摘要:血液樣品采集技術(shù)直接影響血樣的質(zhì)量，進(jìn)而影響到免疫效果和疫情監(jiān)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。綜合業(yè)內(nèi)常用的各種作法，結(jié)合實(shí)踐體會(huì)，對(duì)翅內(nèi)側(cè)翼下靜脈采血、跖骨內(nèi)側(cè)靜脈采血、右側(cè)頸靜脈采血、心臟采血等采血方法及血清的制備方法，就操作要領(lǐng)、方法應(yīng)用與選擇(家禽種類及日齡、需要血量多少)、方法評(píng)價(jià)等進(jìn)行了較為詳細(xì)的描述和總結(jié)，對(duì)血液樣品采集過程中各關(guān)鍵操作環(huán)節(jié)提出了注意事項(xiàng)。

關(guān)鍵詞:血液樣品;家禽;采集

中圖分類號(hào):S852.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B文章編號(hào):1007-273X(2010)07-0040-02

養(yǎng)禽場(chǎng)對(duì)免疫后的抗體監(jiān)測(cè)及疾病感染情況的檢測(cè)是禽類疫病防控的重要手段，家禽血液樣品的采集(主要是血清樣本)是一項(xiàng)重要的常規(guī)性和前提性工作，血樣質(zhì)量的好差，直接影響到監(jiān)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。正確的血液樣品采集技術(shù)是采血質(zhì)量的前提保證。筆者結(jié)合長(zhǎng)期的實(shí)踐體會(huì)，主要針對(duì)家禽血液樣品的采集、血清的制備及注意的問題進(jìn)行介紹。

1器材的準(zhǔn)備

采血器(常用5mL一次性塑料注射器)、血樣收集管(有蓋試管或V形管，并貼好標(biāo)簽，便于登記)、試管架、5%碘酊棉球、75%酒精棉球、一次性塑料離心管、離心機(jī)、膠布或標(biāo)簽紙、記號(hào)筆、相關(guān)表格等。

2采血方法

采血方法的選擇，主要取決于采血的目的、所需血樣或血清的數(shù)量以及家禽的種類、年齡等。凡用血量較少的檢驗(yàn)如血液涂片、雞白痢全血平板凝集試驗(yàn)等，可刺破冠、腳蹼皮下靜脈等組織，以吸管或毛細(xì)吸管直接取新鮮的血液;用中量血時(shí)可從靜脈血管采集;當(dāng)需血量較多時(shí)可以從心臟采集。雛雞(1～30日齡)、水禽可采用跖骨內(nèi)側(cè)靜脈采血法，成雞(30日齡以上)可采用翅內(nèi)側(cè)翼下靜脈采血法。

2.1翅內(nèi)側(cè)翼下靜脈采血法

此法適宜于30日齡以上的家禽，尤其是成雞，不適用于雛禽和水禽。雛禽翼下靜脈較細(xì)，且水禽羽毛豐厚，采血時(shí)須拔去絨羽會(huì)造成皮下毛細(xì)血管血液滲出，不易看清靜脈位置，另外翅內(nèi)側(cè)皮膚松軟，血管位置不容易控制，采血時(shí)容易滾針，造成翅部瘀血，影響其活動(dòng)及采食，也容易造成感染，影響經(jīng)濟(jì)效益。

對(duì)于雞等體重較輕的家禽，助手以一手固定禽的兩只腿，另一手固定兩翼，腹部朝外，助手握兩翼的手稍高于另一手，暴露出翅膀內(nèi)側(cè)。采血員左手使禽翅膀展開，露出腋窩部，拔去該部羽毛，可見到由翼根進(jìn)入腋窩的一條較粗的靜脈，即翼根靜脈。其遠(yuǎn)心端有一條較細(xì)的靜脈，即翼下靜脈。用5%碘酊和70%酒精棉球分別依次消毒暴露靜脈處的皮膚，待酒精揮發(fā)干燥后采血。術(shù)者用左手拇指壓迫翼下靜脈的近心端，使血管怒張，右手持帶5#~7#針頭(由于家禽靜脈較細(xì)，盡量選擇小號(hào))的采血器，由翼根向翅尖方向(血流的相反方向)，以針口斜面向上，約與皮膚呈15°角沿靜脈刺入血管內(nèi)，見血液回流，即可抽取血液[1]。持針時(shí)手要穩(wěn)，進(jìn)針不宜過深，如刺穿血管，則很快引起皮下血腫，導(dǎo)致采血失敗。抽血速度一定要緩慢，否則會(huì)使血管內(nèi)壁互相粘連或針尖斜面緊貼血管內(nèi)壁而采不出血并出現(xiàn)氣泡。采血完畢后，局部消毒并適當(dāng)壓迫針孔處30s后即可止血。

2.2跖骨內(nèi)側(cè)靜脈采血法

優(yōu)點(diǎn):①易于保定，血管位置明顯，血管不易滾動(dòng);②各個(gè)日齡的禽只均適用，尤其適用于水禽[2]和雛禽。

助手一手固定兩翼根部，另一手固定一腳，使禽側(cè)臥，禽腳朝向采血者。采血者左手固定另一腳，按住跖骨內(nèi)側(cè)的靜脈，使腿部靜脈突起，常規(guī)消毒后，右手持5#采血器與跖骨皮膚呈10°角順血管方向進(jìn)針取血[3]。跖骨內(nèi)側(cè)靜脈采血是向心方向采血，采血時(shí)要注意進(jìn)針角度不能太大，回抽活塞的速度也不能過快。

對(duì)日齡很小的雛禽，術(shù)者用左手中指及無名指夾住左腿，暴露跖骨內(nèi)側(cè)靜脈，方法同上。雛禽的血管細(xì)小，血流量很少，所以在抽血的過程中要特別緩慢。

2.3右側(cè)頸靜脈采血法

右側(cè)頸靜脈較左側(cè)粗，故常采用右側(cè)[4]。左手以食指和中指夾住家禽頭部，并使頭偏向左側(cè);常規(guī)消毒后，以拇指輕壓頸椎根部以使靜脈充血怒張。右手持注射器，挑破皮膚，傾斜30°左右角刺入靜脈取血液。

2.4心臟采血法

心臟采血對(duì)心臟損傷較大，也易傷及其他臟器，造成內(nèi)臟出血，影響正常生長(zhǎng)，甚至?xí)斐伤劳?，特別是雛雞，常因針頭刺破心臟和肝臟導(dǎo)致出血過多而死。心臟采血雖然較有難度，但是采血速度快、血量多、效率高，尤其適用于需要多量血液時(shí)采用。

(1)助手右手抓住雞雙腿，左手握住兩翅膀，使雞右側(cè)臥，左側(cè)面向上，放在小桌或小凳子上。術(shù)者自龍骨突起前緣引一直線到翅基，再由此線中點(diǎn)向髖關(guān)節(jié)引一直線，此線前1/3和中1/3的交界處有一凹陷，即是心臟采血進(jìn)針的部位，食指觸摸該處可感覺心跳(15日齡內(nèi)雛雞更明顯);或找出由胸骨走向肩胛部的皮下大靜脈，心臟約在該靜脈分支下側(cè)。局部拔毛，常規(guī)消毒，用7#~9#針頭的采血器從肋骨間隙垂直進(jìn)針，一般刺入2～3cm(進(jìn)針深度應(yīng)根據(jù)家禽個(gè)體大小作適當(dāng)調(diào)整)即可達(dá)心臟，慢抽采血器，如不回血可調(diào)整進(jìn)針深度，直至回血為止。若調(diào)整幾次后仍不回血，可抽出針頭，在附近重新垂直刺入，切不可在胸腔內(nèi)任意調(diào)整針頭方向亂刺。大雞一般取30mL不致造成死亡。

(2)助手將禽仰臥保定，并使頸部及兩腿伸展。術(shù)者用手摸到胸骨的前端，兩側(cè)鎖骨融合成“V”字形的地方(鴨、鵝兩鎖骨的聯(lián)合處較圓)，局部常規(guī)處理。穿刺時(shí)，使該部皮膚緊張，避開嗉囊，針頭垂直向下刺入，然后將角度略減小，繼續(xù)斜向胸腔深部刺入，但要保持針尖指向胸腔中線，不宜偏斜(否則會(huì)刺傷肺組織)，直至刺入心房，即可緩慢抽取血液。雞心臟采血應(yīng)在嗉囊空虛時(shí)進(jìn)行，較為方便[5]。

3血清的制備與送檢

3.1分離方法

采到血液后，應(yīng)立即將針頭拔掉，把注射器內(nèi)的血液沿著試管壁緩緩注入干凈的干燥的試管或V形管中，編號(hào)，傾斜放置好;也可將采集到的血液保存在一次性注射器中自然析出血清，采血時(shí)將注射器活塞向后拉留出1cm左右的空隙，用針帽將針頭蓋上，防止污染，編號(hào)，將注射器針頭朝下傾斜放好。待血樣完全凝固后才能進(jìn)行包裝和運(yùn)輸，途中嚴(yán)禁振蕩，以免溶血。一般情況下，采集后的血樣當(dāng)室溫在20℃以上時(shí)靜置2～3h即可析出血清;室溫在10℃以下時(shí)很難自然析出血清，需要立即將血樣放置在37℃溫箱或水浴中1～2h，以利血清析出。此外，還可低速離心分離血清，采血后去掉針頭，馬上慢慢注入一次性離心管并編號(hào)，待血液完全凝固后再進(jìn)行離心。待血清析出后將血清分別吸入清潔、滅菌的試管或抗生素空瓶中，加蓋密封并編號(hào)。每份血清樣品量不能少于0.5mL。

3.2血清的保存及解凍

分離、密封好的血清，應(yīng)冷凍或冷藏保存。一般情況下，在5d內(nèi)測(cè)定的血清樣品可放置于4℃的冰箱中冷藏保存;樣品待檢時(shí)間超過1周的，需-15℃以下低溫冷凍保存。血清從低溫冰箱取出后，最好經(jīng)4℃冰箱、室溫、37℃水浴條件逐步均勻融解，血清應(yīng)完全融解混勻后再用。解凍血清不宜反復(fù)凍融。反復(fù)凍融會(huì)使血清中的脂蛋白和纖維蛋白變性，導(dǎo)致出現(xiàn)絮狀沉淀物[6]。

3.3血清的送檢

采集的樣品最好能在24h內(nèi)及時(shí)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室(需4℃左右冷藏)。如果24h內(nèi)不能送檢的，可把樣品冷凍，并以此狀態(tài)送檢。送檢過程中要防止震蕩、傾倒、破碎，避免樣品泄露。

參考文獻(xiàn):

[1]覃珍姣.家禽血液樣品的采集和常見問題[J]. 廣西畜牧獸醫(yī)，2008，24(1):50-51.

[2]董柏華，嚴(yán)春華.淺談畜禽采血技術(shù)[J]. 中國(guó)動(dòng)物檢疫，2006， 23(4):40.

[3]林開，嚴(yán)甦，嚴(yán)惠群. 家禽的采血技術(shù)及注意事項(xiàng)[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2007(11):45.

[4]陳俊杰a，鄧俊良，陳 萍． 家禽的幾種采血方法比較［Ｊ］． 中國(guó)家禽，２００５，２７（１１）：２１．

［５］ 孫泉云，潘水春，鞠龔訥．動(dòng)物采血技術(shù)［Ｊ］．畜牧與獸醫(yī)，２００５， ３７（４）：３４－３５．

［６］ 肖建鋒．畜禽血樣采集與血清分離保存［Ｊ］． 四川畜牧獸醫(yī)，２００７，３４（１１）：５６－５７．