張澤生，王玉本，黃 闖，王 翠

（天津科技大學食品工程與生物技術(shù)學院，天津300457）

襄荷乙醇提取物的體外抗氧化活性研究

張澤生，王玉本，黃 闖，王 翠

（天津科技大學食品工程與生物技術(shù)學院，天津300457）

目的：研究襄荷乙醇提取物（extract of Zingiber mioga Rose，EZR）的體外抗氧化作用。方法：用50%乙醇制備襄荷提取物，以VC作為陽性對照，測定EZR的總還原力及清除DPPH自由基的能力，并用熒光化學發(fā)光法測定了EZR對活性氧自由基（·、·OH、H2O2）的清除能力。結(jié)果：EZR的總還原力為40.17±1.04mg VC/g，在實驗濃度范圍內(nèi)，對DPPH·、·OH、O－2·、H2O2的清除率分別達到了70%、64%、77%、71%。結(jié)論：EZR具有明顯的體外抗氧化活性，但其抗氧化能力小于VC。

襄荷，抗氧化活性，清除自由基，體外

襄荷（zingiber mioga Rose）又名陽荷（《黔志》）、山姜、觀音花（《浙江中藥資源名錄》），為姜科姜屬多年生草本植物，原產(chǎn)于中國南部，有特殊的芳香，驅(qū)蟲效果明顯，病蟲害很少，極少使用農(nóng)藥，是理想的綠色食品。據(jù)李時珍《本草綱目》所載，襄荷具有活血調(diào)經(jīng)，鎮(zhèn)咳祛痰，消腫解毒，消積健胃等藥用功效，是兼藥理保健功能為一體的純天然膳食纖維食品，對便秘、糖尿病等有著特殊功效。近年研究表明我國果蔬及中草藥是非常有潛力的天然抗氧化資源，對果蔬抗氧化性研究更是層出不窮。襄荷作為一種綠色健康食品具有很大的開發(fā)價值。目前我國對襄荷的研究多集中在栽培、組織培養(yǎng)、快速繁殖和食用資源等方面，對其生物活性方面的研究甚少。本文以乙醇為溶劑從襄荷中提取大部分生物活性物質(zhì)，并對其體外抗氧化作用進行研究，以期為襄荷在營養(yǎng)保健及藥用方面的開發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)。

襄荷 產(chǎn)自湖北十堰鄖縣，經(jīng)鑒定為襄荷果實部分；鄰苯三酚、碳酸鈉、碳酸氫鈉、無水硫酸銅、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、抗壞血酸等 均為分析純；DPPH·（1.1－二苯基－2－苦肼基自由基） 購于德國Fluka公司；魯米諾（3－Aminophthalhydrazide，98%）美國ACROS ORGANICS產(chǎn)品。

UV mini－1240紫外/可見分光光度計 日本島津；熒光化學發(fā)光分析儀（Fluoroskan Ascent FL），恒溫水浴鍋，植物粉碎機，電子天平等。

1.2 實驗方法

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.2.1 襄荷醇提物的制備 將新鮮的襄荷用清水洗凈，冷凍干燥后磨成細粉，用50%乙醇以1∶15的料液比在80℃浸提2h，將粗提液抽濾，50℃下減壓濃縮，冷凍干燥，得到深棕色粉狀物質(zhì)，即襄荷醇提物，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 總還原力的測定 標準曲線的制作：參考Lee的方法［1］，將標準樣品VC配制成濃度為15、37.5、75、150、300!g/mL的溶液，取1mL樣液于試管中，依次加入0.2mol/L的PBS緩沖液（pH6.6）2.5mL和l%六氰合鐵酸鉀［K3Fe（CN）6］溶液 2.5mL，50℃水浴20min后迅速冷卻，加入10%三氯乙酸（TCA）溶液2.5mL，然后以 5000r/min的轉(zhuǎn)速離心 10min，取2.5mL上清液，依次加入2.5mL蒸餾水，1mL 0.1%的三氯化鐵溶液，充分混勻，靜置10min后，于700nm處測吸光度值，根據(jù)吸光值對VC濃度做標準曲線。

樣品總還原力的測定：按以上步驟測定EZR的總還原力。結(jié)果以每克樣品所含的VC當量表示，記為mg VC/g。

1.2.3 DPPH·清除率的測定 按照文獻［2］的方法測定EZR對DPPH·的清除率，以VC做陽性對照。

1.2.4 ·OH清除率的測定［3］采用魯米諾化學發(fā)光法測定EZR及陽性對照VC對Fenton型反應(yīng)產(chǎn)生的·OH的清除作用。具體步驟：向發(fā)光池中依次加入2mmol/L的抗壞血酸溶液 40!L，2mmol/L的CuSO4溶液70!L，pH7.8的磷酸緩沖液50!L，不同濃度的供試液20!L，最后加入10mmol/L的魯米諾溶液15!L，立即啟動反應(yīng)，記錄每6s內(nèi)發(fā)光強度的積分，至出現(xiàn)峰值（CP1），以去離子水為空白測CP0。清除率按下式計算：

注：鄰苯三酚溶液是由10mmol/L的HCl溶液配制，魯米諾溶液是用 pH=10.16，0.1mmol/L的Na2CO3－NaHCO3緩沖液配制。

1.2.6 H2O2清除率的測定［5］采用H2O2－魯米諾－碳酸緩沖液（pH9.5）體系測定EZR及陽性對照VC對H2O2的清除率。具體步驟：向發(fā)光池中分別加入不同濃度的供試液50!L，pH 9.5的碳酸鹽緩沖液100!L，1mmol/L魯米諾溶液50!L，最后加入0.15%的H2O2溶液50!L，立刻啟動發(fā)光反應(yīng)，測定12s內(nèi)的發(fā)光強度CP1，用去離子水做空白對照，測其CP0。清除率的計算同1.2.4。

1.2.7 數(shù)據(jù)處理 所有實驗均做3次平行，結(jié)果用EXCELL處理。

2 結(jié)果與討論

2.1 EZR得率

依1.2.1的方法制備EZR，其得率為：11.62% ± 1.13%（n=3）。

2.2 EZR的總還原力

Yen［6］和Siddhuraju［7］認為，抗氧化劑的還原力與其抗氧化性之間存在聯(lián)系，還原力越強，抗氧化性越強。實驗根據(jù)吸光度值大小對VC做標準曲線，得到線性回歸方程y=0.0041x+0.0783（R2=0.9997），計算得到EZR的總還原力為（40.17±1.04）mg VC/g。

2.3 對DPPH·的清除效果

DPPH·在有機溶劑中是一種穩(wěn)定的自由基，其孤對電子在517nm處有最大吸收，當抗氧化劑存在時，孤對電子被配對，吸收減弱或消失，通過測定吸收減弱的程度，可評價抗氧化劑清除DPPH·的效果［8］。EZR和VC對DPPH·的清除效果如圖1所示。

圖1 EZR和VC對DPPH·的清除作用

由圖1可知，EZR對DPPH·的清除作用隨著濃度的增加而增強，當濃度為1mg/mL時，清除率達到70%，顯示出較強的清除作用。同等濃度下，EZR對DPPH·的清除作用均低于陽性對照VC，但隨著濃度的升高，清除效果逐漸接近VC。

2.4 對·OH的清除效果

實驗分別測定了濃度為 32.5、75、150、300、600!g/mL的EZR和VC對·OH的清除作用，結(jié)果如圖2所示。

圖2 EZR和VC對·OH的清除作用

由圖2可知，EZR對由Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的·OH具有很好的清除作用，在30～300!g/mL的濃度范圍內(nèi)，隨著濃度升高，清除效果顯著增強，呈現(xiàn)出很好的量效關(guān)系；當濃度高于300!g/mL時，對·OH的清除效果趨于穩(wěn)定，達到64%。同等濃度下，EZR對·OH的清除效果均低于VC。

2.5 對·的清除效果

不同濃度的EZR和VC溶液加入到·發(fā)生體系后，對·的清除作用如圖3所示。

圖3 EZR和VC對O－2·的清除作用

2.6 對H2O2的清除效果

不同濃度的EZR和VC溶液加入到H2O2發(fā)生體系后，對H2O2的清除作用見圖4。

圖4 EZR和VC對H2O2的清除作用

圖4顯示，EZR能夠有效地清除H2O2，且清除率隨濃度增大而增大，當濃度為0.25mg/mL時，清除率達到53%；之后隨濃度升高清除效果增長緩慢，當濃度為1mg/mL時，清除率達到71%。同等濃度下，EZR的清除效果低于VC。

3 結(jié)論

襄荷醇提物具有較好的還原性及明顯的清除自由基作用。在實驗濃度范圍內(nèi)，EZR對DPPH·、·OH、·、H2O2的清除率分別達到了70%、64%、 77%、71%，顯示出較強的體外抗氧化作用。雖然其抗氧化能力低于同等濃度的VC，但作為一種天然綠色植物的抗氧化粗提物，可進一步對其中的抗氧化活性物質(zhì)進行分離純化，以期獲得更強的抗氧化活性物質(zhì)，為襄荷在保健營養(yǎng)及藥用方面的進一步開發(fā)利用提供基礎(chǔ)。

［1］Lee S C，Jeong S M，Kim S Y.Effect of far－infrared radiation and heat treatment on the antioxidant activity of water extracts from peanut hulls［J］.Food Chemistry，2006，94（4）：489－493.

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Study on antioxidant activity of extract from Zingiber mioga rose in vitro

ZHANG Ze－sheng，WANG Yu－ben，HUANG Chuang，WANG Cui
（Tianjin University of Science&Technology，Tianjin 300457，China）

Objective：To study the antioxidant properties of extract of Zingiber mioga Rose（EZR）in vitro.Method：EZR was prepared by 50%ethanol.Using VCas a positive control，the reducing power and DPPH· scavenging activity of EZR were measured，and the scavenging activity of EZR against oxygen free radicals（·OH、O2－·、H2O2）was determined by fluorescent chemiluminescence method.Result：The reducing power of EZR was 40.17± 1.04mg VC/g.Within the concentration range，the scavenging rate against DPPH·，·OH，O2－·，H2O2reached to 70%，64%，77%，71%，respectively.Conclusion：EZR had obvious antioxidant activities in vitro，but was lower than that of VC.

Zingiber mioga rose；antioxidant activity；free radical scavenging；in vitro

TS201.1

B

1002－0306（2010）12－0282－03

2009－12－24

張澤生（1956－），男，博士（后），教授，博士生導師，研究方向：天然產(chǎn)物的開發(fā)與應(yīng)用。