楊躍輝,姜清華,林智娟

(1.中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院藥學(xué)部,遼寧沈陽110004;2.大連醫(yī)科大學(xué),遼寧大連116044)

HPLC法測定五倍子油膏中沒食子酸的含量

楊躍輝1,姜清華1,林智娟2

(1.中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院藥學(xué)部,遼寧沈陽110004;2.大連醫(yī)科大學(xué),遼寧大連116044)

采用高效液相色譜法測定五倍子油膏中沒食子酸的含量。結(jié)果表明,五倍子油膏中沒食子酸在0.1136～0.6816μg范圍內(nèi)線性良好(R=0.9998),回歸方程為 y=3217x+25.747,平均回收率為99.54%(RSD=0.75%)。該方法準(zhǔn)確可靠、簡便易行,可用于五倍子油膏中沒食子酸的含量測定。

HPLC;五倍子油膏;沒食子酸

五倍子為蚜科昆蟲角倍蚜或倍蛋蚜在其寄主鹽膚木、青桴楊或紅桴楊及同屬樹種植物葉上形成的蟲癭[1],異名文哈、百蟲倉、木附子、花倍(角倍)、獨角倍(肚倍)等,具斂肺降火、澀腸止瀉、固精止遺、斂汗止血、收濕斂瘡之功效[2],可用于治療新生兒尿布皮炎[3],即新生兒紅臀。五倍子對變鏈菌生長的抑制作用與其主要成分鞣質(zhì)有關(guān)[4,5]。鞣質(zhì)在醫(yī)學(xué)上稱為五倍子鞣酸,水解后的產(chǎn)物主要為6～8分子沒食子酸和1分子D-葡萄糖[6],因此,通過測定沒食子酸的含量,可以建立一種五倍子的含量控制方法。

五倍子油膏是以生藥五倍子粉直接入藥制成的一種有效預(yù)防和治療新生兒紅臀的藥物。其基質(zhì)甘油、凡士林、羊毛脂的加入加強了其潤滑和保濕作用,更提高了五倍子油膏的持久性與保護(hù)性。生藥生倍子以粉末狀均勻分散于基質(zhì)中,因此可以采用五倍子藥材含量測定方法測定其中沒食子酸的含量。

作者參考藥典中五倍子藥材含量的測定方法并加以改進(jìn),采用HPLC法測定了酸性條件下五倍子油膏水解后沒食子酸的含量。

1 實驗

1.1 試藥、試劑與儀器

沒食子酸對照品(批號:1108312200302),中國藥品生物制品檢定所;五倍子油膏,中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院。

甲醇為色譜純,鹽酸、磷酸為分析純,水為重蒸水。

Agilent 1100型高效液相色譜儀,美國;電恒溫水浴鍋,余姚市亞星儀器儀表有限公司;CP2250型電子天平,沈陽市計量測試所;SZ-96型自動純水蒸餾器,上海亞榮電化儀器廠。

1.2 溶液的配制

1.2.1 對照品溶液的配制

精密稱取沒食子酸對照品5.68 mg,溶解,用甲醇定容至100 mL,即得濃度為0.0568 mg·mL-1的沒食子酸對照品。

1.2.2 供試品溶液的配制

取五倍子油膏約5 g(含五倍子生藥量約0.5 g)置于100 mL具塞錐形瓶中,精密加入4 mol·mL-1的鹽酸溶液100 mL,水浴加熱3.5 h,趁熱過濾[7～10]。精密量取續(xù)濾液2 mL于100 mL容量瓶中,加50%甲醇至刻度,搖勻即得。

按處方比例和工藝制備無五倍子藥材的陰性樣品,再按上述方法制備陰性對照溶液。

1.3 色譜條件

色譜柱:Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm),流動相:水-甲醇-磷酸(85∶15∶0.085),檢測波長270 nm,柱溫30℃,流速1 mL·min-1,進(jìn)樣量10 μL。理論塔板數(shù)按沒食子酸峰面積計算不少于2000。

2 結(jié)果與討論

2.1 線性關(guān)系考察

取對照品溶液(0.0568 mg·mL-1),分別進(jìn)樣2 μL、4μL、6μL、8μL、10μL、12μL,以峰面積為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。擬合線性回歸方程為y=3217x+25.747,R=0.9998。表明在0.1136～0.6816μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2 精密度

精密吸取對照品溶液10μL,重復(fù)進(jìn)樣5次,記錄峰面積。結(jié)果發(fā)現(xiàn),沒食子酸峰面積RSD為0.13%,表明方法的精密度良好。

2.3 重復(fù)性

取同一批號樣品5份,按1.2.2方法制備供試品溶液,重復(fù)平行測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn),五倍子油膏中沒食子酸峰面積的 RSD為1.70%。表明方法的重復(fù)性較好。

2.4 穩(wěn)定性

取同一批號的供試品溶液,在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h分別進(jìn)樣10μL,記錄峰面積,計算沒食子酸峰面積的RSD為0.11%。表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 回收率

精密稱取已知含量(54.12 mg·g-1)的五倍子油膏約0.5 g,加入定量的沒食子酸對照品,測定沒食子酸的含量,計算回收率,結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實驗結(jié)果(n=5)Tab.1 Results of recovery(n=5)

由表 1可知,平均回收率為 99.54%,RSD為0.75%。

2.6 樣品含量測定

取3批樣品,按1.2.2方法制成供試品溶液。取供試品溶液與對照品溶液各10μL,記錄峰面積,計算沒食子酸的平均含量,結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)Tab.2 Determining results of sample content(n=3)

3 結(jié)論

采用HPLC法測定五倍子油膏中沒食子酸的含量準(zhǔn)確可靠,簡單易行。沒食子酸在0.1136～0.6816 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收率為99.54%(RSD =0.75%)。該方法可用于五倍子中沒食子酸的質(zhì)量控制。

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Determination of G allic Acid Content in Chinese G all Ointment by HPLC

YANGYue-hui1,JIANG Qing-hua1,LIN Zhi-juan2
(1.Department ofPharmacy,The A f f iliated S hengjing Hospital,China Medical University, S henyang110004,China;2.Dalian Medical University,Dalian116044,China)

A HPLC method has been established to determine the gallic acid content in the Chinese gall ointment.There are good linear relationships within the gallic acid content of 0.1136～0.6816μg(R=0.9998).The regression equation isy=3217x+25.747.The average recovery of gallic acid is 99.54%and the relative standard deviation is 0.75%.This method is simple,accurtate and reliable with high reproducibility,which can be applied to determine the gallic acid content in Chinese gall ointment.

HPLC;Chinese gall ointment;gallic acid

O 657.72

A

1672-5425(2010)06-0090-02

2010-03-01

楊躍輝(1969-),女,湖南長沙人,副主任藥師,研究方向:醫(yī)院制劑及醫(yī)院藥學(xué)。E-mail:yangyh1@sj-hospital.org。