緩沖液和30%丙二醇/pH7.4磷酸緩沖液中溶解較好，在40%乙醇/pH7.4磷酸緩沖液溶解最好。因此，最后確定以在40%乙醇/pH7.4磷酸緩沖液作為接收介質(zhì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3.2 實(shí)驗(yàn)方法 取不同處方的乙氧苯柳胺軟膏，按“2.2.2”項(xiàng)方法操作，取供試液 20 μL，按高效液相色譜法測(cè)定，由“2.3.2”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算藥物濃度。

3.3 數(shù)據(jù)處理與結(jié)果 經(jīng)高效液相色譜法測(cè)得的藥物濃度根據(jù)公式②進(jìn)行校正，經(jīng)公式③計(jì)算藥物的累n－1Ci積滲透量。②Cn＇=Cn+V/Vo∑t－1;③Qn=Cn‘*Vo/A。式中Cn‘:t時(shí)間藥物的累積濃度，Ci:t時(shí)間前藥物的測(cè)定濃度，Cn:t時(shí)間藥物的測(cè)定濃度;V:取樣體積;Vo:接受池中溶液的體積;Qn:t時(shí)間單位面積累積滲透量;A:皮膚有效擴(kuò)散面積。測(cè)定每一取樣點(diǎn)樣品的濃度，計(jì)算單位面積累積滲透量(Q)，結(jié)果見(jiàn)表2。以Qt作圖，見(jiàn)圖1。透皮速率見(jiàn)表3，方差分析見(jiàn)表4。

表2 改變工藝前后不同時(shí)點(diǎn)透皮實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 改變工藝前后不同時(shí)點(diǎn)透皮實(shí)驗(yàn)結(jié)果

時(shí)間 平均累積透過(guò)量/(μg·mL－1)單位面積累積透過(guò)量/［μg·(cm2)－1］改進(jìn)工藝前2 h 0.220 1.490 4 h 0.651 4.412 6 h 1.534 10.398 8 h 2.937 19.914 10 h 4.810 32.612改進(jìn)工藝后2 h 0.620 4.201 4 h 2.389 16.198 6 h 5.501 37.295 8 h 9.498 64.390 10 h 15.105 102.406

表3 乙氧苯柳胺軟膏改變工藝前后透皮速率與10 h累積滲透量

表4 透過(guò)量進(jìn)行方差分析

4 結(jié)論

因22 h取樣測(cè)定結(jié)果超出線性范圍未納入統(tǒng)計(jì)。從表3，4中可以看出，10 h內(nèi)工藝改變前、后乙氧苯柳胺的總透過(guò)量?jī)H為涂抹量的0.5%和1%。表3數(shù)據(jù)說(shuō)明樣品在強(qiáng)透皮接收介質(zhì)下，工藝改變后的滲透速率略高于工藝改變前;但表4分析結(jié)果顯示P＞0.05，說(shuō)明工藝改變前后樣品的透皮現(xiàn)象差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明兩者的治療效果可能相當(dāng)［4］。

［1］乙氧苯柳胺軟膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS-009(X-007)-97-(1)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)54冊(cè)［S］.209.

［2］曲秀梅，吳建輝.反相HPLC法測(cè)定乙氧苯柳胺軟膏的含量［J］.黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2002，25(5):82.

［3］關(guān)玉晶，部琪臻，姜建華，等.自乳化基質(zhì)乙氧苯柳乳膏的研制及透皮研究［J］.中國(guó)新藥雜志，2006，15(20):1766－1768.

［4］王波，張桂芳.HPLC法測(cè)定乙氧苯柳胺軟膏的含量［J］.藥物分析雜志，2002，22(1):72－73.