牛付閣，王紀(jì)平，王 芳，戴成國，段玉峰，*

（1.陜西師范大學(xué)食品工程與營養(yǎng)科學(xué)學(xué)院，陜西西安710062；2.國藥集團(tuán)西北醫(yī)藥有限公司，陜西西安710001）

覆盆子糖蛋白粗提物體內(nèi)抗氧化作用研究

牛付閣1，王紀(jì)平2，王 芳1，戴成國1，段玉峰1，*

（1.陜西師范大學(xué)食品工程與營養(yǎng)科學(xué)學(xué)院，陜西西安710062；2.國藥集團(tuán)西北醫(yī)藥有限公司，陜西西安710001）

研究覆盆子糖蛋白粗提物對(duì)小鼠體內(nèi)抗氧化作用。采用試劑盒測(cè)定小鼠血清、肝臟、腦中的丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和過氧化氫酶（CAT）的活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：覆盆子糖蛋白粗提物可以提高受試小鼠血清、肝臟、腦中SOD、CAT及GSH-Px的活性，而降低這些組織中MDA的含量。說明覆盆子糖蛋白具有一定的抗氧化活性。

覆盆子，糖蛋白，體內(nèi)抗氧化，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

覆盆子為薔薇科（Rosaceae）懸鉤子屬（Rubus L.）植物華東覆盆子（Rubus chingii Hu）的果實(shí)，含有檸檬酸、蘋果酸、黃酮類、生物堿、多糖和多種微量元素。有益腎，固精縮尿之功效，用于腎虛遺尿、小便頻數(shù)、陽萎早泄、遺精、滑精等癥［1-4］。近年來，國內(nèi)有關(guān)覆盆子的文獻(xiàn)報(bào)道絕大多數(shù)集中在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗誘變、腎虛遺尿，此外還用于治療糖尿病和心血管系統(tǒng)疾病等方面［5-7］。國外文獻(xiàn)中大多數(shù)為覆盆子食品方面的研究。有關(guān)藥理學(xué)、化學(xué)方面的研究較少［8-11］。本文主要以正常小鼠作對(duì)照，用不同劑量的覆盆子糖蛋白粗提物喂養(yǎng)小鼠，各組自由飲水，自由攝食，飼喂4周后，禁食12h，摘除眼球進(jìn)行眼眶采血，并解剖取肝、腦組織測(cè)定丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和過氧化氫酶（CAT）的活性來研究覆盆子糖蛋白的體內(nèi)抗氧化作用。以期為開發(fā)覆盆子新藥和活性成分提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

覆盆子 購于西安市藥材市場，經(jīng)生藥學(xué)鑒定為薔薇科懸鉤子屬植物華東覆盆子（Rubus chingii Hu）的果實(shí)；ICR小鼠 購于西安第四軍醫(yī)大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；丙二醛（MDA）試劑盒、谷胱甘肽-過氧化物酶（GSH-Px）試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、過氧化氫酶（CAT）試劑盒 均為南京建成生物工程研究所生產(chǎn)；其余試劑 均為國產(chǎn)分析純。

HHW-21CU-600型電熱恒溫水槽、DGX-9073B-1電熱鼓風(fēng)干燥箱 上海福瑪實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；SHZ -D（III）型循環(huán)水式真空泵 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；800B型離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；微量移液器 日本NICHIRYO公司；LXJ-IIB型低速大容量多管離心機(jī) 上海安亭科學(xué)醫(yī)學(xué)儀器廠；T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限公司；FW-80型高速粉碎機(jī) 河北省黃驊市新興電器廠；JA1203型電子分析天平 上海精密科學(xué)天平廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 覆盆子糖蛋白粗提物的制備［12-13］將烘干的覆盆子，粉碎過80目篩，用石油醚80℃回流至無色，50℃水浴浸提4h，以4000r/min離心20min，濾去固體殘?jiān)?，濾液真空濃縮至一定體積后加4倍體積的95%乙醇沉淀，低溫靜置過夜，離心，取沉淀物。將沉淀物溶于少量蒸餾水重復(fù)2次沉淀步驟。然后再加入沉淀物2～4倍體積的無水乙醇，攪拌均勻，離心（3000r/min）5min，傾棄上清液，再依次加入丙酮、無水乙醚，按此操作洗滌脫水各一次。然后放置40℃真空干燥箱中讓溶劑揮發(fā)，即得干燥的覆盆子糖蛋白粗品。1.2.2 動(dòng)物的分組及飼喂［14-15］選取健康ICR小鼠40只，隨機(jī)分為對(duì)照組和低、中、高劑量組，每組10只，雌雄各半。正常對(duì)照組小鼠每天灌服生理鹽水，低、中、高劑量組每日給予覆盆子糖蛋白粗提物分別為200、400、800mg/kg·d。各組自由飲水，自由攝食，飼喂4周后，禁食12h，摘除眼球進(jìn)行眼眶采血，并解剖取肝、腦、腎、胸腺、脾、心臟等器官組織，冷凍備用。

1.2.3 血清及組織勻漿的制備 血清的制備：取血試管預(yù)先加入肝素抗凝劑，并低溫烘干。取血后，搖勻，即刻再放回冰浴中冷卻，并于3000r/min離心5min，分離血清，然后將血清傾入另一潔凈試管低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

組織勻漿的制備：取適量濕組織加生理鹽水按W∶V=1∶5在冰浴條件下用組織勻漿機(jī)制成勻漿，并于8000～10000r/min離心10min，將上清液傾入另一潔凈試管低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 指標(biāo)測(cè)定 按照試劑盒指定的方法測(cè)定丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）活力，谷胱甘肽-過氧化物酶（GSH-Px）活力和過氧化氫酶（CAT）活力。

1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以 ±SD形式表示，SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠器官重量變化

由表1可以看出，經(jīng)過低、中、高劑量組飼喂四周的小鼠，胸腺、脾、心、腎、肝臟、腦組織等器官或組織的重量和正常對(duì)照組的對(duì)應(yīng)器官相比，有所增加，但量效關(guān)系不顯著。初步可以證明，飼喂覆盆子糖蛋白對(duì)小鼠身體沒有損傷。但深入的毒理實(shí)驗(yàn)有待于進(jìn)一步研究。

表1 小鼠各器官重量變化（±sD，n=10）

表1 小鼠各器官重量變化（±sD，n=10）

92.63±60 95.72±67 97.14±52 103.09±51脾（mg） 113.96±80124.48±55124.54±90123.97±39心（mg） 274.31±39285.50±36284.62±33297.45±17腎（mg） 512.33±62532.17±30542.48±73552.34±83肝臟（mg） 1350.11±39 1349.36±90 1351.08±74 1347.17±15腦組織（mg）器官 對(duì)照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組胸腺（mg）940.52±81 946.91±91 973.67±30 953.33±45

2.2 丙二醛（MDA）含量的測(cè)定

從圖1可以看出，三個(gè)劑量組的小鼠血清、肝臟和腦組織中的丙二醛（MDA）的含量均低于對(duì)照組小鼠對(duì)應(yīng)的含量。其中低、中、高三個(gè)劑量組血清MDA含量均顯著低于正常組含量（P＜0.05）；高劑量組肝臟MDA含量極顯著低于正常組含量（P＜0.01）；中、高劑量組腦組織MDA含量極顯著低于正常組含量（P＜0.01）。說明覆盆子糖蛋白粗提物具有明顯的抗氧化作用，并且呈一定的量效關(guān)系。

圖1 覆盆子糖蛋白粗提物對(duì)小鼠體內(nèi)相關(guān)組織中MDA活性的影響

2.3 超氧化物歧化酶（SOD）活力的測(cè)定

從圖2可以看出，隨著劑量的增大，血清、肝組織和腦組織中總超氧化物歧化酶（T-SOD）活力與正常對(duì)照組比較均增大。其中低劑量組與正常對(duì)照組無顯著差異。中、高劑量組與正常對(duì)照組比較均有極顯著差異（P＜0.01）。說明服用覆盆子糖蛋白粗提物具有提高SOD活性的作用。

圖2 覆盆子糖蛋白粗提物對(duì)小鼠體內(nèi)總超氧化物歧化酶（T-SOD）活力的影響

2.4 谷胱甘肽-過氧化物酶（GSH-Px）活力的測(cè)定

由圖3可以看出，隨著劑量的增大，小鼠血清、肝組織和腦組織中GSH-Px活力越來越高。其中中、高劑量組血清GSH-Px活力和腦組織GSH-Px活力均極顯著高于正常組（P＜0.01），低劑量組顯著高于正常組（P＜0.05）；高劑量組肝組織中GSH-Px活力極顯著高于正常組（P＜0.01），中劑量組肝組織中GSH-Px活力顯著高于正常組（P＜0.05）。這說明服用一定劑量的覆盆子糖蛋白粗提物能提高小鼠體內(nèi)的GSH-Px活性，并且GSH-Px的活性增強(qiáng)的趨勢(shì)與測(cè)定范圍內(nèi)服用的劑量成正比的關(guān)系，因此覆盆子糖蛋白具有明顯的抗氧化功能。

2.5 過氧化氫酶（CAT）活力的測(cè)定

由圖4可以看出，三個(gè)劑量組血清中CAT的活性都比對(duì)照組要大，高劑量組具有極顯著的差異（P＜0.01），中低劑量組與對(duì)照組沒有顯著差異；隨著劑量的增大，肝臟組織中CAT活力與正常對(duì)照組比較有所增大，低劑量組與正常組的差異性不是很明顯；中、高劑量組與正常組比較均有極顯著的差異（P＜0.01）。這說明服用一定劑量的覆盆子糖蛋白粗提物能提高CAT的活性。

圖3 覆盆子糖蛋白粗提物對(duì)小鼠體內(nèi)谷胱甘肽-過氧化物酶（GSH-Px）活力的影響

圖4 覆盆子糖蛋白粗提物對(duì)小鼠體內(nèi)過氧化氫酶（CAT）活力的影響

3 結(jié)論

覆盆子糖蛋白粗提物可以有效地降低小鼠血清、肝組織、腦組織中MDA的含量，特別是高劑量組都達(dá)到了極顯著差異性；小鼠血清、肝組織、腦組織中的GSH-Px的活力和SOD活力都比對(duì)照組有所提高，中、高劑量組幾乎全部與對(duì)照組相比有極顯著差異；中、高劑量組小鼠的肝組織中CAT活力與對(duì)照組相比有極顯著差異。說明覆盆子糖蛋白具有一定的抗氧化性。

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Study on antioxidation effect in vivo of glycoprotein from extract of Rubus chingii Hu

NIU Fu-ge1，WANG Ji-ping2，WANG Fang1，DAI Cheng-guo1，DUAN Yu-feng1，*
（1.College of Food Engineering and nutritional Science，Shaanxi Normal University，Xi’an 710062，China 2.Northwest Pharmaceutical Co.Ltd.Sinopharm，Xi’an 710001，China）

The antioxidant effect in vivo of glycoprotein from extract of Rubus chingii Hu on mice were studied.The contents of malondiadehyde（MDA），enzyme activities of superoxide dismutase（SOD），glutathione peroxidase（GSH-Px）and catalase in the serum，liver/brain of mice were measured by reagent box.Experimental results showed glycoprotein from extract of Rubus chingii Hu could improve the activity of SOD，CAT/GSH-Px in the serum，liver/brain，decrease the contents of MDA in the serum and the organs.ln conclusion，glycoprotein from extract of Rubus chingii Hu had strong antioxidant activity in vivo.

Rubus chingii Hu；glycoprotein；antioxidation in vivo；animal experiment

TS201.1

A

1002-0306（2010）12-0134-03

2009-12-07 *通訊聯(lián)系人

牛付閣（1983-），男，碩士研究生，研究方向：植物有效成分開發(fā)與利用。