閭雯娟，唐 寧

（1石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院，石河子832002；2石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，石河子832002）

白介素－18在大鼠視網(wǎng)膜新生血管形成中的作用

閭雯娟1，唐 寧2

（1石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院，石河子832002；2石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，石河子832002）

為探討白介素－18對大鼠視網(wǎng)膜中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）及新生血管形成的影響。采用50只7 d齡清潔級SD大鼠幼鼠隨機(jī)分為5組，即空白對照組、高氧未處理組、生理鹽水實(shí)驗(yàn)組、高濃度實(shí)驗(yàn)組和低濃度實(shí)驗(yàn)組，建立高氧誘導(dǎo)的新生大鼠產(chǎn)生視網(wǎng)膜新生血管的動物模型。分別對3個(gè)給藥組雙眼玻璃體腔內(nèi)注射生理鹽水、IL－18（50 ng／μL、50 ng／μL）1μL。免疫組織化學(xué)染色法觀察VEGF在視網(wǎng)膜各層的表達(dá)，應(yīng)用CD34計(jì)算突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的新生血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)，比較各組間差異。結(jié)果顯示，（1）HE染色顯示，各實(shí)驗(yàn)組均有較多新生血管內(nèi)皮細(xì)胞核突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜進(jìn)入玻璃體腔內(nèi)，但高濃度實(shí)驗(yàn)組及低濃度實(shí)驗(yàn)組明顯低于生理鹽水實(shí)驗(yàn)組及高氧未處理組，并且高濃度實(shí)驗(yàn)組低于低濃度實(shí)驗(yàn)組。（2）VEGF在各組視網(wǎng)膜中均有表達(dá)，在高氧組表達(dá)明顯增加，IL－18給藥組表達(dá)相對較弱，空白對照組最弱。（3）空白對照組極少見增生的毛細(xì)血管，其余各組發(fā)現(xiàn)較多CD34標(biāo)記的增生的毛細(xì)血管，高濃度實(shí)驗(yàn)組、低濃度實(shí)驗(yàn)組相對較少，且組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。由此可知，IL－18玻璃體腔內(nèi)注射可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖及遷移，從而抑制視網(wǎng)膜新生血管的形成。

白介素－18；視網(wǎng)膜新生血管；血管內(nèi)皮生長因子

眼內(nèi)新生血管的形成是一個(gè)非常復(fù)雜的過程，可能是由于在多種細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子對眼內(nèi)細(xì)胞增殖的調(diào)控過程中，破壞了促血管生成因子和血管生成抑制因子間的平衡，最終導(dǎo)致正常組織內(nèi)新生血管的長入。由于新生血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙增大引起的出血、滲出和增生常常導(dǎo)致眼內(nèi)結(jié)構(gòu)和功能的破壞終致視力的喪失。因此，抑制新生血管的形成是治療這類疾病的關(guān)鍵。隨著醫(yī)學(xué)分子學(xué)和病理學(xué)技術(shù)等基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)科學(xué)的迅速發(fā)展，對抑制新生血管形成的研究有了新的進(jìn)展。尤其是發(fā)現(xiàn)IL－18能通過抑制腫瘤組織的新生血管生成而抑制腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移［1］。近年研究還發(fā)現(xiàn)，白介素－18與動物新生血管性眼病的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)［2］。因此、我們選擇通過高氧誘導(dǎo)幼鼠視網(wǎng)膜新生血管形成，并采用玻璃體腔注射IL－18后取視網(wǎng)膜通過病理學(xué)檢測，觀察其對視網(wǎng)膜新生血管形成的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

混合氣體（80%醫(yī)用氧氣與20%醫(yī)用氮?dú)獾幕旌蠚怏w，由石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院高壓氧科提供）。自制60 c m×40 c m×30 c m透明無毒玻璃密閉箱（上方留直徑10 c m的圓形開口，以便拿取動物，用大于開口的玻璃加蓋。容器的兩面?zhèn)缺趯蔷€位置分別打孔，一端接進(jìn)氣管，連于混合氣瓶；另一端接出氣管，連于測氧儀。各管道連接口及蓋板涂以真空硅脂，確保密閉。容器底鋪鈉石灰顆粒，保持容器內(nèi)干燥）。氧濃度測量儀（梅城電化分析儀器廠，CY－12C），1μL微量注射器（上海生工生物技術(shù)有限公司提供），IL－18由北京博奧森生物技術(shù)有限公司提供，一抗小鼠抗大鼠mAb（VEGF購自美國neo maker公司，CD34購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。），SP免疫組化染色試劑盒（北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品），DAB顯色液（華美公司），健康7 d齡Sprague Dawley（SD）大鼠（新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供）50只，雌雄不限。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物分組及模型的制備

采用同日出生7 d的SD大鼠幼鼠50只，共100只眼，隨機(jī)選取40只統(tǒng)一編號后置于密閉玻璃箱中，一端接進(jìn)氣管，連于混合氣體，另一端接出氣管，連于測氧儀，保持氧箱內(nèi)氧濃度為750±20 mL／L，室溫保持（23±2）℃，每日打開氧倉3次各2 h，將4只母鼠放入喂養(yǎng)并更換箱內(nèi)墊料，開箱時(shí)間約1 h，氧倉中連續(xù)飼養(yǎng)5 d，建立高氧誘導(dǎo)的血管增生性視網(wǎng)膜病變模型，小鼠在氧倉內(nèi)生長良好，無死亡現(xiàn)象。剩余10只為空白對照組，不給予任何處理，正常環(huán)境中飼養(yǎng)。建模后40只幼鼠隨機(jī)分為高濃度實(shí)驗(yàn)組（10只）：給予雙眼玻璃體內(nèi)注射1μL的IL－18（50 ng／μL）。低濃度試驗(yàn)組（10只）：給予雙眼玻璃體內(nèi)注射1μL的IL－18（10 ng／μL）。生理鹽水實(shí)驗(yàn)組（10只）：給予雙眼玻璃體內(nèi)注射1μL的生理鹽水。高氧未處理組（10只）：雙眼不給予任何處理。繼續(xù)在正常環(huán)境中飼養(yǎng)，第21天將5組小鼠頸椎脫臼處死，摘取雙眼球，分別標(biāo)記方向并編號，于中性甲醛中固定48 h。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

將每組小鼠兩只眼球浸泡在4%甲醛固定液中，固定48 h后常規(guī)脫水，石蠟包埋，矢狀面平行視神經(jīng)連續(xù)切片，厚度5μm，每只眼球選取10個(gè)切面（去掉有視神經(jīng)的切面），貼于玻片上。

在H.E.染色的組織學(xué)切片上觀察，在低倍鏡下統(tǒng)計(jì)平均每張眼球切片突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜而長入玻璃體內(nèi)的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)。

運(yùn)用免疫組化方法檢測視網(wǎng)膜中VEGF的表達(dá)，CD34標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞觀察視網(wǎng)膜血管改變。將切片常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水，微波抗原修復(fù)。每張切片滴加過氧化物酶阻斷劑以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性；各組隨機(jī)抽取10張切片滴加VEGF抗體，其余10張滴加人抗鼠CD34抗體；滴加聚合物增強(qiáng)劑；滴加酶標(biāo)抗鼠聚合物；DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，封片。

顯微鏡下觀察，免疫組織化學(xué)陽性染色為細(xì)胞漿內(nèi)棕黃色顆粒，陽性細(xì)胞判斷標(biāo)準(zhǔn)：以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒者為陽性細(xì)胞，每張切片取3～5個(gè)典型者10×40倍視野進(jìn)行觀察，每個(gè)視野連續(xù)計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，根據(jù)切片上著色細(xì)胞比例不同分別標(biāo)示為：陰性（－）：無著色細(xì)胞或僅有＜10%細(xì)胞著色，計(jì)為0分。弱陽性（±）：陽性細(xì)胞數(shù)10%～25%，計(jì)為1分。陽性分為：（＋）陽性細(xì)胞數(shù)25%～50%，計(jì)為2分；（＋＋）陽性細(xì)胞數(shù)50%～75%，計(jì)為3分；（＋＋＋）陽性細(xì)胞數(shù)75%～100%，計(jì)為4分；進(jìn)行免疫組化定性分析。

所有記錄數(shù)據(jù)整理后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。各組數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS13.0對表達(dá)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。對所測結(jié)果進(jìn)行正態(tài)分析及方差齊性檢驗(yàn)，各組差異采用單因素方差分析法，LSD檢驗(yàn)法進(jìn)行兩兩比較，P＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 組織形態(tài)學(xué)結(jié)果

空白對照組基本看不到突出內(nèi)界膜的血管芽，內(nèi)界膜下視網(wǎng)膜內(nèi)的血管內(nèi)皮細(xì)胞散在分布、數(shù)量較少，高氧未處理組和生理鹽水實(shí)驗(yàn)組可見大量突出內(nèi)界膜伸向玻璃體腔的血管內(nèi)皮細(xì)胞核，內(nèi)界膜下視網(wǎng)膜內(nèi)也有大量血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，高氧未處理組和生理鹽水實(shí)驗(yàn)組突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的內(nèi)皮細(xì)胞核個(gè)數(shù)與正常對照組比較差異均有顯著性意義，表明該視網(wǎng)膜新生血管形成的動物模型誘導(dǎo)成功。高、低濃度實(shí)驗(yàn)組切片中均可見到突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的新生血管的內(nèi)皮細(xì)胞核，但較高氧未處理組、生理鹽水實(shí)驗(yàn)組及空白對照組明顯減少，平均每張切片突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的內(nèi)皮細(xì)胞核個(gè)數(shù)與高氧未處理組、生理鹽水實(shí)驗(yàn)組及空白對照組比較差異均有顯著性意義（表1、圖1）。

表1 各實(shí)驗(yàn)組突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜血管內(nèi)皮細(xì)胞核個(gè)數(shù)Tab.1 numbers of endotheliocyte nuclei of neovascularization

圖1 各組視網(wǎng)膜組織HE染色顯微鏡觀察照片（400×）Fig.1 HE－staining results of each group mice retinal（400×）

2.2 視網(wǎng)膜VEGF蛋白免疫組織化觀察及評分結(jié)果

觀察及評分結(jié)果見圖書室和表達(dá)式。由圖2和表2可知：VEGF蛋白主要位于細(xì)胞胞漿，主要定位于視網(wǎng)膜內(nèi)核層和神經(jīng)纖維層。正常對照組VEGF蛋白表達(dá)極少，胞漿染色呈淺棕黃色；高氧未處理組、生理鹽水實(shí)驗(yàn)組VEGF蛋白表達(dá)明顯增多，胞漿染色呈棕色或深棕色；高、低濃度實(shí)驗(yàn)組VEGF蛋白表達(dá)減少，胞漿染色變淺，呈淺棕色。

表2 各實(shí)驗(yàn)組視網(wǎng)膜VEGF蛋白表達(dá)評分 n＝10，Tab.2 Results of immunohistochemistry of VEGF

表2 各實(shí)驗(yàn)組視網(wǎng)膜VEGF蛋白表達(dá)評分 n＝10，Tab.2 Results of immunohistochemistry of VEGF

注：＊表示各組與空白對照組之間比較P＜0.05；△表示高、低濃度實(shí)驗(yàn)組與生理鹽水實(shí)驗(yàn)組、高氧未處理組之間比較P＜0.05；★表示高濃度實(shí)驗(yàn)組與低濃度實(shí)驗(yàn)組之間比較P＜0.05。

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圖2 各組視網(wǎng)膜組織VEGF免疫組化染色顯微鏡觀察照片（400×）Fig.2 VEGF immunohistochemistry coloured results of each group mice retinal（400×）

2.3 CD34免疫組織化染色觀察及評定結(jié)果

CD34免疫組化方法標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞觀察視網(wǎng)膜血管數(shù)量和形態(tài)的改變，光鏡下選取血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記清晰、背景對照良好的10個(gè)HPF（400倍）計(jì)算毛細(xì)血管數(shù)的平均值?？瞻讓φ战M視網(wǎng)膜毛細(xì)血管發(fā)育良好，內(nèi)外毛細(xì)血管均達(dá)到視網(wǎng)膜周邊部和視網(wǎng)膜各層，且數(shù)量較少；高氧未處理組、生理鹽水實(shí)驗(yàn)組視網(wǎng)膜毛細(xì)血管增生明顯，部分血管增生可延及玻璃體，可見血管擴(kuò)張，部分伴有出血；高、低濃度實(shí)驗(yàn)組視網(wǎng)膜毛細(xì)血管亦增多，但較高氧未處理組、生理鹽水實(shí)驗(yàn)組減少，且血管結(jié)構(gòu)良好（表3、圖3）。

表3 各實(shí)驗(yàn)組視網(wǎng)膜CD34標(biāo)記血管計(jì)數(shù)Tab.3 expression of neovascularization by CD34

圖3 各組視網(wǎng)膜組織CD34免疫組化染色顯微鏡觀察照片（400×）Fig.3 CD34 immunohistochemistry coloured results of each group mice retinal（400×）

3 討論

新生血管形成是新生血管性視網(wǎng)膜病變的重要標(biāo)志，促血管生長因子增加與抑制血管生長因子減少是其主要原因，特別是某些促新生血管形成的細(xì)胞因子，控制著內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，對血管新生具有調(diào)節(jié)作用。目前研究證明，血管內(nèi)皮細(xì)胞因子（VEGF）與視網(wǎng)膜新生血管的形成直接有關(guān)［3］。VEGF與其特異性受體VEGFR結(jié)合（包括FIt、KDR），誘導(dǎo)酪氨酸磷酸化，促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂，介導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生分化；其中與KDR結(jié)合可促使NO產(chǎn)生增加，激活環(huán)氧化酶刺激前列腺素的產(chǎn)生，NO和前列腺素均可使VEGF的促進(jìn)血管通透性能力增強(qiáng)［4］。研究認(rèn)為：缺氧在新生血管形成初始可能起重要作用，而VEGF在與缺氧有關(guān)的眼內(nèi)新生血管化過程中起關(guān)鍵作用：高氧下調(diào)VEGF引起血管退化，而隨后的VEGF上調(diào)導(dǎo)致視網(wǎng)膜新生血管形成［5］。目前臨床上已經(jīng)有多種抗VEGF的治療，大多是通過競爭性與VEGF抗原結(jié)合，阻斷VEGF與血管內(nèi)皮細(xì)胞上的受體結(jié)合，從而阻斷血管生成的啟動，并被證實(shí)在多種視網(wǎng)膜血管病變中效果顯著［6］。有研究報(bào)道，玻璃體內(nèi)注射酪氨酸激酶抑制劑，可以阻斷VEGFR酪氨酸激酶的活性，從而減少視網(wǎng)膜新生血管的形成［7］。本實(shí)驗(yàn)通過建立高氧誘導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜新生血管的動物模型，行玻璃體腔注射白介素－18后取視網(wǎng)膜組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)染色定性分析視網(wǎng)膜VEGF的表達(dá)，根據(jù)各組視網(wǎng)膜中VEGF陽性表達(dá)對比結(jié)果，觀察白介素－18在新生大鼠視網(wǎng)膜新生血管發(fā)生過程中的作用。

IL－18主要由活化的單核－巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，有許多生物學(xué)活性，能通過誘導(dǎo)T細(xì)胞、NK細(xì)胞增殖，分泌IFN、GM－CSF，促進(jìn)Fas L的表達(dá)，從而抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子VEGF、b－FGF的表達(dá)，減少腫瘤組織的新生血管生成［7］。最近的研究顯示，IL－18基因敲除后的新生小鼠有視網(wǎng)膜血管擴(kuò)展及滲漏現(xiàn)象，以及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF），血小板源性生長因子（PDGF），堿性成纖維生長因子（b FGF）和色素上皮源性生長因子（PEDF）的過表達(dá)，并且在糖尿病大鼠中發(fā)現(xiàn)隨糖尿病病程的發(fā)展，視網(wǎng)膜中IL－18的表達(dá)逐漸降低，對 VEGF、IGF－1抑制作用減弱，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，新生血管形成［8－11］。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示：從視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，正常對照組視網(wǎng)膜形態(tài)完好，內(nèi)界膜下血管內(nèi)皮細(xì)胞散在分布、數(shù)量較少。其他各組均可見較多突出內(nèi)界膜伸向玻璃體腔的血管內(nèi)皮細(xì)胞核。但通過內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)，我們發(fā)現(xiàn)高氧未處理組和生理鹽水實(shí)驗(yàn)組突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的內(nèi)皮細(xì)胞核個(gè)數(shù)最多，與空白對照組和高、低濃度實(shí)驗(yàn)組比較差異均有顯著性意義（P＜0.001）。而通過外源性IL－18干預(yù)的高、低濃度實(shí)驗(yàn)組切片中突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的新生血管的內(nèi)皮細(xì)胞核計(jì)數(shù)明顯減少，與其余各組比較差異均有顯著性意義（P＜0.05），且高濃度實(shí)驗(yàn)組內(nèi)皮細(xì)胞核計(jì)數(shù)少于低濃度實(shí)驗(yàn)組（P＜0.05），說明IL－18可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，并隨著注射濃度的增加，對視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞核增殖及遷移的抑制作用增強(qiáng)。而通過免疫組織化學(xué)染色檢測視網(wǎng)膜中VEGF與CD34的表達(dá)，進(jìn)一步觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及新生血管的形成，我們發(fā)現(xiàn)空白對照組視網(wǎng)膜VEGF呈弱陽性表達(dá)，主要定位于內(nèi)核層和神經(jīng)纖維層，高氧未處理組及生理鹽水實(shí)驗(yàn)組呈強(qiáng)陽性表達(dá)，各層均有表達(dá)，以神經(jīng)纖維層，內(nèi)界膜層以及突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞為主，高、低濃度實(shí)驗(yàn)組各層均勻表達(dá)，呈現(xiàn)弱陽性。通過病理學(xué)評分顯示高、低濃度實(shí)驗(yàn)組與其余各組VEGF表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），并且高、低濃度實(shí)驗(yàn)組間比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果一致，進(jìn)一步說明IL－18對血管內(nèi)皮細(xì)胞的抑制作用。通過CD34陽性表達(dá)，計(jì)數(shù)各組視網(wǎng)膜內(nèi)血管數(shù)量，顯示空白對照組中血管數(shù)量極少，血管形態(tài)完整。高氧未處理組及生理鹽水實(shí)驗(yàn)組血管數(shù)量明顯增多，血管腔大小、分布不均勻，血管數(shù)量與空白對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而高、低濃度實(shí)驗(yàn)組血管數(shù)量相對較少，分布較均勻，血管數(shù)量與其余各組比較差異均有顯著性意義，且高濃度實(shí)驗(yàn)組血管數(shù)量少于低濃度試驗(yàn)組，進(jìn)一步說明IL－18可抑制新生血管的形成。本組實(shí)驗(yàn)研究表明，IL－18玻璃體腔注射短期內(nèi)就可以抑制視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞VEGF的表達(dá)，在某種程度上說明了IL－18可以通過影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，從而抑制視網(wǎng)膜新生血管的形成，為視網(wǎng)膜新生血管性眼病的病理機(jī)制提供理論支持。

白介素－18是近年來被發(fā)現(xiàn)的重要多效能炎癥細(xì)胞因子，與新生血管有著密不可分的關(guān)系，其機(jī)制可能包括破壞 Th1／Th2細(xì)胞比例平衡、上調(diào)ICA M、生成血管內(nèi)皮生長因子等免疫調(diào)節(jié)機(jī)制及炎性應(yīng)答反應(yīng)［12］。目前，國內(nèi)外對白介素－18在腫瘤治療中的應(yīng)用有研究較多，其作用與抑制腫瘤增殖活性及微血管生成相關(guān)［13－15］，眼科研究較少，且尚未見眼內(nèi)給藥的文獻(xiàn)報(bào)道。本研究以新生SD大鼠為動物模型，通過高氧誘導(dǎo)新生血管形成，向玻璃體腔內(nèi)注射不同濃度的IL－18，觀察其對視網(wǎng)膜新生血管形成的抑制作用，證實(shí)白介素－18玻璃體腔注射能有效抑制氧誘導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜新生血管的形成。本實(shí)驗(yàn)還給予不同劑量白介素－18玻璃體腔注射，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），進(jìn)一步說明白介素－18對視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用具有劑量依賴性。本實(shí)驗(yàn)研究中白介素－18可能通過刺激Th1細(xì)胞產(chǎn)生IFN－γ，干擾細(xì)胞周期，抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增值和分化，降低VEGF，從而抑制視網(wǎng)膜新生血管的形成。擴(kuò)展了對新生血管性眼病發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識，也為其早期干預(yù)提供了可能，但是白介素－18在人類眼內(nèi)給藥的劑量和安全性等方面有待進(jìn)一步研究。

［1］Yoshiji H，Noguchi R，Kuriyama S，et al.Combination of interferon and angiotensin－converting enzy me inhibitor，perindop ril，suppresses liver carcinogenesis and angiogenesis in mice［J］.Oncol Rep，2005，13（3）：491－495.

［2］Tdhara H，Oikawa Y，Shi mada A，et al.Systemic Administration of IL－18 pro motes develop ment in young nonobese diabetic mice［J］.J Immunol，2003，171：5865－5875.

［3］Ferrara N，Ger ber H P，Le Couter J.The biology of VEGF and its receptors［J］.Nature Medicine，2003，9（6）：669－676.

［4］Zhang S X，Ma J X，Sina J Chen Y，et al.Genetic difference in susceptibility to the blood－retina barrier breakdown in diabetes and oxygen－induced retinopathy［J］.Am J Pathol，2005，166（1）：313－321.

［5］Leske D A，Wu J，Mookada m M，et al.The relation s hip of retinal VEGF and retinal IGF－1 mRNA with neovas cularization in an acid osis－induced model of ret in opathyof prem aturity［J］.Curr eye Res，2006，31（2）：163－169.

［6］段易存，朱丹.血管內(nèi)皮生長因子在早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病中的研究進(jìn)展［J］.疾病監(jiān)測與控制雜志，2010，6（4）：323－324.

［7］杜鵑，陳超.血管內(nèi)皮生長因子在早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病發(fā)病中的作用［J］.國際兒科學(xué)雜志，2006，33（2）：78－81.

［8］Renhai C.Jacob F，Masashi K，et al.Interleukin－18 acts sa an angiogenesis and tumor suppressor［J］.The FASEB Jour nal，1999，（13）：2195－2202.

［9］Qiao H，sonoda K H，sassa Y，et al.Abnor mal retinal vascular develop ment in IL－18 knockout mice［J］.Lab Invest，2004，（84）：973－980.

［10］石蕊，孫兆義，洪晶.白介素－18、血管內(nèi)皮生長因子與角膜病變血管形成關(guān)系的研究［J］.中國實(shí)用眼科雜志，2006，24（4）：373－376.

［11］梅妍，周鴻鷹，李愛冬，等.白介素－18及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜的表達(dá)［J］.中華眼底病雜志，2005，21（4）：258－260.

［12］劉文強(qiáng).白細(xì)胞介素18研究進(jìn)展［J］.動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，30（4）：83－86.

［13］陳湘琦，林挺巖，李志鷹.白細(xì)胞介素－18對Lewis肺癌小鼠腫瘤增值及微血管生成的抑制作用［J］.中國癌癥雜志，2009，19（1）：17－20.

［14］Han M Y，Zheng S，Yu J M，et al.Study on interleukin－18 gene transfer into hu man breast cancer cells to prevent tumorigenicity［J］.J Zhejiang Univ Sci，2004，5（4）：472－476.

［15］Leng J，Zhang L，Yao H，et al.Antitu mor effects of interleukin－18 gene－modified hepatocyte cell line on i mplanted liver carcino ma［J］.Chin Med J（Engl），2003，116（10）：1475－1479.

The Experi mental Study of Interleukin－18 Effects in Rat Retinal Neovascularization

Lü Wenjuan1，TANG Ning2
（1 Medical of College，Shihezi University，Shihezi 832002，China；2 The First Affiliated Hospital of Medical College，Shihezi University，Shihezi 832002，China）

To investigate t he effects of IL－18 on retinal neovascularization and the expression of VEGF on mice.Fifty seven－dayold neonatal SD mice were randomly divided into five gr oups：control group、NaCl group、hyper xia experi mental group，low concentration experi mental group and high concentration experi mental group.Retinalneovascularization models were induced by hyper xia in newbor n m ic.The mice in injected group were respectively treated with intravitreal injection of Nacl、interleukin－18（10 ng／μL and 50 ng／μL）1μL.The expression of VEGF at layers of retina was detected by i mmunohistochem istr y.The nu mbers of the endot heliocyte nuclei of neovascularization which broke through the retinal inner li m iting membranewere calcu－lated by CD34 in or der to evaluate inhbiting effects of the Bevacizu mab on the retinal neovascularization.（1）The nu mber of endotheliocyte nuclei of neovascularization was small in control gr oup，but in hyper xia experi mental group，low concentration experi mental group and high concentration experi mental group，there are much more endotheliocyte nuclei and the low concentration experimental group was more than in high concentration experi mental group.（2）The expression of VEGF was found at all layers of retina in each group，significantly increased in hyper xia experi mental group，relatively decreased in high and low dose experi mental group，and was the lowest in control group.（3）The expression of neovascularization by CD34 was found at all layers of retina in each group，significantly increased in hyper xia experi mental group and NaCl group，relatively decreased in high and lo w concentration experi mental group，and was to the lowest in control group.There was significant differences for low and high concentration experi mental group compared（P＜0.05）.Interleukin－18 can inhibit the endotheliocyte nuclei proliferation and migration，effectively inhibit the retinal neovascularization.

book=323,ebook=222

Interleukin－18；Neovascularization；vascular endothelial growth factor

R774

A

1007－7383（2011）03－0322－06

2010－12－10

閭雯娟（1984－），女，碩士生，專業(yè)方向?yàn)檠奂〔〖把鄣撞　?/p>

唐寧（1969－），女，副教授，從事眼底疾病與眼肌疾病研究；e－mail：tangning555＠s163.co m。