王 新,崔一喆,韓鐵鎖

(黑龍江八一農(nóng)墾大學動物科技學院,黑龍江大慶163319)

黃芩苷是從唇形科植物黃芩的干燥根中提取的一種黃酮類化合物,具有抗菌、消炎和免疫調(diào)節(jié)等多種藥理作用[1]。甲氧芐啶(TMP)為廣譜抗菌增效劑,臨床上常與磺胺類藥物聯(lián)用以增強磺胺類藥物的了抗菌效果,其還可增強多種抗生素以及中藥的抗菌作用[2-3]。而關(guān)于TMP對黃芩苷的抗菌增效作用未見報道。為了探討TMP對黃芩苷抗菌活性的影響,促進黃芩苷在防治畜禽傳染性疾病上的應(yīng)用,進行黃芩苷與TMP聯(lián)用的性質(zhì)和增效劑量關(guān)系的試驗,并確定TMP對黃芩苷體外抗菌增效的最佳劑量,為開發(fā)高效中藥復(fù)方抗菌制劑奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 菌種 沙門菌(CMCC50115)、大腸桿菌(ATCC35218)、金黃色葡萄球菌(ATCC25923)均購于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2 藥物 TMP購于太原市康瑞寶獸藥制造有限公司,批號：20080503。黃芩苷購于四川什邡市宏升植物原料有限公司,批號：081102。

1.3 藥物溶液的制備 將128 mg的TMP制成濃度為1 280μg/mL的 TMP溶液100 mL。9.6 g黃芩苷用5%碳酸氫鈉溶液溶解后,再用蒸餾水稀釋成濃度為96 mg/mL的黃芩苷溶液100 mL,用孔徑為0.22μm的微孔濾膜濾過除菌后,4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 菌種活化 采用常規(guī)方法進行細菌活化,將菌液稀釋至濁度為 1×107CFU/mL,4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 黃芩苷與TMP聯(lián)合抑菌試驗 參照徐淑云報道[4]的微量棋盤稀釋法進行黃芩苷和TMP的聯(lián)合抑菌試驗,并進行組分抑菌濃度(FIC)指數(shù)的計算和判定藥物聯(lián)合作用的性質(zhì)。

1.6 黃芩苷與TMP聯(lián)用體外抗菌增效試驗 用無菌肉湯將黃芩苷溶液稀釋到2MIC濃度,將TMP溶液稀釋到 640μg/mL、320 μg/mL、160 μg/mL、80μg/mL和40μg/mL濃度。取7只已編號無菌試管,1～5號管分別加入已稀釋的5種TMP溶液1 mL和2MIC的黃芩苷溶液1 mL,6號管中加入2MIC的黃芩苷溶液和肉湯各1 mL,7號管為對照管加入肉湯 2 mL;然后每個試管中加入 2×106CFU/mL細菌懸液0.1 mL。充分搖勻后,4℃條件下靜置。分別在1 h、2 h、4 h和8 h,采用平板計數(shù)的方法測定菌落數(shù)[5],并計算殺菌率。其計算公式為：殺菌率=(對照管菌落數(shù)-試驗管菌落數(shù))/對照管菌落數(shù)×100%。試驗重復(fù)3次。

1.7 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS軟件中ANOVA程序進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析。

2 結(jié)果

2.1 黃芩苷與TMP聯(lián)合抑菌試驗 由表1可知,黃芩苷與TMP聯(lián)用對3種細菌的MIC值均小于單獨應(yīng)用,經(jīng)計算對 3種細菌的 FIC指數(shù)均為0.75,呈現(xiàn)相加作用。

2.2 黃芩苷與TMP聯(lián)用體外抗菌增效試驗 試驗結(jié)果見表2、表3、表 4。從表中可知,當 TMP的添加劑量從20μg/mL-160μg/mL時,表現(xiàn)出隨著TMP劑量的增加對黃芩苷增效作用越強,與 TMP 0μg/mL組比較(P＜0.05或P＜0.01);但 TMP添加劑量為160μg/mL與320μg/mL兩組比較差異性不顯著(P＞0.05),表明TMP的添加劑量與對黃芩苷的增效作用并不是簡單的直線關(guān)系。利用最小二乘法對各表的1 h、2 h、4 h和8 h殺菌率數(shù)據(jù)進行擬合,擬合度均達到0.95以上,發(fā)現(xiàn)均符合一元二次方程y=ax2+bx+c;然后依據(jù)公式y(tǒng)max=-b/2a計算各時間TMP添加的最優(yōu)值。對于金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和沙門菌,TMP添加的最優(yōu)值的平均值分別為 310μg/mL、276μg/mL和 233μg/mL;將TMP添加最優(yōu)值的平均值與黃芩苷的實際用量進行換算,得到TMP對黃芩苷體外抗金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和沙門菌最優(yōu)添加劑量分別為103.3 mg/g、46.0 mg/g和38.8 mg/g。

表1 黃芩苷與TMP聯(lián)合應(yīng)用的抗菌效果

表2 黃芩苷與不同濃度TMP聯(lián)合應(yīng)用對金黃色葡萄球菌的殺菌率 (%)

表3 黃芩苷與不同濃度TMP聯(lián)合應(yīng)用對大腸桿菌的殺菌率 (%)

表4 黃芩苷與不同濃度TMP聯(lián)合應(yīng)用對沙門菌的殺菌率 (%)

3 討論

TMP對中藥增效作用的報道多是定性的研究[6-8],而TMP最佳添加劑量的研究更具有臨床應(yīng)用價值。試驗采用了國內(nèi)外常用的微量棋盤稀釋法測定了TMP與黃芩苷聯(lián)用的FIC指數(shù),同時以黃芩苷和TMP的MIC值為基礎(chǔ),設(shè)定了 TMP的系列添加劑量,然后將不同濃度的TMP與MIC濃度的黃芩苷聯(lián)合應(yīng)用對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和沙門菌進行體外抗菌量效關(guān)系試驗,采用了4℃靜置的方式使藥物作用于細菌,避免了37℃恒溫培養(yǎng)時細菌呈幾何基數(shù)增殖造成的用藥組與對照組之間的不可比性;再利用最小二乘法對試驗數(shù)據(jù)進行處理,從而提高了試驗結(jié)果的準確性。試驗結(jié)果表明,TMP對黃芩苷發(fā)揮顯著的增效作用。黃芩苷抗菌作用機制主要是通過抑制細菌的DNA、RNA、蛋白質(zhì)的生物合成導(dǎo)致細菌細胞死亡而起到殺菌作用[9],這與TMP抑制細菌核酸合成的抗菌機制相近,可能是TMP對黃芩苷發(fā)揮抗菌增效作用的基礎(chǔ),但具體機制有待于進一步探討。

[1] 文敏,李雪,付守廷.黃芩苷藥理作用研究新進展[J].沈陽藥科大學學報,2008,25(2)：158-162.

[2] 中國獸藥典委員會.中國獸藥典獸藥使用指南[S].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社,2005：76-77.

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[4] 徐淑云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學[M].3版.北京：人民衛(wèi)生出版社,2001：1662-1663.

[5] 馬緒榮,蘇德模.藥品微生物學檢驗手冊[M].北京：科學出版社,2000：73-79.

[6] 常明向,高虹,吳梅梅.五味消毒飲與TMP聯(lián)用抗菌作用研究[J].中國藥理與臨床,2001,17(6)：10-11.

[7] 張文平,張文書,曾雪英.千里光與TMP聯(lián)用抗菌作用實驗研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2006,17(6)：944-945.

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