劉偉強(qiáng) 謝正寶

(1.黑龍江林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生態(tài)工程學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157011；2.吉林省長(zhǎng)春皓月清真肉業(yè)股份有限公司，長(zhǎng)春 130062)

血紅素是高等動(dòng)物血液和肌肉中的紅色素, 由卟啉和一分子亞鐵構(gòu)成。氯化血紅素的化學(xué)名為1,3,5,8-四甲基-2,4-二乙烯基卟吩-6,7-二丙酸氯化鐵，分子式C34H32O4N4ClFe，鐵含量8.57%[1]。

血紅素作為一種新型生物補(bǔ)鐵劑，在藥品和保健品中廣泛使用。

在血紅素的工業(yè)生產(chǎn)中，需要檢測(cè)產(chǎn)品中血紅素含量來控制生產(chǎn)出的產(chǎn)品質(zhì)量。本文根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)選取了三種方法分別檢測(cè)了五批氯化血紅素成品和五批利用氯化血紅素生產(chǎn)的保健膠囊，通過檢測(cè)結(jié)果對(duì)比評(píng)價(jià)方法在工業(yè)檢測(cè)的應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 儀器

1200型高效液相色譜儀(安捷倫)，TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用)，TAS-990原子吸收分光光度計(jì)(北京普析通用，鐵空心陰極燈)，馬弗爐，pH計(jì)(PHS-2C)，電子天平(ESJ-200-4)。

1.2 試劑

氯化血紅素標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma)，甲醇(色譜純)，乙腈(色譜純)，醋酸(分析純)，吡啶(分析純)，三氧化二鐵(分析純)，鹽酸(分析純)去離子水，氯化血紅素成品，保健膠囊。

1.3 方法

1.3.1 HPLC法[2]

色譜條件：XDB-C18(150mm×4.6mm)；流動(dòng)相V甲醇∶V乙腈∶V水∶V醋酸∶V吡啶=40.0∶40.0∶9.0∶1.0∶0.6；流速1mL/min；柱溫35℃；檢驗(yàn)波長(zhǎng)399nm；進(jìn)樣量20μL。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：準(zhǔn)確稱量標(biāo)準(zhǔn)品0.010g，用0.1mol/L的NaOH溶液溶解，轉(zhuǎn)移入500mL容量瓶定容。移取1、3、5、7、10mL置于100mL容量瓶中，甲醇定容。

樣品溶液制備：每批樣品準(zhǔn)確稱量三份，每份約0.25g，用0.1mol/L的NaOH溶液溶解，轉(zhuǎn)移入500mL容量瓶定容。移取5mL置于100mL容量瓶中，甲醇定容。

含量測(cè)定：吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL手動(dòng)進(jìn)樣，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，由工作站繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；移取樣品20μL進(jìn)樣，按外標(biāo)法以峰面積由工作站計(jì)算結(jié)果。計(jì)算該批樣品平均每100g含鐵量。

1.3.2 分光光度法[3]

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密稱取氯化血紅素標(biāo)準(zhǔn)品0.018g，用0.1mol/L的NaOH溶液溶解，轉(zhuǎn)移入100mL容量瓶定容。移取1、3、5、7、10mL置于100mL容量瓶中，用0.1mol/L的NaOH溶液定容。

樣品溶液的制備：每批樣品準(zhǔn)確稱量三份，每份約0.018g，用0.1mol/L的NaOH溶液溶解，轉(zhuǎn)移入100mL容量瓶定容。移取2.5mL置于100mL容量瓶中，用0.1mol/L的NaOH溶液定容。

含量測(cè)定：以0.1mol/L的NaOH溶液為空白，用分光光度計(jì)在385nm波長(zhǎng)處測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液吸收度，由工作站繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測(cè)定樣品吸收度，工作站根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算結(jié)果。計(jì)算該批樣品平均每100g含鐵量。

1.3.3 干灰化[4]—原子吸收分光光度法[5]

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：采用三氧化二鐵配制成1mg/mL的儲(chǔ)備液。分別量取儲(chǔ)備液于50mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,使成濃度為0.5、1、2、3、4μg/mL的溶液。

樣品溶液的制備：每批樣準(zhǔn)確稱量三份，每份約0.1g，放在30mL瓷坩堝內(nèi)，在馬弗爐內(nèi)600℃灼燒1h。冷卻后加入2mL HCl(1∶1)，加熱溶解后轉(zhuǎn)移入100mL容量瓶定容。

含量測(cè)定：用去離子水為原子吸收分光光度計(jì)校零，在248.3nm波長(zhǎng)處測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液吸收度，由工作站繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測(cè)定樣品吸收度，工作站根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算結(jié)果。計(jì)算該批樣品平均每100g含鐵量。

2 結(jié)果與分析

表1氯化血紅素成品鐵含量檢測(cè) 單位：mg/100g

表2保健膠囊鐵含量檢測(cè) 單位：mg/100g

采用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS對(duì)三種方法獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，得出結(jié)果P均大于0.05，表明三種方法的檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著性差異。

此三種方法檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著性差異，說明檢測(cè)藥品和食品中血紅素中鐵的含量采用以上三種方法中的任意一種均能得到可靠的血紅素中鐵含量的結(jié)果。

3 討論

工業(yè)檢測(cè)中，在考慮檢測(cè)結(jié)果的可靠性的同時(shí)也應(yīng)該考慮檢測(cè)方法的適應(yīng)性。

HPLC法和分光光度法，樣品前處理過程繁瑣，操作時(shí)間通常為6～8h，無(wú)法滿足工業(yè)檢測(cè)的快速檢測(cè)產(chǎn)品的要求；每次檢測(cè)需要重新配置氯化血紅素標(biāo)準(zhǔn)溶液，前處理使用耗材多為一次性且價(jià)格昂貴，不利于降低檢測(cè)成本；試劑多有刺激性氣味或有毒性，不利于檢測(cè)人員健康保護(hù)。

干灰化—原子吸收分光光度法，樣品前處理操作方便，時(shí)間通常為3～4h，每次可檢測(cè)較多樣品量，可以滿足工業(yè)檢測(cè)的快速檢測(cè)產(chǎn)品質(zhì)量的要求，同時(shí)降低了檢測(cè)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度；鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液可以在冰箱的冷藏室中較長(zhǎng)時(shí)間保存不必現(xiàn)用現(xiàn)配，前處理使用耗材可重復(fù)使用且價(jià)格便宜，可節(jié)約檢測(cè)成本；試劑對(duì)檢測(cè)人員健康影響較小，有利于保護(hù)檢測(cè)人員健康。

綜合以上因素，工業(yè)上檢測(cè)血紅素建議采用干灰化—原子吸收分光光度法。

[1]李興春.氯化血紅素的性質(zhì)和檢測(cè)方法[J].中國(guó)生化藥物雜志，1993，(4)：58.

[2]霍仕霞,等.HPLC法測(cè)定氯化血紅素片劑的含量[J].分析實(shí)驗(yàn)室，2008，(5)：227.

[3]林媛,等.血紅素中鐵離子含量?jī)煞N測(cè)定方法的評(píng)價(jià)[J].海峽藥學(xué)，2005，17(4)：63.

[4]楊黎,等.IPC-AES法測(cè)定血紅素中鐵的含量[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，1998，15(5)：54.

[5]林觀樣,等.原子吸收分光光度法測(cè)定血紅素口服液中鐵的含量[J].海峽藥學(xué)，2006，18(6)：52.