鄒芳芳 陳少夫 鄭宏

·短篇論著·

瘦素及瘦素受體在大鼠胰腺纖維化組織中表達(dá)的變化

鄒芳芳 陳少夫 鄭宏

瘦素(leptin)是一個(gè)具有多項(xiàng)功能的細(xì)胞因子，與機(jī)體的許多生理功能及疾病的發(fā)生關(guān)系密切。瘦素的生物學(xué)效應(yīng)是由瘦素受體(leptin receptor,ob-R)介導(dǎo)的。ob-R為單跨膜細(xì)胞表面受體，目前已發(fā)現(xiàn)的有全長(zhǎng)型(ob-Rb)及不同剪接型(ob-Ra、c、d、f、e )等至少6種形式，其中ob-Rb 是主要的功能性受體。瘦素參與肝纖維化[1-2]、腎臟纖維化[3]、心肌纖維化[4]的過(guò)程。目前研究顯示，瘦素及ob-Rb在胰腺組織中表達(dá)[5-6]。為此，本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胰腺纖維化大鼠胰腺組織中瘦素及ob-Rb的表達(dá)，探討兩者的關(guān)系。

一、材料與方法

1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組：雄性Wistar大鼠20只，清潔級(jí)，體重200～250 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司。按數(shù)字表法隨機(jī)分成對(duì)照組和胰腺纖維化組，各10只。采用每周2次腹腔內(nèi)注射二乙基二硫代氨基甲酸鈉(DDC)1000 mg/kg體重的方法制備胰腺纖維化模型，對(duì)照組注射等量生理鹽水。6周后處死大鼠，取胰腺組織。

2．胰腺病理學(xué)檢查：選取不同部位的胰腺組織固定于10%甲醛，石蠟包埋、切片，常規(guī)HE染色。鏡下觀察胰腺病理學(xué)變化。

3．瘦素及ob-Rb檢測(cè)：采用SP法檢測(cè)瘦素及ob-Rb。兔抗鼠瘦素及ob-Rb一抗 1∶100 稀釋。鏡下見棕黃色染色為陽(yáng)性。應(yīng)用顯微圖像分析系統(tǒng)分析陽(yáng)性染色面積的積分光密度值。

二、結(jié)果

1．胰腺病理學(xué)形態(tài)改變：對(duì)照組大鼠胰腺組織無(wú)明顯病理變化，只有個(gè)別大鼠胰腺有輕微充血，或少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。纖維化組可見胰腺組織萎縮,胰腺內(nèi)出血,炎性細(xì)胞浸潤(rùn),胰腺細(xì)胞空泡樣改變 ,胰腺組織間隔增寬,纖維組織增生(圖1) 。

2．胰腺組織瘦素的表達(dá)： 瘦素主要位于胰腺腺泡及胰島細(xì)胞內(nèi),呈棕黃色網(wǎng)格狀包繞細(xì)胞核(圖2) 。對(duì)照組與纖維化組瘦素積分光密度值分別為4.89±1.28和19.42±3.82,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3．瘦素受體表達(dá)：ob-Rb主要位于胰腺腺泡及胰島細(xì)胞內(nèi),呈棕黃色網(wǎng)格狀包繞細(xì)胞核(圖3)。對(duì)照組與纖維化組ob-Rb積分光密度值分別為4.95±0.83和9.11±0.83,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖1對(duì)照組(a)和纖維化組(b)大鼠胰腺病理變化(HE ×400)

圖2對(duì)照組(a)和纖維化組(b)大鼠胰腺瘦素表達(dá) (免疫組化 ×400)

圖3對(duì)照組(a)和纖維化組(b)大鼠胰腺ob-Rb表達(dá)(SP ×400)

討論瘦素與靶細(xì)胞表面ob-R結(jié)合后，通過(guò)激活Janus激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與JAK/STAT途徑調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄，也可通過(guò)MAPK和PI3-K等通路傳遞信號(hào)[7-9]，發(fā)揮各種生物學(xué)效應(yīng)。

胰腺纖維化以胰島細(xì)胞和腺泡細(xì)胞的破壞、胰腺星形細(xì)胞(PSC)的活化和結(jié)締組織替代為特征[10]。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用DDC誘導(dǎo)大鼠的胰腺纖維化,光鏡下觀察到胰腺腺細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則、萎縮及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),腺細(xì)胞腺小葉之間的纖維間隔增大，瘦素及ob-R的表達(dá)明顯增加。提示瘦素對(duì)胰腺纖維化的發(fā)展起促進(jìn)作用。其作用機(jī)制可能為：(1)抑制PSC的凋亡。Saxena等[1-2]在肝纖維化實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)瘦素通過(guò)抑制肝星形細(xì)胞(HSC)凋亡而促進(jìn)肝纖維化。在胰腺中存在的PSC在形態(tài)學(xué)上與HSC相似，合成并分泌細(xì)胞外基質(zhì)[11]。因此，瘦素也存在抑制PSC凋亡的可能[12]。(2)加重氧化應(yīng)激反應(yīng)，引起慢性胰腺損傷。有報(bào)道瘦素加重氧化應(yīng)激的反應(yīng)，降低抗氧化劑(如SOD、CAT等)的活性，增加氧自由基[13]。已知氧化應(yīng)激可引起慢性胰腺損傷[14-15]，這可能也是瘦素加重胰腺細(xì)胞損傷的原因之一，進(jìn)而促進(jìn)胰腺纖維化的發(fā)展。(3)促進(jìn)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)PSC的活化。Ikejima等[16]發(fā)現(xiàn)，肝竇內(nèi)皮細(xì)胞加入瘦素后可通過(guò)活化STAT3而上調(diào) TGF-β1 mRNA的表達(dá)。是否能通過(guò)減少瘦素及瘦素受體在胰腺中的表達(dá)或降低血漿的濃度來(lái)減緩胰腺纖維化的發(fā)展有待于繼續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)的研究。

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2009-05-22)

(本文編輯：呂芳萍)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.03.023

110004 沈陽(yáng)，中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院消化內(nèi)科(鄒芳芳，現(xiàn)在天津市第一中心醫(yī)院東院普內(nèi)科)

陳少夫，Email:csf196211@yahoo.com.cn