摘要:2009年1~12月對鄂西北地區(qū)16個(gè)雞場接種禽流感疫苗20d后的雞隨機(jī)采集血樣433份，應(yīng)用ELISA方法對血清的禽流感抗體水平進(jìn)行監(jiān)測調(diào)查。調(diào)查結(jié)果表明，在受檢的433份血清中，抗體陰性樣本86份，占19.9%;抗體陽性樣本347份，陽性率80.1%;抗體強(qiáng)陽性樣本有282份，占65.1%。統(tǒng)計(jì)分析表明，在受檢的16家雞場中，群體免疫合格率在75%以上的有12家，占75.0%。結(jié)論:2009年禽流感的免疫合格血清(強(qiáng)陽性)相對較低，受檢的規(guī)?；u場僅部分能達(dá)到保護(hù)水平，且各雞場的免疫水平存在較大差異。

關(guān)鍵詞:鄂西北;禽流感;抗體

中圖分類號:S852.5+2文獻(xiàn)標(biāo)識碼:B文章編號:1007-273X(2010)09-0031-02

禽流感是由禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)引起的一種急性高致病性傳染病。該病臨床癥狀不盡相同，從無任何肉眼臨床癥狀到高死亡率發(fā)病期，呼吸道病患是最常見的表現(xiàn)，伴有產(chǎn)蛋率下降、綠色糞便、口鼻腔呈血樣分泌物，頭部雞冠肉髯發(fā)紺，水腫等。雞只接種禽流感疫苗后體內(nèi)會產(chǎn)生特異性抗體，借助酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)可對血清中AIV抗體水平進(jìn)行定量檢測，有效評估雞群的免疫狀態(tài)。為監(jiān)測鄂西北地區(qū)規(guī)?；u場AIV抗體水平，筆者于2009年1～12月對鄂西北地區(qū)16家規(guī)模化雞場的AIV抗體進(jìn)行了血清學(xué)監(jiān)測，現(xiàn)將其報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1血樣的采集

對鄂西北地區(qū)16家存籠1萬只規(guī)模雞場雞只隨機(jī)采血，每只2mL翅下靜脈血樣，共采集血樣433份。

1.2血樣的處理

采集血樣靜置1h，待血清析出后，2 000r/min離心10min，取上層血清待檢。

1.3儀器與試劑

GF—M2000型酶標(biāo)儀，山東高密彩虹分析儀器有限公司生產(chǎn);37℃恒溫水箱;禽流感病毒抗體檢測ELISA試劑盒，深圳康百得生物有限公司生產(chǎn)。

1.4試驗(yàn)方法與原理

1.4.1試驗(yàn)方法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)。

1.4.2原理 應(yīng)用AIV病毒抗原包被微孔，被檢樣品加入包被孔后的孵化階段，血清樣品中的特異性AIV抗體與包被的病毒抗原反應(yīng)，形成復(fù)合物。經(jīng)過洗滌，未結(jié)合的物質(zhì)被去掉。微孔加入酶標(biāo)二抗，酶標(biāo)二抗可以與吸附在包被孔壁的雞AIV抗體結(jié)合。反應(yīng)后洗滌，未結(jié)合的酶標(biāo)二抗被洗滌，再加入酶底物和顯色劑。顯示反應(yīng)顏色與血清中AIV抗體數(shù)量直接相關(guān)。

1.4.3操作步驟樣本稀釋:將樣本液按1∶100比例稀釋。加樣反應(yīng):將稀釋好的樣本液取100μL注入已包被有AIV病毒抗原的反應(yīng)孔，37℃避光反應(yīng)30min后洗滌。試驗(yàn)設(shè)陰性、陽性對照各2孔，與試驗(yàn)組同步。加酶反應(yīng):每孔加入酶標(biāo)二抗100μL，37℃避光反應(yīng)30min后洗滌。顯色反應(yīng):加底物和顯色劑各50μL，37℃避光反應(yīng)10min，加入終止液50μL，然后用酶標(biāo)儀于450nm(620nm作參比波長)讀取OD值。

1.4.4結(jié)果判斷S/N≥2.1表示雞體內(nèi)有AIV抗體存在，結(jié)果陽性;S/N≥4.1表示雞體內(nèi)有較強(qiáng)的AIV抗體存在，結(jié)果強(qiáng)陽性，免疫合格。其中，S為樣本OD值;N為陰性對照OD值。

2結(jié)果與分析

所檢測的433份血樣中，1~3月份檢測4家雞場共113份血樣，其中92份陽性，陽性率81.4%;強(qiáng)陽性72份，強(qiáng)陽性率63.7%;其中，免疫合格雞場3家，占受檢雞場75%。4~6月份檢測3家雞場共88份血樣，57份陽性，陽性率64.8%;強(qiáng)陽性52份，強(qiáng)陽性率59.1%;其中，免疫合格雞場2家，占受檢雞場66.7%。7~9月份檢測2家雞場共70份血樣，62份陽性，陽性率88.6%;強(qiáng)陽性60份，強(qiáng)陽性率85.7%;其中，免疫合格雞場2家，占受檢雞場100%。10~12月份檢測7家雞場共162份血樣，136份陽性，陽性率84.0%;強(qiáng)陽性98份，強(qiáng)陽性率60.5%;其中，免疫合格雞場5家，占受檢雞場71.4%。

綜合4個(gè)季度ELISA檢測S/N的分布結(jié)果，在受檢的433份血清中，抗體陰性樣本86份，占19.9%;抗體陽性樣本數(shù)347份，陽性率80.1%;抗體強(qiáng)陽性樣本有282份，占65.1%。統(tǒng)計(jì)分析表明，在受檢的16家雞場中，群體免疫合格率在75%以上的有12家，占75.0%。

具體調(diào)研情況見表1。

3討論

(1)調(diào)查發(fā)現(xiàn)還有一部分養(yǎng)雞戶過分依賴免疫程序，導(dǎo)致雞場實(shí)際情況下的免疫不合格，這對于規(guī)?；u場的生物安全體系必將帶來很大的威脅。因此，規(guī)?；u場除了需規(guī)范新城疫疫苗免疫程序外，還需加強(qiáng)抗體水平監(jiān)測，確保雞群免疫合格。

(2)通過統(tǒng)計(jì)可知，2009年鄂西北地區(qū)規(guī)?；u場禽流感免疫總體合格率為65.1%，免疫合格率較低，但是免疫合格率在各雞場分布極不平衡，一部分免疫情況好的雞場，合格率可達(dá)100%，而免疫情況差的雞場，合格率為0。望引起有關(guān)部門的注意。

(3)通過對養(yǎng)殖場的登記結(jié)合監(jiān)測數(shù)據(jù)分析來看，新引進(jìn)雞只初次免疫效果通常較差，首免間隔20d后加強(qiáng)免疫一次，有較好的免疫效果，不過還需對抗體水平進(jìn)行一次跟蹤，根據(jù)結(jié)果再次調(diào)整免疫。

(4)ELISA方法檢測禽流感抗體水平是評估養(yǎng)殖場免疫水平的一種十分有效的方法，適合于在注射疫苗15～20d后進(jìn)行檢測評估免疫效果，或免疫合格雞場數(shù)月后抗體水平下降，再次評估群體抗體水平。