周 鑫 劉偉強(qiáng) 孫海龍

(黑龍江林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157011)

花葉萬年青(DieffenbachiapictaLodd)，又名黛粉葉，天南星科花葉萬年青屬植物。原產(chǎn)南美巴西，為常綠灌木狀草本，莖干粗壯多肉質(zhì)，株高可達(dá)1.5m，葉片大而光亮，著生于莖干上部，橢圓狀卵圓形或?qū)捙樞危?，長20～50cm、寬5～15cm，葉片兩面深綠色，其上鑲嵌著密集、不規(guī)則的白色、乳白、淡黃色等色彩不一的斑點(diǎn)，花單性，佛焰花序，佛焰苞呈橢圓形?；ㄈ~萬年青色彩明亮，四季青翠，枝繁葉茂，充滿生機(jī)，優(yōu)美高雅，極耐蔭，特別適合在現(xiàn)代建筑中配置，是目前備受推崇的室內(nèi)觀葉植物之一，深受人們的喜愛，市場需求量很大?；ㄈ~萬年青常規(guī)繁殖采用分株和扦插繁殖，年繁殖系數(shù)低，一般在5～20倍。組織培養(yǎng)工廠化育苗可在短期內(nèi)獲得大量無病蟲害、優(yōu)質(zhì)苗木，滿足市場需求。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料選取與處理

選取幼葉葉柄為外植體材料。采集外植體材料用自來水沖洗，用70%乙醇消毒5～10s，傾去乙醇，用無菌水沖洗。在超凈工作臺上用0.1%的氯化汞溶液浸泡6min后，注入適量的無菌水，反復(fù)沖洗8遍，每次3min，用無菌紗布吸干水分，無菌接種到培養(yǎng)基上。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基選擇實(shí)驗(yàn)

將外植體接種在MS為基本培養(yǎng)基，細(xì)胞分裂素BA或KT，濃度分別為5.0mg/L、4.0mg/L、3.0mg/L、2.0mg/L、1.0mg/L，生長素NAA或IBA，濃度分別為1.0mg/L、0.5mg/L、0.1mg/L的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。根據(jù)生長情況選擇適宜的生長調(diào)節(jié)劑和最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

1.2.2 最佳增殖培養(yǎng)基選擇實(shí)驗(yàn)

根據(jù)誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)選擇適宜的生長調(diào)節(jié)劑，進(jìn)行增殖培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)，將誘導(dǎo)成功的0.5cm×0.5cm的材料接種在以MS為基本培養(yǎng)基，BA濃度分別為3.0mg/L、2.0mg/L、1.0mg/L，NAA濃度分別為1.0mg/L、0.5mg/L、0.1mg/L的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。根據(jù)生長情況選擇最佳增殖培養(yǎng)基。

1.2.3 最佳生根培養(yǎng)基選擇實(shí)驗(yàn)

將2cm以上芽接種到生根培養(yǎng)基，以1/2MS為基本培養(yǎng)基，生長素選用NAA，濃度分別2.0mg/L、1.0mg/L、0.5mg/L、0.1mg/L，細(xì)胞分裂素BA，濃度分別為0.5mg/L、0.3mg/L、0.1mg/L。根據(jù)生長情況選擇最佳生根培養(yǎng)基。

2 結(jié)果與分析

2.1 最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基選擇實(shí)驗(yàn)結(jié)果

外植體培養(yǎng)4周后統(tǒng)計(jì)生長情況見表1。細(xì)胞分裂素BA5.0mg/L時(shí)，植物表現(xiàn)生長調(diào)節(jié)劑過高現(xiàn)象，BA4.0mg/L時(shí)，配合適當(dāng)?shù)纳L素濃度(NAA0.5mg/L)產(chǎn)生大量愈傷組織，BA3.0mg/L，配合適當(dāng)?shù)纳L素濃度(NAA0.1mg/L)形成大量叢生芽，BA2.0mg/L時(shí)，都能形成叢生芽，BA1.0mg/L時(shí)表現(xiàn)出細(xì)胞分裂素不足，表明細(xì)胞分裂素BA對花葉萬年青誘導(dǎo)作用明顯；添加KT培養(yǎng)基外植體無顯著變化，KT對植物生長影響不顯著，對花葉萬年青無誘導(dǎo)作用。不同濃度NAA下，外植體形成愈傷組織、叢生芽，說明NAA作用明顯；不同濃度IBA下，外植體變化不明顯，說明IBA對外植體影響作用不顯著。

綜合生長情況見表1、表2，工廠化育苗最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L。

表1外植體誘導(dǎo)生長情況

續(xù)表

培養(yǎng)基不同生長素濃度生長情況1．0mg/L0．5mg/L0．1mg/LMS+BA4．0mg/L+IBA部分愈傷組織粗厚、卷曲部分愈傷組織粗厚、卷曲部分愈傷組織粗厚、卷曲MS+KT4．0mg/L+NAA膨大、突起，有少量愈傷組織外植體膨大外植體無反應(yīng)MS+KT4．0mg/L+IBA外植體無反應(yīng)外植體無反應(yīng)外植體無反應(yīng)MS+BA3．0mg/L+NAA部分愈傷組織粗厚、卷曲形成叢生芽和愈傷組織形成叢生芽MS+BA3．0mg/L+IBA形成少量叢生芽形成少量叢生芽形成少量叢生芽MS+KT3．0mg/L+NAA膨大、突起，有少量愈傷組織外植體膨大外植體無反應(yīng)MS+KT3．0mg/L+IBA外植體無反應(yīng)外植體無反應(yīng)外植體無反應(yīng)MS+BA2．0mg/L+NAA形成叢生芽形成叢生芽形成叢生芽MS+BA2．0mg/L+IBA形成叢生芽形成叢生芽形成叢生芽MS+KT2．0mg/L+NAA膨大、突起，有少量愈傷組織外植體膨大愈傷組織MS+KT2．0mg/L+IBA外植體無反應(yīng)外植體無反應(yīng)外植體無反應(yīng)MS+BA1．0mg/L+NAA形成少量愈傷組織、生長緩慢形成少量愈傷組織、生長緩慢外植體無反應(yīng)MS+BA1．0mg/L+IBA外植體無反應(yīng)外植體無反應(yīng)外植體無反應(yīng)MS+KT1．0mg/L+NAA膨大、突起，有少量愈傷組織外植體膨大外植體無反應(yīng)MS+KT1．0mg/L+IBA外植體無反應(yīng)外植體無反應(yīng)外植體無反應(yīng)

表2不同培養(yǎng)基平均形成叢生芽數(shù)量統(tǒng)計(jì)表

2.2 最佳增值培養(yǎng)基選擇實(shí)驗(yàn)結(jié)果

誘導(dǎo)材料在不同增殖培養(yǎng)基生長4周后統(tǒng)計(jì)芽增殖數(shù)量，結(jié)果見表3。經(jīng)過SPSS統(tǒng)計(jì)分析，進(jìn)行主體間效應(yīng)的檢驗(yàn)，見表4。方差齊次性檢驗(yàn)表明：BA與NAA組合，Sig=0.043，小于0.05，方差不齊次性顯著，說明不同BA與NAA組合培養(yǎng)基芽增殖差異顯著。5號培養(yǎng)基芽增殖數(shù)量最多(見圖1)，增值最佳培養(yǎng)基選擇MS+BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L。

表3不同培養(yǎng)基的芽增殖數(shù)

表4主體間效應(yīng)的檢驗(yàn)

2.3 生根培養(yǎng)基選擇實(shí)驗(yàn)結(jié)果

增殖苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基培養(yǎng)，4周后統(tǒng)計(jì)生根率結(jié)果見表5、圖2。NAA濃度0.5～1.0mg/L，配合BA濃度0～0.3mg/L都能生根，生根率20.9%～94.8%，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.5mg/L+BA0.1mg/L，生根率為94.8%。

表5生長調(diào)節(jié)劑濃度對生根率的影響 單位：%

3 結(jié)論

細(xì)胞分裂素BA、生長素NAA對花葉萬年青生長作用明顯?；ㄈ~萬年青工廠化育苗誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基MS+BA3mg/L+NAA0.5mg/L，增殖培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基MS+BA2mg/L+NAA0.5mg/L，生根最佳培養(yǎng)基1/2MS+NAA0.5mg/L+BA0.1mg/L，生根率94.8%。

[1]譚文澄，戴策剛.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M].北京：中國林業(yè)出版社，1991.

[2]陳世昌，等.植物組織培養(yǎng)[M].重慶：重慶大學(xué)出版社，2006.

[3]韋三立.花卉組織培養(yǎng)[M].北京：中國林業(yè)出版社，2001.