黃德光

（湖南省安仁縣人民醫(yī)院，湖南安仁 423600）

替硝唑氯己定洗劑的制備和質(zhì)量控制

黃德光

（湖南省安仁縣人民醫(yī)院，湖南安仁 423600）

目的：建立制備替硝唑氯己定洗劑及含量測(cè)定方法。方法：以替硝唑和氯己定為主藥制備替硝唑氯己定洗劑，采用高效液相色譜法直接測(cè)定兩主藥含量。結(jié)果：替硝唑氯己定洗劑配伍合理，質(zhì)量可控。結(jié)論：該洗劑制備工藝簡(jiǎn)單、質(zhì)量穩(wěn)定、含量測(cè)定方法準(zhǔn)確。

替硝唑；氯己定；洗劑；高效液相色譜法

替硝唑氯己定是臨床使用較廣的藥物，常與頭孢類抗生素交替使用。其是對(duì)厭氧菌和原蟲感染有較高活性的藥物，是繼甲硝唑后的硝基咪唑類衍生物。它不僅克服了甲硝唑的不良反應(yīng)，而且具有在體內(nèi)分布廣、耐藥性低、療效高的特點(diǎn)。其作用原理是硝基被還原成一種細(xì)胞毒，從而作用于細(xì)菌的DNA代謝過(guò)程，促使細(xì)菌死亡。氯己定的機(jī)制為抑制其氧化還原反應(yīng)，使原蟲的氮鏈發(fā)生斷裂，從而殺死。但在替硝唑氯己定制劑中，由于替硝唑、氯己定紫外線吸收光譜相互重疊，干擾含量測(cè)定。因此，筆者建立了以高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定替硝唑氯己定溶液中兩主藥含量的方法。

1 材料與方法

1.1 材料

本組實(shí)驗(yàn)采用LC-1OATvp液相色譜儀：日本島津。N2010色譜工作站 （中國(guó)科學(xué)院生產(chǎn)）。微型旋渦振蕩器（WH-1，上海滬西分析儀器廠），離心機(jī)（80-2上海手術(shù)器械廠）。2010 A紫外檢測(cè)器，2010 A柱溫箱，2010 A工作站。Milli-labo純水儀，sartorius BP211 D電子天平。

1.2 制備方法

替硝唑?qū)φ掌?（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100336-200402），氯己定（上海人民制藥廠）。替硝唑200mg，氯己定 1 200mg，甘油 5 g，三乙醇胺 2.0 g，95%乙醇 25 g，水加到1 000 ml。加適量水使其充分溶脹，放置1～2 d后攪拌溶解，用三乙醇胺調(diào)pH至6左右；將替硝唑溶于95%乙醇，加甘油混合；然后合并兩液，加入溶解的透明質(zhì)酸鈉，再加水至100 g攪拌均勻。標(biāo)準(zhǔn)使用液：取一定量上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液混合，用超純水逐級(jí)稀釋，配成替硝唑氯己定濃度為1.0mg/m l的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。

1.3 實(shí)驗(yàn)條件

C18色譜柱 5 μm，（250mm×4.6mm），i.d； 柱溫：40℃；以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.025mol/L磷酸溶液[取磷酸 0.7ml，置1 000ml量瓶中，加水約 800m l、三乙胺1.8ml，再加水至刻度，搖勻]（20∶80）為流動(dòng)相；紫外可見檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

取本品1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，密塞，稱翼定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取上清液，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。分別精密吸取樣液與標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

替硝唑氯己定中待測(cè)組分計(jì)算公式：Xy=Cs×Va

Xy為樣品中替硝唑氯己定的含量（μg）；Cs為由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出的樣液中替硝唑氯己定濃度（pg/ml）；Va為樣品體積（ml）。

2 結(jié)果

2.1 色譜柱的平衡

待測(cè)組分與流動(dòng)相中的緩沖溶液生成的離子對(duì)化合物易在色譜柱上產(chǎn)生吸附，可造成柱壓的變化，對(duì)色譜柱的柱效影響非常明顯。為防止壓力超過(guò)輸液泵或色譜柱能承受的最大壓力，需對(duì)色譜柱進(jìn)行再生處理，使其恢復(fù)到初始狀態(tài)。通常采用5～10倍柱容積或者與分析周期等長(zhǎng)時(shí)間的流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱，使固定相與流動(dòng)相達(dá)到完全平衡。本實(shí)驗(yàn)在一次色譜分離之后先用有較大洗脫能力的甲醇沖柱5 min，再用流動(dòng)相沖柱10min使色譜柱達(dá)到平衡。在完成色譜分析之后，采用超純水、甲醇沖夠足夠的時(shí)間以充分沖掉色譜柱上的吸附物，保護(hù)色譜柱，延長(zhǎng)其使用壽命。筆者比較含相同比例的不同有機(jī)相的流動(dòng)相體系，甲醇更合適本實(shí)驗(yàn)的分離體系，故選擇甲醇與緩沖溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行優(yōu)化。

2.2 柱溫的選擇

固定其他條件，控制色譜柱柱溫分別為20℃、40℃、60℃、80℃進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)色譜柱溫為60℃和65℃時(shí)，替硝唑及氯己定的色譜峰發(fā)生拖尾或者重疊；柱溫為40℃時(shí)，兩種組分的分離度均＞1.5、有較好的峰形和響應(yīng)值。故本實(shí)驗(yàn)選擇色譜柱溫為40℃。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

本組實(shí)驗(yàn)按選定的HPLC色譜條件，在同一天內(nèi)連續(xù)8次測(cè)定混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以各組分的峰面積，計(jì)算日內(nèi)精密度（以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD表示）。本法變異系數(shù)為1.02%～1.16%，符合測(cè)定要求的2%以內(nèi)。具體情況見表1。

表1 批內(nèi)精密度實(shí)驗(yàn)（mg/m l）

2.4 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

本組實(shí)驗(yàn)還同時(shí)使用了己知含量的樣品進(jìn)行了加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。分別加入高、低兩種濃度水平的混和標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)樣品含量和加標(biāo)后測(cè)定值計(jì)算加標(biāo)回收率，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，替硝唑、氯己定的回收率分別為102.4%和98.6%，均有較好的回收率。具體情況見表2。

表2 批內(nèi)準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)（m g/m l）

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

按中藥穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)要求 ，本品室溫存放，溫度15～30℃，相對(duì)濕度50%～90%，對(duì)不同批號(hào)的3批替硝唑氯己定洗劑進(jìn)行3個(gè)月、1年的穩(wěn)定性考察，檢驗(yàn)項(xiàng)目包括性狀、鑒別、均勻度、水分及菌檢。結(jié)果表明，檢品1年內(nèi)均無(wú)明顯變化，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

3 討論

替硝唑是一種新型的抗厭氧菌藥物，效果較甲硝唑好，副作用小[1]。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，感染根管的細(xì)菌主要是厭氧菌。因此替硝唑已為治療口腔疾病首選抗生素藥物[2]。研究證明，感染根管及根尖周炎是以厭氧菌為主要并有需氧菌的混合感染[3]。除厭氧菌外，尚有一些革蘭陽(yáng)性菌。替硝唑?qū)Ω鞣N厭氧菌有明顯殺菌作用，能殺滅根管內(nèi)及根尖周的厭氧菌。氯己定為廣譜抗菌藥。與替硝唑有協(xié)同作用，增強(qiáng)了抗菌能力，擴(kuò)大了抗菌譜。當(dāng)前越來(lái)越多研究證明厭氧菌在牙髓病及根尖病感染中有著重要意義[4]。牙髓病及根尖周病雖經(jīng)根管制備、消毒、沖洗，但仍有部分細(xì)菌存留，易在適當(dāng)條件下復(fù)發(fā)。替硝唑粉+氯己定混合調(diào)成糊狀充填根管能繼續(xù)抑制和消滅存留在根管及根尖周的厭氧菌，防止再感染，從而取得良好效果[5]。

HPLC是發(fā)展較快也較成熟的分析方法，具有高效、高速、高靈敏度及高度自動(dòng)化等特點(diǎn)，尤其適用于高沸點(diǎn)、不能氣化、熱穩(wěn)定性差的有機(jī)物及各種離子的分離分析。它是一種非破壞性的技術(shù)手段，可以達(dá)到制備、定性、定量的目的[6]。包括以紫外、紫外聯(lián)合示差折光、二極管陣列、熒光檢測(cè)器以及質(zhì)譜為檢測(cè)器的幾種方法。不同的檢測(cè)器采用不同的樣本處理方式。有文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)辣椒樣本用0.08 mol/L磷酸鹽緩沖液-乙醇（1∶1）直接勻質(zhì)后超聲波處理，定容過(guò)濾后加一定量溴化四丁基胺和磷酸緩沖液，pH 3.0，再以水定容后用真空萃取裝置Sep-pakVac C18柱進(jìn)行萃取。本實(shí)驗(yàn)選擇甲醇-水作為流動(dòng)相，并通過(guò)紫外線掃描，替硝唑在317 nm處有最大吸收度，氯己定在278 nm處有最大吸收度。兼顧二者吸收度的大小，故選擇250 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。研究結(jié)果表明，本方法簡(jiǎn)單可行，重現(xiàn)性好，能同時(shí)測(cè)定替硝唑氯己定洗劑中替硝唑、氯己定的含量。

本文所建立的方法能同時(shí)分離測(cè)定替硝唑、氯己定，該方法具有重現(xiàn)性好，靈敏度及準(zhǔn)確度較高且操作簡(jiǎn)便、快速，被測(cè)組分損失少，試劑用量亦少的特點(diǎn)，在藥物檢驗(yàn)中具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

[2]陳樹聲,俞蒙.乳酸左氧氟沙星葡萄糖注射液細(xì)菌內(nèi)霉素的測(cè)定[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2003,23(7):447.

[3]周謙,張春惠,張麗麗.應(yīng)用替硝唑治療細(xì)菌性陰道炎體會(huì)[J].中華中西醫(yī)雜志,2004,5(3):118.

[4]李方實(shí),俞斌.無(wú)機(jī)與分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].南京:東南大學(xué)出版社,2002.

[5]高素蓮,周寧國(guó).現(xiàn)代分離純化與分析技術(shù)-在高分子材料研究中的應(yīng)用[M].合肥:中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版社,2004.

[6]曹紹聰,李鋼洪,歐陽(yáng)麗英.復(fù)方替硝唑洗液的制備及質(zhì)量控制[J].中國(guó)藥房,2005,16(9):673.

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1673-7210（2010）05（a）-229-02

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