葛孝忠，吳朝倩，王漢波，趙風(fēng)杰，張躍平

(浙江普洛康裕制藥有限公司，浙江金華322118)

三七膠囊滅菌方法優(yōu)選

葛孝忠，吳朝倩，王漢波，趙風(fēng)杰，張躍平

(浙江普洛康裕制藥有限公司，浙江金華322118)

目的篩選三七膠囊生產(chǎn)中三七生藥粉的最優(yōu)滅菌方法。方法比較干熱滅菌、紫外線滅菌、熱壓蒸氣滅菌、鈷輻照滅菌4種方法，考察滅菌前后含量、細(xì)菌、霉菌總數(shù)變化。結(jié)果選用鈷輻照對三七生藥粉滅菌最合適。結(jié)論采用6;0 kGy的60Co-γ射線輻照滅菌最佳。

三七膠囊;三七;生藥粉;滅菌方法;鈷輻照滅菌;60Co-γ射線

三七為五加科植物三七Panax notoginseng(BurK)F;H;Chen的干燥根，目前已成為臨床上常用的急、慢性軟組織扭挫傷類非處方藥。三七膠囊是由三七粉碎后直接灌裝而成。由于三七藥材不可避免地帶有微生物，以生藥粉(以下簡稱三七粉)入藥，僅靠對三七藥材水洗、加熱滅菌和膠囊填充工序半無菌操作等措施，無法清除微生物，在實(shí)際生產(chǎn)過程中三七粉微生物限度極易超過2005年版《中國藥典(一部)》的規(guī)定。因此，需要對三七粉進(jìn)行合適的滅菌處理，以保證三七膠囊的藥品質(zhì)量。筆者比較了4種滅菌方法滅菌前后三七粉有效成分含量、細(xì)菌及霉菌總數(shù)變化情況，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

CT-C1型熱風(fēng)循環(huán)烘箱(常州市第二干燥設(shè)備廠);30 W紫外線光管;XGL;DFF-15B型機(jī)動門粉類滅菌干燥機(jī)(山東新華醫(yī)療器械股份有限公司);MG15型真空干燥箱(江蘇常熟市醫(yī)藥化工設(shè)備總廠)，鈷-60滅菌;LC-10ATVP高效液相色譜儀(日本島津)。三七皂苷R1對照品(批號為110745-200415)、人參皂苷Rg1對照品(批號為110703-200424)、人參皂苷Rb1對照品(批號為110704-200318)，均由中國藥品生物制品檢定所提供;三七(批號分別為060301，060302，060303，云南文山產(chǎn));所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 藥材處理

取三七藥材，洗凈，置熱風(fēng)循環(huán)烘箱80℃烘干，粉碎，過100目篩，分成5份，其中1份不滅菌作為對照，其余4份分別采用干熱、紫外照射、熱壓蒸氣、輻射滅菌方式處理，共取3批藥材進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)(批號分別為060301，060302，060303)。

2．2 滅菌方法

干熱滅菌法:用CT-C1型熱風(fēng)循環(huán)烘箱，在干燥溫度100℃、物料厚度20 mm的條件下，干燥10 h。

紫外照射滅菌法:用30 W紫外線光管，使燈管距離物料30 cm，物料厚度10 mm，照射3 h。

熱壓蒸氣滅菌法:用機(jī)動門粉類滅菌干燥機(jī)，溫度控制在115℃，物料厚度15 mm，滅菌20 min后置真空干燥箱65℃干燥。

輻照滅菌法:將藥材分裝于聚乙烯塑料袋，送農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物與核技術(shù)利用研究所輻照中心，進(jìn)行劑量分別為2;0，6;0，10;0 kGy的鈷-60輻照，以未輻照三七粉作為對照。

2．3 滅菌效果檢查

在滅菌當(dāng)天檢測細(xì)菌活菌總數(shù)和霉菌活菌總數(shù)，細(xì)菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，霉菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，細(xì)菌、霉菌活菌總數(shù)的測定均用平板菌落計(jì)數(shù)法。供試液的配制方法為:取供試品10 g，置100 mL量瓶中，加無菌的pH為7;0的氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100 mL，搖勻。照微生物限度檢查法2005年版《中國藥典(一部)》附錄ⅩⅢC的平皿法檢查。結(jié)果見表1及表2。

表1 常規(guī)方法滅菌前后效果比較

表2 輻照滅菌前后三七粉微生物及性狀變化情況

2.4 有效成分含量測定

2;4;1 檢測方法［1］

含量指標(biāo)確定:結(jié)合目前對三七質(zhì)量研究的總體狀況，參照2005年版《中國藥典(一部)》三七藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，檢測人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1含量的變化情況。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按表3進(jìn)行梯度洗脫;檢測波長為203 nm。理論板數(shù)按三七皂苷R1峰計(jì)算不低于4 000。

表3 流動相梯度洗脫表

溶液制備:精密稱取三七皂苷R1對照品、人參皂苷Rg1對照品和人參皂苷Rb1對照品適量，加甲醇制成每1 mL含三七皂苷R1 0;1 mg、人參皂苷Rg10;4 mg、人參皂苷Rb10;4 mg的混合溶液，即得對照品溶液。分別取兩種藥材粉末0;6 g，精密稱定，研細(xì)，具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，放置過夜，置80℃水浴上保持微沸2 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

測定法:分別精密吸取對照品溶液和兩種供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，依法測定，即得。

2;4;2 檢測結(jié)果

結(jié)果見表4和表5。

表4 熱壓蒸氣滅菌前后三七中活性成分含量比較(%)

表5 輻照滅菌前后三七中活性成分含量比較(%)

2．5 穩(wěn)定性考察

三七膠囊生產(chǎn)工藝中，在三七粉處理時增加了60Co-γ射線6;0 kGy輻照滅菌，以減少細(xì)菌和霉菌總數(shù)，重點(diǎn)考察6個月加速試驗(yàn)和長期留樣試驗(yàn)中各因素的變化情況。試驗(yàn)結(jié)果表明:室溫下3批樣品自然放置24個月，與0月樣品比較各項(xiàng)指標(biāo)均符合規(guī)定。

3 討論

干熱滅菌和紫外滅菌的滅菌效果均不理想，不能將微生物量殺滅至規(guī)定限度內(nèi)。熱壓蒸氣滅菌對三七粉的滅菌效果較理想，但滅菌時三七粉水分增加，藥粉結(jié)塊，須經(jīng)再干燥、粉碎而會增加二次污染幾率，且藥粉顏色明顯加深，變至棕黃色，不符合三七膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)性狀要求。熱壓蒸氣滅菌后三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1含量均明顯下降，與黃朋納等［2］的研究結(jié)果相符，說明不宜采用熱壓蒸氣滅菌法對三七進(jìn)行處理。

衛(wèi)生部在1997年5月下發(fā)了通知(衛(wèi)藥發(fā)［1997］第38號)，將三七作為允許鈷輻照藥材的品種之一。輻照前后三七粉含菌量大幅度下降，細(xì)菌存活量隨輻照劑量的增加而減少，6;0 kGy的輻照量可使三七粉微生物數(shù)降低到2005年版《中國藥典(一部)》標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，并不會引起有效成分的明顯變化。故在三七膠囊生產(chǎn)工藝中增加三七生藥粉用6;0 kGy劑量的60Co-γ射線輻照滅菌是合適的。

關(guān)于三七用60Co-γ射線輻照滅菌對三七藥理藥效的影響，李耀維等［3］進(jìn)行了詳盡的研究，結(jié)果表明，10;0 kGy及以下劑量的γ射線輻照不影響三七的止血作用。

［1］國家藥典委員會;中華人民共和國藥典(一部)［M］;北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:10-11;

［2］黃朋納，潘育方;高壓蒸汽滅菌對三七中有效成份的影響［J］;科技資訊，2006，12:254;

［3］李耀維，張素梅，車軒;γ射線輻照滅菌對三七止血抗炎作用的影響［J］;長治醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1995，9(4):285-287;

TQ461;R282．4

A

1006-4931(2010)23-0021-02

2010-01-06;

2010-05-27)