商迪 陳少夫

結(jié)締組織生長(zhǎng)因子和缺氧誘導(dǎo)因子1α在胰腺癌組織中的表達(dá)及意義

商迪 陳少夫

結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)屬于一種即刻早基因CCN家族成員之一，位于人染色體6q23.1[1]，廣泛存在于人類多種組織器官中，在介導(dǎo)細(xì)胞的增殖、遷移、分化、生存及血管生成中起重要作用[2-3]。缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)是一個(gè)在缺氧狀態(tài)下發(fā)揮活性的核轉(zhuǎn)錄因子，在多種腫瘤組織中高表達(dá)，在腫瘤的生長(zhǎng)及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胰腺癌的CTGF、HIF-1α蛋白表達(dá)，探討二者在胰腺癌中的作用和相互關(guān)系。

一、資料與方法

1．臨床資料：收集42例中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院病理科2005年至2008年間診斷為胰腺導(dǎo)管腺癌的組織蠟塊。其中男性30例，女性12例，年齡43～79歲，平均60歲。按2002年國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)(UICC)制定的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期9例，Ⅱ期20例，Ⅲ期11例，Ⅳ期2例。高分化16例，中低分化26例。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者18例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者24例。選取十二指腸腫物切除術(shù)所獲得的10例胰腺組織為正常對(duì)照組。

2．CTGF和HIF-1α蛋白檢測(cè)：采用SP免疫組化方法。

以PBS作為陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性組織切片做陽(yáng)性對(duì)照。兔抗人CTGF和HIF-1α多克隆抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。以胞質(zhì)、胞膜或胞核有棕黃色顆粒為陽(yáng)性，高倍鏡下(400倍)每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，求陽(yáng)性細(xì)胞的面積，≤10%為陰性，>10%為陽(yáng)性。

3．統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS13.0軟件分析。陽(yáng)性率的比較用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

二、結(jié)果

1．CTGF和HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)率：CTGF主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)或胞膜(圖1a)，間質(zhì)細(xì)胞亦有表達(dá)。42例胰腺癌組織中，31例(73.8%)表達(dá)陽(yáng)性，10例正常胰腺組織中,3例(30.0%)表達(dá)陽(yáng)性，兩者相差非常顯著(P<0.05)。HIF-1α主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核(圖1b)。42例胰腺癌組織中，30例(71.4%)HIF-1α表達(dá)陽(yáng)性，10例正常胰腺組織中均未見(jiàn)HIF-1α的表達(dá)，兩者差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。癌組織中CTGF與HIF-1α表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.392，P=0.010)。

2．CTGF和HIF-1α表達(dá)與胰腺癌臨床病理特征的關(guān)系：CTGF蛋白表達(dá)與腫瘤病理特征均無(wú)相關(guān)；HIF-1α的表達(dá)與腫瘤的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(表1)。

圖1CTGF(a)和HIF-1α(b)在胰腺癌中的表達(dá)(免疫組化 ×400)

表1 CTGF和HIF-1α的表達(dá)與胰腺癌臨床病理特征的關(guān)系

討論近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，CTGF在介導(dǎo)腫瘤與基質(zhì)的交互行為中發(fā)揮突出的作用，如在腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤，肝細(xì)胞癌中高表達(dá)者較低表達(dá)者病情惡化快，腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)，很可能是一種促腫瘤生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移的因子[4-5]。但CTGF在胰腺癌中是促腫瘤因子還是抑制腫瘤因子存在爭(zhēng)議。以往認(rèn)為，胰腺癌中腫瘤周邊的結(jié)締組織纖維化反應(yīng)是一種保護(hù)作用，有限制腫瘤的生長(zhǎng)，誘導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)形成及抑制轉(zhuǎn)移發(fā)生的作用[6-7]。但最近的證據(jù)表明，這種活化的基質(zhì)具有致惡變的性質(zhì)。在胰腺癌中，CTGF可增加成纖維細(xì)胞膠原Ⅰ、纖維結(jié)合蛋白和α5整合素的mRNA表達(dá)，促進(jìn)基質(zhì)的合成。膠原Ⅰ已經(jīng)被證明有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、藥物抵抗和轉(zhuǎn)移作用[8]。CTGF也可能通過(guò)異常的自分泌或旁分泌途徑，促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和血管生成[9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CTGF在胰腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于正常胰腺組織，提示它參與胰腺癌發(fā)生。

缺氧是所有實(shí)體瘤的特性，它與腫瘤的侵襲、血管生成及化療耐藥有關(guān)。HIF-1α是缺氧狀態(tài)下最常見(jiàn)的調(diào)節(jié)因子。研究表明，HIF-1α在膀胱癌、乳腺癌、胰腺癌等實(shí)體腫瘤中均呈過(guò)度表達(dá)，且與腫瘤的臨床分期及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，HIF-1α在胰腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常胰腺組織，且與臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果基本一致。說(shuō)明HIF-1α可能在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著促進(jìn)作用。

有文獻(xiàn)報(bào)道，重組CTGF在常氧狀態(tài)下及低氧狀態(tài)下均可刺激HCS-2/8細(xì)胞HIF-1α mRNA的表達(dá)，且呈劑量依賴方式，提示在HCS-2/8細(xì)胞系中,CTGF可調(diào)節(jié)HIF-1α的表達(dá)[10]。胰腺癌細(xì)胞在低氧培養(yǎng)環(huán)境下，CTGF的表達(dá)和分泌量增加，并且與缺氧共區(qū)域化[11]，提示CTGF的功能部分由HIF-1α來(lái)調(diào)節(jié)。本結(jié)果顯示，CTGF和HIF-1α在胰腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率呈明顯正相關(guān)性，推測(cè)在胰腺癌細(xì)胞中，CTGF促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的機(jī)制之一是通過(guò)上調(diào)HIF-1α的水平而實(shí)現(xiàn)的，兩者相關(guān)的機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

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2009-06-22)

(本文編輯：呂芳萍)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.03.022

110004 沈陽(yáng)，中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院消化內(nèi)科

陳少夫，Email:csf196211@6ahoo.com.cn