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        納豆枯草芽孢桿菌生物發(fā)酵川穹嗪初探

        2010-11-14 15:33:36劉曉杰章海鋒陳繼承翁育輝陳啟和何國慶
        食品工業(yè)科技 2010年11期

        劉曉杰,章海鋒,陳繼承,翁育輝,陳啟和,何國慶

        (浙江大學食品科學與營養(yǎng)系,浙江杭州310029)

        納豆枯草芽孢桿菌生物發(fā)酵川穹嗪初探

        劉曉杰,章海鋒,陳繼承,翁育輝,陳啟和*,何國慶

        (浙江大學食品科學與營養(yǎng)系,浙江杭州310029)

        據(jù)資料顯示,納豆芽孢桿菌具有生物合成川穹嗪(TMP)等吡嗪類物質(zhì)的特性,但并未深入展開研究。本文考察了液體發(fā)酵培養(yǎng)和固體發(fā)酵過程中底物乙偶姻(ACT)的加入時間、乙偶姻添加量及種子液的加入量對TMP生物合成的影響。實驗結(jié)果表明,液體培養(yǎng)基組成為20%大豆浸泡物、0.5%乙偶姻時最有利于TMP的合成;固體發(fā)酵過程中,當前體在培養(yǎng)84h時加入TMP的合成量最高,TMP產(chǎn)率隨底物乙偶姻加入量的增加而增加,與種子液的加入量呈負相關。關鍵詞:川穹嗪,納豆,乙偶姻,生物合成

        川穹嗪,即四甲基吡嗪(tetramethypyrazine,TMP),分子式C8H12N2,分子量136.20,無色針狀結(jié)晶,熔點80~82℃(顯微鑒別)、沸點190℃,具有特殊異臭,有吸濕性,易升華,易溶于熱水、石油醚,溶于氯仿、稀酸,不溶于冷水,是從川穹總生物堿中分離出來的一種具有多種生物活性的酰胺類生物堿,臨床上廣泛用來治療心血管疾?。?]。其作用機制在于川穹嗪可以改善血液流變性、防止血栓形成,影響內(nèi)皮素和一氧化氮含量,抑制鈣超載,抗自由基損傷,影響凋亡相關基因和細胞因子[2]。近年來研究發(fā)現(xiàn),川穹嗪還可以調(diào)節(jié)干預抑制肺泡巨噬細胞(PAM)核因子(NF-KB)活化,減輕失血性休克并內(nèi)毒素誘發(fā)的急性肺損傷;在異體腎移植后減輕腎小球病理損害及保護腎功能;對兔高眼壓視神經(jīng)軸突起保護作用,對慢性高眼壓下視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞和雙極細胞具有保護作用;拮抗心力衰竭時心房纖維化及心房顫動的發(fā)生;治療支氣管哮喘及免疫調(diào)控;對四氯化碳誘導的大鼠實驗性肝纖維化有明顯的保護和治療作用[1]。目前,溶劑法是獲得川穹總提物最常用的一種方法。該法是將藥材粉碎后,用有機溶劑(一般為乙醇)浸泡后,多次回流提取,提取液過濾濃縮后,再流經(jīng)大孔吸附樹脂柱,收集30%乙醇洗脫液,得到川穹總提取物[3-4]。盡管該法工藝成熟,但作為川穹嗪的主要獲取方式,川穹中0.1%~0.2%的含量仍不能很好地滿足人們在科研、制藥等方面的需求。盡管川穹嗪在化學合成方面已經(jīng)獲得許多進展,但損耗大、化學殘留高、安全性不高等因素限制其在實際中應用。納豆是大豆經(jīng)發(fā)酵制成的日本傳統(tǒng)食品,其特征成分甲基吡嗪(MPs)的種類和含量備受關注[8-9]。因此通過微生物發(fā)酵合成研究納豆芽孢桿菌合成川穹嗪的合適方式和條件,以拓展納豆的功效,為工業(yè)化生產(chǎn)高TMP活性的納豆提供理論指導和依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料與儀器

        大豆 市售;葡萄糖、天冬氨酸、基礎氮源 購自國藥集團化學試劑有限公司,純度為分析純;乙偶姻、TMP標準品 99.9%純度,均購自Sigma公司;菌種 納豆芽孢桿菌B.subtilis Natto由本實驗室保藏。

        Technologies 1200Series液相色譜儀 Agilent;色譜柱 ZORBAX SB-C18(4.6×100mm,1.8μm);LDIX -4011型立式蒸汽滅菌消毒器 上海中安醫(yī)療器廠;LRH-150生化培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司。

        1.2 實驗方法

        1.2.1 大豆液體發(fā)酵方法 液體發(fā)酵培養(yǎng)基的配制見表1所示。

        表1 液體發(fā)酵的培養(yǎng)基組成(pH 7.3~7.5)

        在37℃進行發(fā)酵轉(zhuǎn)化,接種量為2%,發(fā)酵搖床轉(zhuǎn)速200r/min,在500mL搖瓶中裝量為150mL,轉(zhuǎn)化3d后取樣提取分析。

        1.2.2 大豆固體發(fā)酵工藝流程 大豆的固體發(fā)酵流程采用的是納豆生產(chǎn)工藝,具體流程如下:

        精選的大豆→洗凈→浸泡→煮大豆→攤涼→接種發(fā)酵→放置后熟→成熟納豆

        固體發(fā)酵步驟:大豆經(jīng)流水浸泡24h;三角瓶封裝100g/瓶;立式蒸汽滅菌器121℃滅菌20min;接種(接種量為5%,m/v);培養(yǎng)3~4d;加前體物乙偶姻,繼續(xù)培養(yǎng)。

        1.2.3 發(fā)酵樣品的處理 采用溶劑提取方法進行萃取,5g樣品+25mL三氯甲烷超聲波提取1h,加25mL 0.2mol/L鹽酸萃取,同時進行快速分析。

        1.2.4 ACT、TMP同步HPLC檢測條件 流動相:1%醋酸水溶液∶甲醇=45%∶55%,0.5‰三氟乙酸;流速:1.0mL/min;檢測波長:290nm;柱溫:45℃;進樣量:2μL;跑樣時間:10min。

        1.2.5 標準曲線的制作 不同梯度TMP標準品的溶液配制:0.2、4、8、12、16、20、40、80μg/mL。TMP標準溶液的線性關系考察:以TMP濃度C為橫坐標,峰面積A為縱坐標作圖,得回歸方程y=5.901x-1.725,R2=0.999934。

        不同梯度乙偶姻標準品的配制:0.05、1、2、3、4、5、10、20mg/mL乙偶姻標準溶液的線性關系考察:以乙偶姻濃度C為橫坐標,峰面積A為縱坐標作圖,得回歸方程y=26.5x-1.48,R2=0.999944。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 液體發(fā)酵對大豆轉(zhuǎn)化合成TMP的影響

        不同發(fā)酵方式對大豆原料轉(zhuǎn)化合成TMP的影響具有明顯不同差異,其中對不同處理方式和前體添加對轉(zhuǎn)化合成TMP的影響進行了深入探討,實驗結(jié)果見圖1。

        圖1 大豆液體發(fā)酵不同處理方式對ACT、TMP的影響

        從圖1結(jié)果可以看出,8號培養(yǎng)基對TMP合成具有顯著促進效果。與9號培養(yǎng)基相比,是否添加前體對TMP合成具有顯著影響。從圖中結(jié)果也可以看出不同培養(yǎng)基組成對ACT利用率影響的差異。

        2.2 固體發(fā)酵方式對納豆芽孢桿菌合成TMP的影響

        2.2.1 底物加入時間對TMP產(chǎn)率的影響 以下所有大豆接種發(fā)酵的時間均為144h,圖表中的X軸代表加入底物的不同時間。底物添加量為200μg/瓶100g,種子液接入量2%。從圖2中結(jié)果可以看出,底物于納豆發(fā)酵84h后添加最有利于納豆中TMP的合成。

        圖2 底物加入時間對TMP合成量的影響

        2.2.2 底物加入量對TMP產(chǎn)率的影響 為了考察ACT不同添加量對納豆中TMP合成的影響,本部分主要研究了幾種添加量對TMP合成量的差異,底物乙偶姻的加入時間為發(fā)酵開始的84h,接種量為2%。實驗結(jié)果見圖3,從圖3結(jié)果可以看出,添加量提高,其TMP合成的量也隨之升高,在實驗設計的范圍內(nèi)具有線性關系。從這些研究數(shù)據(jù)不難看出,ACT和TMP合成之間存在著必然的關系,而且這種關系在一定程度內(nèi)是線性的,線性回歸方程y=4.4428x-7.3039,R2=0.822。

        圖3 底物加入量對TMP合成量的影響

        2.2.3 納豆芽孢桿菌接種量對TMP合成的影響 本部分考察了納豆發(fā)酵中不同接種量對TMP合成影響,以探討納豆芽孢桿菌是否對TMP合成產(chǎn)生必然影響。前體乙偶姻的添加時期為發(fā)酵84h,添加量為200μL/100g。實驗結(jié)果見圖4所示,從圖中結(jié)果不難分析,1%的接種量為納豆產(chǎn)TMP的合適菌量,當然這個接種量并不一定是其最佳加量,還有待深入研究和探討。

        圖4 納豆芽孢桿菌接種量對TMP合成量的影響

        3 結(jié)論

        3.1 液體發(fā)酵實驗結(jié)果表明,底物乙偶姻的添加對納豆芽孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)TMP有重要影響,發(fā)酵培養(yǎng)基以20%大豆浸泡物、0.5%天冬氨酸、2%葡萄糖對底物乙偶姻的合成最為有利。以20%大豆浸泡物、0.5%乙偶姻最有利于TMP的合成。

        3.2 固體發(fā)酵實驗表明,當?shù)孜镆遗家龅募尤肓繛?00μg/100g黃豆、接種量為2%、在培養(yǎng)84h時加入TMP的合成量最高,產(chǎn)率為12.809μg/g黃豆。

        3.3 固體發(fā)酵TMP的產(chǎn)率隨底物乙偶姻加入量的增加而增加,當乙偶姻的加入量為500μg/100g黃豆時,TMP產(chǎn)率為18.525μg/g黃豆。

        3.4 固體發(fā)酵當乙偶姻的加入量為200μg/100g黃豆,底物加入時間為84h時,TMP產(chǎn)率為與種子液的加入量呈負相關,當接種量為 1%時,產(chǎn)率為9.221μg/g黃豆。

        [1]李秀萍,王紅勤,高勵聰.川穹嗪臨床應用研究進展[J].中國冶金工業(yè)醫(yī)學雜志,2007,24(4):421-424.

        [2]晏亦林,周莉玲.川穹嗪的研究概況[J].時珍國醫(yī)國藥,2008,19(6):1343-1345.

        [3]鄒賢明,劉寶生.川穹提取工藝研究[J].中華臨床醫(yī)學研究雜志,2008,15(11):1615-1616.

        [4]趙慧萍.川穹提取工藝的研究[J].中華醫(yī)學叢刊,2004,4(10):21-22.

        [5]加沼綠[日].用HPLC法分析納豆中的甲基吡嗪類化合物[J].藥學雜志,2004,124(13):1-36.

        [6]余慶斌,李永進,方建國.高效液相色譜法測定磷酸川穹嗪氯化鈉注射液中川穹嗪的含量[J].中國藥師,2003,6(8):493.

        [7]劉本,Dean J R,Rachel P.法多索溶劑和超臨界流體提取川穹中的川穹嗪[J].中國醫(yī)藥雜志,1993,30(5):196-199.

        [8]Besson I,Creuly C,Gros J B,et al.Pyrazine production by Bacillus subtilis in solid-state fermentation on soybean[J].Appl Microbiol Biotechnol,1997,47(5):489-495.

        [9]ZijunXiao,Jian R Lu,CuiqingMa.Formation and identification of trimethylimidazole during tetramethylpyraze production from glucose by Bacillus strains[J].Biotechnol lett,2009,31(9):1421-1425.

        A pilot study on the biological synthesis of methypyrazine by Bacillus subtilis natto

        LIU Xiao-jie,ZHANG Hai-feng,CHEN Ji-cheng,WENG Yu-hui,CHEN Qi-he*,HE Guo-qing
        (Department of Food Science and Nutrition,Zhejiang University,Hangzhou 310029,China)

        lt is reported that Bacillus subtilis natto had the ability to synthesize methypyrazine(TMP),but there is no profound investigation.The aim of this paper was to study the impact of the composition of culture medium in liquid fermentation,the addition time and the amount of acetoin,the inoculum level of Bacillus subtilis natto on the formation of TMP in solid-state fermentation.Results showed that liquid medium composed of 20%of soybeans soaked material,0.5%acetoin was the most beneficial to the synthesis of TMP.The highest TMP yield was obtained when acetoin was added in 84h culture time.The synthesis of TMP has positive coorelation with the adding dosage of acetoin,whereas has negative relation with the inoculum level of Bacillus subtilis natto.

        TMP;Bacillus subtilis natto;ACT;biological synthesis

        TS201.3

        A

        1002-0306(2010)11-0187-03

        2009-10-21 *通訊聯(lián)系人

        劉曉杰(1986-),女,碩士研究生,研究方向:生物代謝工程。

        國家科技部“十一五”支撐計劃項目(2006BAD27B09)。

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