摘要:將150只12日齡雞隨機分為5組，人工感染柔嫩艾美耳球蟲，以雞平均增重率、盲腸病變記分、卵囊值和抗球蟲指數(shù)等指標為參數(shù)，綜合評價中藥和鹽霉素單獨及聯(lián)合應(yīng)用的抗球蟲效果。研究結(jié)果表明:鹽霉素組抗球蟲指數(shù)為159.5，抗球蟲效果中等;中藥組抗球蟲指數(shù)為181.5，抗球蟲效果優(yōu)秀;中藥和鹽霉素聯(lián)合用藥組的抗球蟲指數(shù)為200.2，抗球蟲效果也為優(yōu)秀。試驗證明中藥和鹽霉素聯(lián)合用藥效果要好于中藥和鹽霉素單獨用藥的效果。

關(guān)鍵詞:中藥;鹽霉素;球蟲;療效

中圖分類號:S858.31;S854/857 文獻標識碼:A文章編號:1007-273X(2010)09-0010-04

雞球蟲病是全球性流行的主要的寄生蟲病，在所有雞病中發(fā)病率最高，是現(xiàn)代集約化養(yǎng)雞業(yè)中最為常見、多發(fā)、危害極大的腸道寄生性原蟲病。球蟲病對養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失，據(jù)報道全世界每年因雞球蟲病造成的損失高達5億英鎊[1]。雖然球蟲病可以通過預(yù)防性使用廣譜抗球蟲藥來控制，但是由于球蟲耐藥性的不斷出現(xiàn)，使很多抗球蟲藥物使用年限不斷縮短，加上藥物的研制費用很高，以及人們對藥物殘留的日益關(guān)注，迫切需要尋找新的防治球蟲病的方法來解決這一問題。

雞球蟲病是由孢子蟲綱、球蟲目、艾美耳科中的各種球蟲引起的一種寄生蟲病。雞球蟲的發(fā)育史需經(jīng)過三個生殖階段:孢子生殖(Sporogony)、裂殖生殖(Merogony)和配子生殖(Gametogony)。其中，球蟲最能發(fā)揮其病害性的時期為裂殖體生殖期。這一時期，因球蟲的增殖切斷腸黏膜組織、毛細血管及小血管，短時期引起大量出血，這是造成雞死亡的主要原因[2]。一方面給養(yǎng)雞業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失，另一方面由于人們食用禽肉產(chǎn)品，從而間接影響人類健康。因此，該病一直受到人們的高度重視。

雞球蟲是一種分布極其廣泛的寄生蟲，幾乎有養(yǎng)雞的地方就存在雞球蟲。設(shè)施及管理越落后的地方球蟲病越厲害[3]。球蟲卵囊具有極強抵抗力，而常用的消毒劑沒有一種能殺滅球蟲卵囊，常規(guī)的衛(wèi)生防疫制度不能阻止球蟲卵囊的散播。雞球蟲病防治十分困難，其發(fā)病率為50%～70%，死亡率為20%～30%，嚴重時高達80%[4]。

到目前為止，對該病的防治主要依靠西藥。市場上的抗球蟲的西藥已有30多種，較為常見的有:伏球(地克珠利)、鹽霉素、雞用球?qū)?氨丙啉)、加福(馬杜拉霉素)等。西藥的優(yōu)點是見效快，療效顯著。但抗球蟲西藥也存在著一些缺陷:首先，球蟲極易對藥物產(chǎn)生耐藥性，且抗球蟲化學(xué)藥物毒性較大，使用不當易發(fā)生中毒。許多抗球蟲藥物在推廣使用數(shù)年后即出現(xiàn)耐藥性問題。其次，抗球蟲藥容易殘留于禽蛋及肉中，威脅人類健康。主要表現(xiàn)為變態(tài)反應(yīng)、過敏反應(yīng)和細菌耐藥性等方面[5]。變態(tài)反應(yīng)癥狀多種多樣，輕者表現(xiàn)為紅疹，嚴重者甚至發(fā)生危及生命的綜合征。在人們崇尚綠色食品的今天，藥物殘留問題已越來越引起人們的廣泛關(guān)注。

近年來，關(guān)于中草藥防治雞球蟲的報道不斷增多，用天然中草藥防治雞球蟲病逐漸被人們所重視，中藥多為天然植物藥，用中藥防治雞球蟲病，既可達到防治球蟲病的目的，又可緩解因獸藥殘留而影響肉雞出口問題，具有很好的發(fā)展前景[6]。而且中藥的藥源廣泛、方劑組方變化多，為研發(fā)抗球蟲新藥提供了良好的基礎(chǔ)[7]。試著開發(fā)中草藥資源，用以防治雞球蟲病有很大的空間[8]。但中藥的缺點是顯效太慢，而肉雞的生長周期太短，并且中藥用量大，影響飼料的組成和適口性等。

近年來復(fù)方制劑的研究受到人們的青睞。李佩國等[9]采用中西聯(lián)合用藥(中藥和馬杜霉素)的方法，防治雞球蟲病，結(jié)果表明，聯(lián)合用藥組的抗球蟲指數(shù)(Anticoccidial Index，ACI)達189.5，比單獨使用中藥或馬杜霉素組分別提高了15.48%和13.57%。李蘊玉等[10]也對中藥與地克珠利聯(lián)合應(yīng)用防治雞球蟲病的效果進行了試驗研究，結(jié)果表明，聯(lián)合用藥組的抗球蟲指數(shù)為202.4，比單獨使用地克珠利和中藥組分別提高了11.89%和23.34%，表明聯(lián)合用藥防治雞球蟲病是增強藥物療效、減少西藥用量及延長藥物效用期的有效方法。

本試驗就針對中藥和西藥單獨和聯(lián)合使用的抗球蟲效果進行研究，來探究抗球蟲藥物的療效。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗藥品復(fù)方中藥，鹽霉素(為市售產(chǎn)品)。

1.1.2 試驗器材離心機:DL-500B，上海盧湘儀離心機儀器有限公司生產(chǎn);冰箱:BCD-208/A CJN，海爾集團有限公司生產(chǎn);電子分析天平:AR2140，Ohaus Corp Brook，NJ，USA;生物顯微鏡:XSP-6C，上海精密儀器儀表有限公司生產(chǎn);隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱:PYX-DHS-X，上海躍進醫(yī)療器械廠生產(chǎn);組織搗碎機:DS-1，上海精密儀器儀表有限公司生產(chǎn);全價肉小雞顆粒料:青島青牧飼料廠生產(chǎn);電子稱:MB10K，上海精密儀器儀表有限公司生產(chǎn)。

其他儀器有:鐵絲籠、燒杯、載玻片、蓋玻片、紗布、剪刀、酒精噴燈等。

1.1.3 試驗用卵囊試驗用孢子化柔嫩艾美耳球蟲卵囊(為臨床株)，由青島農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)藥理研究室提供。試驗前人為感染無球蟲雞傳代1次，獲得試驗用卵囊，28℃條件下，在2.5%重鉻酸鉀溶液中孢子化處理后，保存于4℃冰箱中備用。

1.1.4 試驗動物出殼肉雛雞150只，飼養(yǎng)在經(jīng)高溫消毒的鐵絲籠內(nèi)，給予連續(xù)的人工光照，飼喂不含球蟲卵的全價肉小雞顆粒料，飲用潔凈自來水。飼養(yǎng)至12日齡，試驗前糞檢無球蟲卵囊確認未發(fā)生自然感染方可采用。

1.2 方法

1.2.1 試驗處理及分組12日齡時除健康對照組外，全部試驗組雛雞均經(jīng)口人為感染雞柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊，接種劑量為5萬/只。在攻蟲前和剖殺前各稱重一次，對體重進行詳細紀錄。15日齡時在每籠下面鋪報紙，開始記錄每組的血便情況。19日齡時結(jié)束試驗，稱重、剖殺，進行腸道病變記分，測定每克糞便卵囊數(shù)(OPG)，腸道卵囊計數(shù)，統(tǒng)計各組增重及相對增重率。試驗期間自由飲水、采食，如出現(xiàn)死亡，應(yīng)剖檢查明是否因球蟲致死，并將因球蟲死亡的雞的盲腸收集起來，置4℃的冰箱中保存，非球蟲致死不列入統(tǒng)計。

動物分組及分組后的處理見表1。

1.2.2 藥效判斷指標

1.2.2.1 臨床表現(xiàn)試驗期間觀察雞的臨床表現(xiàn)，如精神、食欲、糞便變化情況，記錄各試驗組的發(fā)病和死亡情況。

1.2.2.2 相對增重率試驗結(jié)束時逐只稱重，計算相對增重率。以健康組雞的平均增重率計為100%。

相對增重率(%)=感染各組雞的平均增重/健康對照組雞的平均增重×100%。

1.2.2.3 存活率存活率(%)=組內(nèi)存活只數(shù)/組內(nèi)參試雞總數(shù)×100%。

1.2.2.4 病變記分參照Johnson等[11]的標準，剖檢所有試驗雞，根據(jù)剖檢后盲腸病變的嚴重程度，按5分制進行病變記分。具體記分辦法參考表2。

1.2.2.5 病變值根據(jù)剖檢后腸道病變的嚴重程度記分，參照Johnson等[11]的標準，做雞的盲腸病變記分。病變值=每組試驗雞的平均病變記分×10。

1.2.2.6 卵囊值19日齡時結(jié)束試驗剖殺所有的雞，盲腸記分之后，收集各組雞的全部盲腸(包括飼養(yǎng)期間因球蟲死亡的雞的盲腸)，用剪刀將其剪碎，放到組織搗碎機中碾碎勻漿，搗碎時加水200mL，勻漿結(jié)束后立刻取1mL勻漿液，加入9mL飽和鹽水，經(jīng)充分攪勻后，再取1mL勻漿液，加入9mL飽和鹽水稀釋。然后用McMaster法計數(shù)，計算每克糞便卵囊數(shù)(OPG值)，并按角田清的標準換算成卵囊值[12]，換算方法見表3。

1.2.2.7 血便記分血便記分參照參考文獻[13]的標準，即在人工感染后的第4天開始觀察糞便帶血情況，按每只雞記分，并記錄全組平均值，正常糞便記0分，每天每只雞平均出現(xiàn)多少堆糞便就分別記多少分。

1.2.2.8 抗球蟲指數(shù)ACI=(相對增重率+存活率)-(病變值+卵囊值)，按美國默克公司的方法，藥效判定標準如表4。

抗球蟲指數(shù)(ACI)按Merek公司方法計稱。抗球蟲指數(shù)在120以下，不宜用作抗球蟲藥;在160以下為控制球蟲感染不滿意;在160～180之間只有中等的控制球蟲感染作用;在180以上時控制球蟲感染效果很滿意，用作抗球蟲藥藥效很好。即ACI<120為無效，ACI=120～160為低效，ACI=160～180為中效，ACI>180為高效。試驗中所測各項數(shù)據(jù)均分別進行統(tǒng)計學(xué)分析及顯著性檢驗。

2 結(jié)果

2.1 臨床表現(xiàn)

感染孢子化卵囊后第4天陽性對照組有血便排出，第5天和第6天尤為嚴重，并在第6天、第7天死亡14只雞，試驗結(jié)束仍見血便。在血便出現(xiàn)并增多的同時，雛雞的其他癥狀日漸嚴重，主要表現(xiàn)為精神委頓、食欲下降、羽毛松亂、翅下垂、個別雞呆立在角落縮頸閉眼“假眠”，各用藥組在第6天開始出現(xiàn)血便，精神狀態(tài)較陽性對照組活潑，第7天鹽霉素組和中藥組各死亡3只和2只雞。鹽霉素與中藥聯(lián)合用藥組無死亡。

2.2 病理剖檢變化

感染對照組雞的病變最為嚴重，剖檢病雞和死雞，尸體消瘦、泄殖腔周圍羽毛被糞便污染。病變主要集中在腸道，尤其以盲腸病變?yōu)橹?，表現(xiàn)為盲腸腫大，比正常大幾倍，呈棕紅色或暗紅色，漿膜面上有斑駁的、不規(guī)則的局部性出血區(qū)，剪開盲腸可見盲腸壁增厚，黏膜有大量彌漫性出血，盲腸內(nèi)容物大部分為血凝塊混有血液的干奶酪壞死物質(zhì)(見圖1)。

部分耐過雞盲腸出現(xiàn)萎縮。心臟、肝臟、腎臟、脾臟除了有輕微腫脹外，無明顯眼觀病變(見圖2)。剖檢各用藥組雞的盲腸也有不同程度的腫脹、腸黏膜出血。

2.3 藥物抗球蟲效力

抗球蟲效力是對抗球蟲藥物的評定指標，現(xiàn)對試驗中的各項評定指標整理見表5。

由表5可見，從抗球蟲指數(shù)(ACI)看，鹽霉素的抗球蟲指數(shù)為159.5，抗球蟲藥效中等，為低效藥;中藥的抗球蟲指數(shù)為181.5，抗球蟲藥效優(yōu)秀，為高效藥;中西結(jié)合藥的抗球蟲指數(shù)為200.2，抗球蟲藥效優(yōu)秀，為高效藥。

從相對增重率來看，各給藥組與感染對照組相比，增重效果差異極顯著(P<0.01)。鹽霉素組和健康對照組增重效果差異不顯著(P>0.05)。中藥組和鹽霉素與中藥聯(lián)合用藥組與鹽霉素組的增重效果相比差異均極顯著(P<0.01)。

與感染對照組相比，各藥物預(yù)防組均可顯著提高試驗雞的存活率，尤其以中藥組和鹽霉素與中藥聯(lián)合用藥組效果最好，其試驗組的存活率分別為93.3%和100%。

從病變情況來看，各用藥組中西藥組的病變最嚴重，中藥組次之，中西結(jié)合組病變最輕。

3 討論

3.1 鹽霉素單獨用藥

從試驗結(jié)果可見，采用鹽霉素單獨用藥的方法效果不是很理想，該藥的抗球蟲指數(shù)只有159.5。鹽霉素屬聚醚類離子載體抗生素，這類藥物分子結(jié)構(gòu)中具有有機酸基團和醚基團，能與蟲體內(nèi)鈉、鉀、鈣、鎂等離子形成脂溶性絡(luò)合物，影響離子的穿膜運動，破壞蟲體內(nèi)外的正常離子平衡，導(dǎo)致蟲體細胞破裂而死亡[14]。主要作用于侵入期蟲體子孢子及第一、二代裂殖子，作用峰期為感染后2～4d，有很廣的抗球蟲譜，但藥物之間存在交叉耐藥性[15]，影響免疫力的產(chǎn)生。本試驗中用到的是臨床株，很有可能對該藥產(chǎn)生了一定的耐藥性，從而導(dǎo)致了療效的下降。其次，由于鹽霉素用量極少，拌料不易均勻，從而會影響藥物的療效。

3.2 中藥單獨用藥

試驗中的抗球蟲中藥的抗球蟲指數(shù)為181.5，其抗球蟲作用與增重效果都比鹽霉素有顯著的提高。眾多報道證明，中藥防治雞球蟲病的效果是比較顯著的，甚至優(yōu)于化學(xué)抗球蟲藥[16]，本試驗充分證實了這一點。

在抗球蟲中藥研究中，還存在多方面的問題，首先是中藥抗球蟲作用機制的研究不深入。迄今為止，對中藥抗球蟲機理的探討才剛起步，尚未做到深入細致的研究。大多數(shù)抗球蟲中藥的研究還停留在方劑的療效試驗研究、田間試驗和與某種化藥的療效對比試驗上。其次是中藥成分的不確定性和中藥配伍的不可控性。中草藥復(fù)方制劑的成分十分復(fù)雜，每種中藥往往含有多種化學(xué)成分，而在臨床實踐上，不是所有的化學(xué)成分均能起到防治疾病的效用。由于抗球蟲中藥方劑中中藥成分的復(fù)雜性及不肯定性，因此對復(fù)方中的各味中藥間起作用的成分就很難弄清楚。

3.3 鹽霉素與中藥聯(lián)合用藥

聯(lián)合應(yīng)用鹽霉素和中藥組的抗球蟲效果明顯優(yōu)于單用中藥或鹽霉素組，且血便記分、病變值均大為降低，而存活率、相對增重率和ACI值則顯著升高，呈現(xiàn)高效的抗球蟲作用。由此表明，中西藥的聯(lián)合使用，不僅能迅速控制病情，提高存活率，減少球蟲對機體造成的損傷，并能降低鹽霉素的用量，提高機體的抵抗力，促進機體的生長。

為解決球蟲的耐藥性問題，采用中西藥復(fù)方制劑，常用配合用藥的方法[13]，其抗球蟲指數(shù)達200.2，中西結(jié)合的效果與李蘊玉等[10]的試驗結(jié)論一致，充分說明可以在這一方面加強研究，并可應(yīng)用于實際生產(chǎn)當中。

3.4 試驗中的影響因素

試驗中，會有很多因素導(dǎo)致試驗的誤差，對此進行了總結(jié)。首先，試驗期間，尤其是攻蟲前后的幾天雞舍溫度極高、密度太大，導(dǎo)致雞的采食量嚴重減少，對增重有一定的影響，同時也影響了藥物的效果。其次，試驗中定期稱重、攻蟲等大量的應(yīng)激，對雞的生長和增重也會有一定的影響。同時，本試驗的攻蟲方式是經(jīng)口灌服，這樣容易導(dǎo)致球蟲卵囊的部分丟失，參考了一些其他資料，經(jīng)嗉囊攻蟲的方式會更加準確。

參考文獻:

[1]MARK L D. Industry must keep in touch with growing consumer power[J]. Poutry World，2004，158:7-8.

[2]孫漢，周筱華.雞球蟲病及其預(yù)防[J].江西畜效獸醫(yī)雜志，1995(3):9-12.

[3]麻益良，張韶為.雞球蟲病及其藥物防治的發(fā)展趨勢[J].山東家禽，2002(3):31-34.

[4]劉高生，盧升云.雞球蟲病的防治[J].中國家禽，2004，26(11):30-32.

[5]江善祥.動物性食品中藥物殘留對人體健康的影響[J].中國禽業(yè)導(dǎo)刊，2001，6(18):25.

[6]余釵，方炳虎，肖田安，等.中草藥在抗雞球蟲病上的應(yīng)用研究[J].獸藥與飼料添加劑，2003(8):22-24.

[7]周作勇，聶奎.中藥復(fù)方防治雞球蟲病的研究現(xiàn)狀與展望[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2005(4):60-64.

[8]趙海全，郭國富，王富曉，等. 中草藥防治雞球蟲病的研究概況[J].河南畜牧獸醫(yī)，2000，21(12):12-13.

[9]李佩國，李蘊玉，劉建輝，等.中西藥復(fù)方抗雞球蟲病的效果觀察[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2002(2):12-15.

[10]李蘊玉，李佩國，陳麗鳳，等.馬杜霉素與中藥聯(lián)合用藥抗雞球蟲病的療效試驗[J].中國獸醫(yī)科技，2002，32(4):26-27.

[11]JOHNSON J，REID W M. Anticoccidial drugs:Leision scoring techniques in battery and floor-pan experiments with chickens[J]. Exp Parasitol，1970(28):30-36.

[12]角田清主編. 陳宜，明如鏡，譯.雞球蟲病[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1986.

[13]MOREHOUSE N F，BARON D R.Coccidiosis evaluation of cocidiostats by mortality，weight gains and fecal score[J].Exp paracitol，1970(2):25-29.

[14]PRESSMAN B C.Biological application of ionophores [J].Annu Rev Biochem，1976，45:501-530.

[15]甘德培.抗球蟲藥與球蟲藥的抗藥性研究進展[J].中國獸醫(yī)寄生蟲病，1999(2):53-56.

[16]郭世寧，張克家.中獸醫(yī)方劑的組合效應(yīng)[J].中國獸醫(yī)雜志，1996，22(8):43-44.