賈桂云，鄒潤(rùn)英，郭飛燕

（海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 ?？?571158）

竹葉提取物抑菌效果研究

賈桂云，鄒潤(rùn)英，郭飛燕

（海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 ?？?571158）

研究了金鑲玉竹葉的提取物的抑菌作用.結(jié)果表明：金鑲玉竹葉的乙醇冰醋酸提取物對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度是3.8%，對(duì)根霉最小抑菌濃度7.5%.提取物的pH值影響抑菌效果，在酸性、中性條件下抑菌作用比堿性條件強(qiáng).各提取物對(duì)曲霉菌無(wú)抑菌作用.

竹葉;提取物;抑菌效果

竹子是禾本科（Poaceae）竹亞科（Bambusoideae）多年生常綠植物.竹子中含有多種有益的成分，對(duì)這些成分的提取、分離和開發(fā)利用日益受到人們的重視.一些研究表明，竹葉中含黃酮及其苷類、酚類、醛類、氨基酸、多糖、天然色素、蛋白質(zhì)、茶多酚類化合物[1].它們具有優(yōu)良的抗自由基、抗氧化、阻斷亞硝化反應(yīng)、抗菌抑菌、抗衰老、調(diào)血脂增強(qiáng)免疫力的作用[2].本文對(duì)竹葉不同溶劑的提取物抑菌性能進(jìn)行研究，為竹葉提取物作為天然防腐劑替代化學(xué)防腐劑，用于食品添加劑提供參考.

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

金鑲玉竹葉（Phyllostachys aureosulcata f.spect?abilis）在海南師范大學(xué)校園內(nèi)采摘，晾干、粉碎.

DRP—9052型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；SYQ.DSX—280型電熱手提壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）；RE—52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海青浦滬西儀器廠）；DK—S28型電熱恒溫水浴鍋（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；SHB—Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；HDM—250調(diào)溫電熱套（金壇市雷華儀器有限公司）.

無(wú)水乙醇，冰醋酸，正己烷等均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?

大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、根霉（Rhizop usoryzae）、曲霉（Aspergillus ni?ger）均為海南師范大學(xué)生命科學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供.

1.2 竹葉提取物的制備

取室溫晾干，粉碎好的金鑲玉竹葉60克，共稱3組，分別置于500 mL燒杯中.A組：加入50 mL無(wú)水乙醇、30 mL冰醋酸，B組：加入50 mL無(wú)水乙醇；C組：加入50 mL正己烷.分別補(bǔ)充蒸餾水至200 mL，80℃水浴回流16 h，溶液顏色變成黃棕色或棕色后過(guò)濾，取濾液進(jìn)行減壓蒸餾.A組：蒸出乙醇和部分冰醋酸后定容到25 mL.提取液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為72%，調(diào)節(jié)pH值到6.5，得提取液A；B組：蒸出乙醇后定容到25 mL，提取液的濃度為72%，調(diào)節(jié)pH值到6.5，得提取液B[3]；C組：蒸出正己烷后定容25 mL，提取液的濃度為72%，調(diào)節(jié)pH值到6.5，得提取液C.

1.3 培養(yǎng)基的制備

細(xì)菌用培養(yǎng)基按照文獻(xiàn)[4]牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方制備；霉菌用培養(yǎng)基按照文獻(xiàn)[4]高鹽察氏培養(yǎng)基配方制備.

1.4 菌懸液的制備

實(shí)驗(yàn)用菌從4℃冰箱中取出，畫線法接種在新鮮斜面培養(yǎng)基上，細(xì)菌經(jīng)37℃/24 h，霉菌經(jīng)28℃/48 h恒溫培養(yǎng)，菌種即被活化.

用無(wú)菌生理鹽水洗下斜面培養(yǎng)基的細(xì)菌，吸取1.00 mL菌原液加入9.00 mL無(wú)菌生理鹽水中，得稀釋10倍的菌懸液，依次進(jìn)行梯度稀釋.將不同稀釋度的菌懸液各吸取0.20 mL分別加入到已滅菌冷卻的各自適宜的平板培養(yǎng)基表面，涂布均勻.按細(xì)菌經(jīng)37℃/24 h、霉菌經(jīng)28℃/48 h恒溫培養(yǎng).根據(jù)觀察結(jié)果，選取各自適宜的菌液濃度，要求在該濃度下，菌能長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)皿且分布均勻.

1.5 濾紙片的制備

濾紙用打孔器打成6.00 mm圓片，放入潔凈的試管內(nèi)，經(jīng)0.1 MPa，121℃滅菌20 min，備用.

1.6 抑菌實(shí)驗(yàn)方法

用無(wú)菌鑷子取滅菌后的濾紙片，浸泡在提取液中，備用.

用無(wú)菌吸管吸取各自適宜濃度的的菌懸液0.2 mL滴加在已倒好的平板培養(yǎng)基表面，用涂布器涂布均勻.用無(wú)菌鑷子夾取濾紙片，瀝干，貼在含菌平板上，每皿3片，每種提取液做3次重復(fù).細(xì)菌經(jīng)37℃/24 h；霉菌28℃/48 h恒溫培養(yǎng)后，測(cè)量其抑菌圈直徑，比較抑菌效果.

1.7 最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定

用2倍稀釋法，將竹葉提取液（濃度72.0%）用無(wú)菌蒸餾水稀釋，得到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為36.0%、18.0%、9.0%、4.5%及2.3%待試樣品，在各平皿內(nèi)分別加入2.0 mL不同濃度的提取液，每個(gè)濃度作3次重復(fù)，然后每皿倒入20 mL已滅菌的培養(yǎng)基，充分混合，待冷卻凝固后，每皿加入0.2 mL菌懸液，涂布均勻，按1.4方法培養(yǎng)，以不長(zhǎng)菌的最低濃度為最小抑菌濃度（MIC）[5].

1.8 pH對(duì)抑菌效果的影響

用HCl或NaOH溶液調(diào)節(jié)A、B、C提取液的pH值，考察pH=5、pH=7、pH=8時(shí)的抑菌效果，按照1.6方法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，每種提取液的不同PH作3個(gè)重復(fù)試驗(yàn)，比較抑菌效果.

2 結(jié)果與討論

2.1 竹葉提取液抑菌效果

A、B、C三種提取液抑菌效果見表1.

表1 竹葉提取液抑菌效果Tab.1 Antimicrobial effects by extract of bamboo leaves

從表1可見，竹葉的A、B、C三組提取液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢菌有一定的抑菌作用，對(duì)根霉抑制作用較弱，對(duì)曲霉菌的抑制效果不明顯.

A、B、C提取液抑菌作用強(qiáng)弱順序：（乙醇+冰醋酸）提取液＞乙醇提取液＞正己烷提取液

2.2 pH對(duì)抑菌效果的影響

A、B、C提取液pH=5、pH=7、pH=8時(shí)的抑菌效果，結(jié)果見表2.

由表2可知，在酸性及中性條件下，金鑲玉竹葉提取物的抑菌效果明顯優(yōu)于堿性條件，在選定的三個(gè)pH條件下，pH=5抑菌效果最好.

2.3 最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定

A、B、C三組提取液中，A提取液的抑菌效果較好，A提取液對(duì)大腸桿菌、枯草芽抱菌、金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度均為3.8%，對(duì)根霉的最小抑菌濃度7.5%.竹葉提取液最小抑菌濃度實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3.

3 結(jié)論

金鑲玉竹葉的A、B、C三組提取液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢菌和根霉有良好的抑菌作用，對(duì)曲霉菌的抑制效果不明顯.

表2 竹葉提取液的pH對(duì)抑菌效果影響Tab.2 Influence of pH on antimicrobial effects of extract of bamboo leaves

表3 竹葉提取液最小抑菌濃度(MIC)Tab.3 The minimal inhibitory concentration(MIC)of extract of bamboo leaves

A提取液（乙醇+冰醋酸提?。┑囊志Ч糜贐（乙醇）提取液和C（正己烷）提取液.

pH值對(duì)竹葉提取物的抑菌效果有明顯的影響.酸性或中性條件下對(duì)細(xì)菌的抑菌效果好，堿性條件下抑菌效果較差.

竹葉的A提取液（乙醇+冰醋酸提取）適合添加到主要由細(xì)菌引起變質(zhì)的食品中.

本研究為竹葉的開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，我國(guó)竹葉資源豐富，若能大規(guī)模開發(fā)利用，將會(huì)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益.

[1]郭雪峰,孟志芬.竹子天然產(chǎn)物的種類及其加工利用的研究[J].世界竹藤通訊,2006,4(2):1-4.

[2]張英.天然功能性竹纖維提取物—竹葉黃酮[J].中國(guó)食品添加劑,2002(3):54-58.

[3]許鋼,張虹,俞國(guó)科.竹葉提取物抑菌效果探討[J].食品科學(xué),2000,01,20:21-23.

[4]沈萍,范秀容,李廣武.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].北京:高等教育出版社,1999:50-57.

[5]呂翠玲,巫中德,戴欣,等.常用防腐劑抗菌作用研究[J].微生物學(xué)通報(bào),1994,22(1):38.

Study on Antimicrobial Effects by Extract of Bamboo Leaves

JIA Guiyun，ZOU Runying，GUO Feiyan
（College of Chemistry and Chemical Engineering,Hainan Normal University,Haikou571158，China）

Antimicrobial effects of extract from Phyllostachys aureosulcata f.spectabilis were investigated.The results showed that the minimal inhibitory concentration(MIC)of extracts of the mixture of ethyl alcohol and glacial acetic acid for Escherichia coli,Staphylococcus arueus,Bacillus subfilis was 3.8%and for Rhizop usoryzae was 7.5%.The PH value of extracts have influence on antimicrobial effects.In the acid or neutral condition antimicrobial effects were better than in the basic condition.All extract of bamboo leaves have no antimicrobial effects for Aspergillus niger.

bamboo leaves;extracts;antimicrobial effect

Q 388

A

1674-4942（2010）04-0420-03

2010-09-05

畢和平