陳德學(xué) 張雪琴 黃春育，蘇 健 竇慶寅 陳仲悅，楊 健 蔡衛(wèi)東

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Cox-2和Fas在骨肉瘤組織中的表達及其臨床意義

陳德學(xué) 張雪琴 黃春育，蘇 健 竇慶寅 陳仲悅，楊 健 蔡衛(wèi)東

(深圳市光明新區(qū)光明醫(yī)院外科，廣東 深圳 518107)(深圳市寶安區(qū)松崗人民醫(yī)院外科，廣東 深圳 518105)(深圳市光明新區(qū)光明醫(yī)院外科，廣東 深圳 518107)(深圳市寶安區(qū)松崗人民醫(yī)院外科，廣東 深圳 518105)(深圳市光明新區(qū)光明醫(yī)院外科，廣東 深圳 518107)(深圳市寶安區(qū)松崗人民醫(yī)院外科，廣東 深圳 518105)

目的：觀察Cox-2和 Fas在骨肉瘤中的表達, 探討其在骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法：應(yīng)用免疫組化SP法檢測骨肉瘤組織38例、骨軟骨瘤組織20例中Cox-2、Fas的表達。結(jié)果：57.9%的骨肉瘤組織Cox-2表達陽性，顯著高于骨軟骨瘤組織的表達率(25.0%)(Plt;0.05)。21.1%的骨肉瘤組織Fas表達陽性，骨軟骨瘤陽性率為45.0%(Plt;0.01)。骨軟骨瘤組織的表達率為20.0%(Plt;0.01)。Cox-2表達上調(diào)和Fas表達下調(diào)與骨肉瘤的臨床分期密切相關(guān)，Cox-2的表達與Fas的表達密切相關(guān)。結(jié)論：在骨肉瘤組織中Cox-2和Fas的表達異常，提示它們可能對骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展起重要作用。

Cox-2；Fas；骨肉瘤

骨肉瘤也稱成骨肉瘤，是最常見的骨骼原發(fā)性惡性腫瘤。好發(fā)于青少年，對化學(xué)治療和放療敏感性低, 預(yù)后較差，易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移, 5年生存率低。目前在骨肉瘤診斷及治療上尚缺乏有效指標(biāo)及方法。 環(huán)氧合酶2(Cox-2)是花生四烯酸轉(zhuǎn)變?yōu)榍傲邢偎豍GH2途徑中的限速酶, 是炎癥反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)。近年來的研究表明, Cox-2除了在炎癥反應(yīng)中起作用外, 還與很多人類腫瘤的發(fā)生有關(guān), 如表達于乳腺癌、結(jié)腸癌等[1-2]。有關(guān)其在骨肉瘤中表達的研究不多，Cox-2在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及其機制目前還不十分清楚，其與Fas表達的關(guān)系仍不清楚。本研究通過免疫組化方法對骨肉瘤進行Cox-2和Fas蛋白的檢測，觀察這二種蛋白在骨肉瘤組織中的表達情況，以探討其在骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展中的可能作用。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源所有病例均為1995年1月至2006年2月手術(shù)切除標(biāo)本。 其中骨肉瘤標(biāo)本38例，術(shù)前均未行放療及化療，年齡16～43歲，中位年齡19歲；骨軟骨瘤組織標(biāo)本20例，患者年齡15～50歲，中位年齡24歲，所有標(biāo)本均經(jīng)病理證實。骨肉瘤標(biāo)本中包括骨母細胞型骨肉瘤(16例), 軟骨母細胞型骨肉瘤(11例), 其他類型(11例)。按Enneking外科分期進行臨床分期,Ⅰ期8例, Ⅱ期19例, Ⅲ期11例。每例骨肉瘤病例均經(jīng)臨床、影像學(xué)和病理三結(jié)合確診。

1.2方法標(biāo)本均來自光明醫(yī)院病理科存檔石蠟塊，經(jīng)中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，作4μm厚連續(xù)切片。

采用免疫組織化學(xué)染色法(SP法)。一抗Cox-2兔抗人多克隆抗體、Fas兔抗人多克隆抗體；SP試劑盒為美國Zymed公司產(chǎn)品, 一抗工作濃度均為1∶100。實驗步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進行。石蠟切片脫蠟至水，3%過氧化氫室溫孵育10min, 以微波枸櫞酸鹽進行抗原修復(fù)，正常羊血清封閉20min,DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明封片，中性樹膠封固。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗、二抗作為陰性對照。

在組織切片中Cox-2、Fas陽性細胞均表現(xiàn)為胞漿或胞膜染為棕黃色。陽性結(jié)果判定：陽性細胞數(shù)≤5%為(-)，陽性細胞數(shù)gt;5%為()。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)采用SPSS10.0軟件包中的χ2檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1Cox-2、Fas在骨肉瘤、骨軟骨瘤中的表達情況Cox-2、Fas表達陽性染色主要定位于腫瘤細胞胞漿或胞膜中，為粗細不一的棕黃色顆粒。Cox-2在骨肉瘤組織38例表達陽性22例(占57.9%)，高于骨軟骨瘤組織的表達率(5/20，25.0%)，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)。21.1%的骨肉瘤組織(8/38)表達Fas陽性，骨軟骨瘤陽性率為45.0%(9、20) ，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.01)。

2.2Cox-2和Fas在骨肉瘤中的表達與臨床病理特征的關(guān)系從表1中可見Cox-2 和Fas的表達與病理類型無相關(guān)性。Cox-2的表達與骨肉瘤的Enneking外科分期呈正相關(guān)，惡性程度越高，表達率越高；Fas與之相反，與Enneking外科分期呈負相關(guān)，惡性程度越高，表達率越低。它們之間均有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)。

表1 Cox-2 和 Fas在骨肉瘤中的表達與臨床病理特征的關(guān)系 例(%)

2.3Cox-2與Fas表達的相互關(guān)系Cox-2表達陽性的骨肉瘤組織中有1例Fas表達陽性，χ2=6.37，Plt;0.05。說明Cox-2的表達與Fas的表達顯著相關(guān)。

3 討 論

骨肉瘤為最常見的原發(fā)于骨組織的成骨性惡性腫瘤，好發(fā)于青少年，易發(fā)生早期肺轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差，是嚴(yán)重危害青少年健康的惡性腫瘤之一。隨著分子生物學(xué)理論和技術(shù)水平的提高，尤其是腫瘤分子生物學(xué)的發(fā)展, 對骨肉瘤的發(fā)生機制在分子水平上有了一定的認識。環(huán)氧合酶(cyclooxygenase，COX)又名前列腺素內(nèi)過氧化物合成酶, 大量研究表明, COX是PGs生物合成的限速酶，目前發(fā)現(xiàn)該酶有兩種亞型，即Cox-1和Cox-2, 二者雖結(jié)構(gòu)相似，但因其生物學(xué)特異性上的差異, 在正常和病理組織中發(fā)揮著不同的作用。人們已研究發(fā)現(xiàn)Cox-2在多種癌組織, 如乳腺癌、結(jié)腸癌等的發(fā)生、發(fā)展中起重要的調(diào)控作用[1-2]。Cox-2可能通過抑制凋亡、促進血管生成等幾個途徑參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。Dickens等[3]對58例骨肉瘤和橫紋肌肉瘤的組織進行了免疫組化研究，發(fā)現(xiàn)Cox-2在82.8%的組織中表達陽性。且隨著骨肉瘤和橫紋肌肉瘤惡性程度和侵襲性的增高，其表達率有增高的趨勢，表明Cox-2可能與骨肉瘤的發(fā)生和進展有關(guān)，特異性Cox-2抑制劑可能對骨肉瘤有很好的治療作用。

本實驗研究表明Cox-2在骨肉瘤中表達率為57.9%，顯著高于在骨軟骨瘤中的表達25.0%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)。且其表達與骨肉瘤的臨床分期有關(guān), 與國外其他學(xué)者研究結(jié)果基本相同。提示Cox-2在骨肉瘤中的高表達可能在骨肉瘤的發(fā)展過程中起重要作用。

Fas抗原是細胞膜Ⅰ型跨膜蛋白，屬于腫瘤壞死因子(TNF)超家族，F(xiàn)as與其天然配體(FasL)或相應(yīng)單克隆抗體相結(jié)合,通過激活胱冬酶(Caspase)家族等過程完成細胞凋亡信號傳遞，是細胞凋亡的主要途徑之一。此過程的異常與腫瘤發(fā)生有密切關(guān)系。Fas蛋白的異常表達作為可能的重要機制在卵巢癌、膀胱癌[4-5]等惡性腫瘤中已經(jīng)得到證實。Worth等[6]觀察到Fas表達的高低與骨肉瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力呈負相關(guān)，通過改變骨肉瘤細胞Fas表達的程度可以改變骨肉瘤細胞的侵襲能力，從而提出Fas可以做為一種新的治療骨肉瘤的靶基因而得到進一步的應(yīng)用。

本實驗研究表明Fas在骨肉瘤中呈低表達，而且在低分化骨肉瘤中的表達顯著低于在高分化骨肉瘤中的表達,與國外學(xué)者研究結(jié)果基本相似。提示隨著惡性程度增高,由于Fas介導(dǎo)的凋亡降低,這可能與腫瘤的惡性增殖有關(guān)。提示Fas可以做為一種判斷骨肉瘤惡性程度及其預(yù)后的指標(biāo)。

綜上所述，我們可以得出以下結(jié)論：Cox-2在骨肉瘤組織中表達上調(diào)，提示Cox-2可能通過抑制骨肉瘤細胞凋亡，對骨肉瘤的發(fā)展與侵襲起重要作用。Cox-2、Fas在骨肉瘤組織中的表達呈顯著相關(guān)性，提示Cox-2表達的上調(diào)和Fas表達的下調(diào)可能在骨肉瘤的發(fā)展過程中起協(xié)同作用。它們共同作用可能使細胞凋亡受到抑制從而促進腫瘤的侵襲和發(fā)展。Cox-2可能作為一個新的治療骨肉瘤的靶點。

已有許多國內(nèi)外學(xué)者將選擇性的Cox-2抑制劑應(yīng)用于體外實驗并取得了一定的成果[7]。因而選擇性的Cox-2抑制劑在骨肉瘤的預(yù)防、增強化療、放療的敏感性,減少其毒副作用方面都有潛在的應(yīng)用價值。但它是否可做為一種新的治療骨肉瘤的藥物應(yīng)用于臨床，尚需深入的研究，Cox-2在骨肉瘤的侵襲和發(fā)展中所起的具體作用也有待進一步的探討。

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[編輯] 一 凡

R730.23

A

1673-1409(2010)02-R011-03

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2010.02.004

2010-04-12

陳德學(xué)(1968-)，男，湖北漢川人，副主任醫(yī)師，從事骨科臨床工作。