廖連英 羅 琳 鄭曉冰

(汕頭質量計量監(jiān)督檢測所，汕頭 515041)

嬰幼兒配方食品中阪崎腸桿菌檢驗方法的比較、優(yōu)化和研究

廖連英 羅 琳 鄭曉冰

(汕頭質量計量監(jiān)督檢測所，汕頭 515041)

阪崎腸桿菌是乳制品中近幾年發(fā)現的一種致病菌，屬于革蘭氏陰性桿菌，適宜生長溫度為37～43℃，它能引起嚴重的新生兒腦膜炎，小腸結腸炎和茵血癥，死亡率高達50%以上［1］。目前，微生物學家尚不清楚阪崎腸桿菌的污染來源，但許多病例報告表明嬰兒配方食品是目前發(fā)現的主要感染渠道［2］。目前，阪崎腸桿菌的檢測方法主要有常規(guī)的生化檢測鑒定法［2，3］、DFI法 (druggan-forsytheiversen 法 )［4］、DNA 環(huán)介導等恒擴增法［5］、普通PCR法和熒光定量PCR法。其中最常見的是普通生化鑒定法［6］(GB 4789.40-2010)和熒光定量PCR法［7］(SN／T 1632.3-2005)。筆者對這兩種方法進行了研究和比較，得到一種簡易可行的阪崎腸桿菌檢測方法，便于各檢驗機構和企業(yè)掌握以加強原料和產品的質量控制。對相關企業(yè)進行了調查，分析阪崎腸桿菌的污染原因，以獲得控制污染的監(jiān)督重點，有效降低阪崎腸桿菌的污染，確保嬰幼兒群體的健康與安全。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

熒光PCR儀：StepOne型，美國ABI公司；

恒溫培養(yǎng)箱：25℃±1℃，LRH-250型（上海一恒科學儀器公司），36℃±1℃，HG303-4A型（南京實驗儀器廠），44℃±0.5℃，LHS-250HC-1型（上海一恒科學儀器公司）；

恒溫水浴箱：HH-60型，44℃±0.5℃，金壇市科興儀器廠；

天平：JJ3000型，感量0.1 g，常熟雙杰測試儀器公司；

無緩沖蛋白胨水（BPW）：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；

腸桿菌增菌肉湯（EE肉湯）：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；

結晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂（VRBGA）：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；

改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯：研域（上海）化學試劑有限公司；

萬古霉素：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基：M160591,廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；

胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）：250 g，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；

生化鑒定試劑盒：M160591,中西遠大科技有限公司；

氧化酶試紙：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；

阪崎腸桿菌質控菌株：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.2 檢驗程序

(1)GB 4789.40-2010法

GB 4789.40-2010方法流程如圖1所示。

(2)SN／T 1632.3-2005法

SN／T 1632.3-2005方法流程如圖2所示。

2 結果比較

2.1 檢驗方法比較

(1)GB 4789.40-2010法

①無特殊設備要求，方法經典可行；

②陰性檢樣3 d可出結果，陽性檢樣4～5 d可出結果；

③在結晶紫中性紅膽鹽瓊脂平板上或阪崎顯色培養(yǎng)基上會產生假陽性菌，必須經生物鑒定方可證實是陰性還是陽性結果。

(2)SN／T1632.3-2005法

①熒光PCR檢測設備一次性投入大，后續(xù)的消耗品成本較多，同時還涉及到標準陽性菌株的管理與更新換代，對檢驗人員的技術要求較高；

②一般兩天可出檢驗結果，雖然靈敏度高，檢測周期短，但也會產生假陽性結果。對于Ct值在35～40的檢樣，需經生化鑒定方可證實是陰性結果還是陽性結果。

2.2 檢驗結果比較

經過對兩種檢驗方法的增菌法進行比較，陽性樣品最終在阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)相同(均為藍綠色菌落)和生化鑒定試劑盒鑒定結果一致(氧化酶陰性、L-賴氨酸脫羧酶陰性、L-鳥氨酸脫羧酶陽性、L-精氨酸雙水解酶陽性、檸檬酸水解陽性、D-山梨醇陰性、L-鼠李糖陽性、D-蔗糖陽性、D-蜜二糖陽性)。

2.3 方法可行性

經過反復試驗得出，對一般檢驗機構和普通企業(yè)可采用圖3推薦的方法進行實驗。

此檢驗程序對檢驗設備無特殊要求，方法可靠，所有檢驗試劑均方便購買，對檢驗人員的技術要求低，一般的檢驗機構和食品生產企業(yè)均能做到。

3 對檢出阪崎腸桿菌企業(yè)的調查分析和建議

3.1 調查分析結果

經過一年的跟蹤監(jiān)測，發(fā)現嬰幼兒米粉中阪崎腸桿菌檢出率高于嬰幼兒奶粉。通過對檢出阪崎腸桿菌企業(yè)的調查分析，發(fā)現感染阪崎腸桿菌的原因主要是(1)生產環(huán)境的衛(wèi)生管理。嬰幼兒配方食品生產環(huán)境要求嚴格，企業(yè)雖然采用潔凈車間進行生產，但是對潔凈車間空氣凈化系統(tǒng)的維護、清理和保養(yǎng)不夠重視，造成空氣凈化系統(tǒng)成為污染源之一，另外對生產后的管道清理不干凈也是污染源之一(如有蟑螂出沒和霉變結塊)。(2)操作人員的個人衛(wèi)生不嚴格，如沒有嚴格按規(guī)定洗手、更衣、戴帽，穿專用工作鞋進入生產車間。

3.2 建議

(1)生產嬰幼兒配方食品的企業(yè)應定期對生產車間的環(huán)境、空氣凈化系統(tǒng)、管道進行清掃、消毒，并嚴格監(jiān)督生產操作人員的衛(wèi)生習慣。

(2)因阪崎腸桿菌是存在于環(huán)境中的一種生物，常見于生產嬰幼兒配方食品的設施和家居環(huán)境中，因此，為防止開封后的產品受到家居環(huán)境的污染，開封后的產品應密封保存于陰涼干燥處。

(3)要安全沖調嬰幼兒配方食品，首先必須把喂哺或沖調器具加以清洗和消毒。應使用不低于70度的開水來沖調嬰幼兒配方食品，以殺死阪崎腸桿菌。沖調好的食品應冷卻至可喂哺的溫度，然后立即飲用，若沖調后2 h內仍未被飲用就應該倒掉。

(4)為保證我國廣大嬰幼兒群體的健康與安全，建議加大監(jiān)管力度，在嬰幼兒谷類輔助食品和較大嬰兒和幼兒配方食品標準中也應增加阪崎腸桿菌指標。

［1］徐文杰，張娟，戴峰，等.陰溝腸桿菌所致食品中毒細菌學及防治對策研究［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2006，16(9)：132.

［2］高建新，盧兆蕓，肖菊珍.奶粉中阪崎腸桿菌檢測方法［J］.中國乳品工業(yè)，2009，37(5)：40-43.

［3］高建新，陳海嬰，盧兆蕓.奶粉中一株阪崎腸桿菌的分離鑒定［J］.現代預防醫(yī)學，2010，37(1)：105-106.

［4］張愛霞，生慶海，張濤.食品中阪崎腸桿菌分析及檢測［J］.中國乳品工業(yè)，2005，33(10)：42-44.

［5］魯曦，師寶忠，王彬，等.LAMP法檢測乳粉中的阪崎腸桿菌［J］.現代食品科技，2010，26(5)：540-543.

［6］GB 4789.40-2010 食品微生物檢驗阪崎腸桿菌檢驗［S］.

［7］SN／T 1632.3-2005 奶粉中阪崎腸桿菌檢驗方法［S］.

鄭曉冰，E-mail：narcissus.b@163.com

2011-08-12