劉 朋, 周建良, 安婧婧, 李 萍

(現(xiàn)代中藥教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,中國(guó)藥科大學(xué)生藥學(xué)教研室,江蘇南京210009)

渦流色譜技術(shù)在生物樣品分析中的應(yīng)用

劉 朋, 周建良, 安婧婧, 李 萍＊

(現(xiàn)代中藥教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,中國(guó)藥科大學(xué)生藥學(xué)教研室,江蘇南京210009)

生物樣品的復(fù)雜性使其在進(jìn)行分析測(cè)定前必須經(jīng)過(guò)處理。傳統(tǒng)的樣品前處理方法(如液-液萃取、固相萃取等)耗時(shí)長(zhǎng)且操作繁瑣。渦流色譜作為在線萃取技術(shù),可以實(shí)現(xiàn)生物樣品直接進(jìn)樣,減少了樣品處理步驟,有效富集純化了分析物,是一種高通量、高選擇性的生物樣品前處理方法。為此,本文介紹了渦流色譜技術(shù)的原理及優(yōu)勢(shì),并總結(jié)了不同渦流柱的特點(diǎn)及其在生物樣品分析領(lǐng)域中的應(yīng)用情況。

渦流色譜;樣品前處理;生物樣品

Abstract:The complexity of biological fluids makes the sample p reparation necessary in the analytical process.The traditional techniques,such as liquid-liquid extraction and solid-phase extraction,are time-consuming and labor-intensive.Turbulent flow Chromatography(TFC),as an on-line direct injection technique,possesses the advantages of reducing sam p le p reparation steps and enabling the effective p re-concentration and clean-up of biological fluids.Therefore,it is a high-throughput and high-selectivity technique for biological sample pretreatment.In this review,the theory,advantages,characteristics and current status of TFC in bioanalysis are introduced and summarized.

Key words:turbulent flow Chromatography(TFC);sample pretreatm ent;biological samples

藥物研究過(guò)程中,生物樣品分析是其中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。生物樣品尤其是血液樣品分析時(shí),最主要的問(wèn)題是樣品中生物大分子如蛋白質(zhì)、核酸等雜質(zhì)的干擾。首先,蛋白質(zhì)可能會(huì)與待測(cè)物結(jié)合,影響分析物的回收率;其次,如果直接進(jìn)樣,生物大分子遇有機(jī)相易發(fā)生變性,變性后的大分子就會(huì)造成色譜柱堵塞及分析物在固定相上傳質(zhì)效率下降等不利后果,從而使柱效降低、吸附容量下降、分析柱壽命縮短,最終會(huì)嚴(yán)重干擾小分子分析物的準(zhǔn)確測(cè)定[1]。另外,生物樣品基質(zhì)復(fù)雜,待測(cè)物含量往往很低。所有這些情況決定了分析過(guò)程中生物樣品的凈化和富集(樣品前處理)是一個(gè)不可或缺的重要環(huán)節(jié)。

傳統(tǒng)的生物樣品前處理方法主要包括蛋白質(zhì)沉淀、液-液萃取(LLE)等。這些方法的靈敏度較低,易導(dǎo)致雜質(zhì)與分析物的共沉淀和質(zhì)譜檢測(cè)信號(hào)的抑制[2-6]。近些年發(fā)展起來(lái)的固相萃取(SPE)、固相微萃取(SPM E)、膜萃取(超濾、微透析)等方法雖然提高了靈敏度,但是仍然需要繁瑣的樣品處理過(guò)程,耗時(shí)費(fèi)力,不能滿(mǎn)足高通量分析的需要[7-9]。而渦流色譜(turbulent flow Chromatography,TFC)技術(shù)則可以在線處理生物樣品,速度快、選擇性好、靈敏度高,易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化,近年來(lái)在生物領(lǐng)域尤其是體內(nèi)藥物分析中得到了廣泛的應(yīng)用。為此,本文就渦流色譜的原理及其在生物樣品前處理中的應(yīng)用進(jìn)行了綜述。

1 原理

渦流色譜技術(shù)是利用大粒徑填料使流動(dòng)相在高流速下產(chǎn)生渦流狀態(tài),從而對(duì)生物樣品進(jìn)行凈化與富集。這一概念早在19世紀(jì)60年代就已經(jīng)提出,Pretorius等[10]指出在基于開(kāi)管柱的色譜分析中,相對(duì)于一般的層流式,流動(dòng)相在渦流狀態(tài)下可以使分析時(shí)間明顯縮短。然而這項(xiàng)技術(shù)并沒(méi)有迅速應(yīng)用至填充柱中,因?yàn)楫a(chǎn)生渦流態(tài)需要流動(dòng)相具有高流速,會(huì)造成柱壓太大,在實(shí)際應(yīng)用中難以實(shí)現(xiàn)[11]。直到1997年Q uinn和Takarew ski[12]才解決了這一技術(shù)難題。他們使用了大顆粒的烷基鍵合硅膠柱,使得其在高流速(7.6cm/s)下也可以保持低柱壓。在這樣高的流速下,流動(dòng)相不再是層流式而是渦流式;溶劑前沿也不再是典型的拋物型,而變成了塞型(如圖1所示)。

圖1 不同流速下流動(dòng)相的流態(tài)Fig.1 F low p rofiles of m ob ile p hase a t d iffe ren t flow ra tes

根據(jù)經(jīng)典的范氏方程(Van D eem ter equation),當(dāng)流速很高時(shí),理論塔板高度會(huì)隨之增大,塔板數(shù)減小,分離效率降低。但是這里并不能用范氏方程來(lái)解釋,因?yàn)樵跍u流狀態(tài)下,溶質(zhì)分子傳質(zhì)加快,傳質(zhì)阻抗減小,實(shí)際的塔板高度要比范氏方程預(yù)測(cè)的低得多。雖然其流速很高,但分離效率并沒(méi)有隨之降低。形成這種情況主要有兩方面的原因:一方面,在流動(dòng)相中,溶質(zhì)分子都存在濃度趨向均一的擴(kuò)散,渦流狀態(tài)可以增大溶質(zhì)在柱內(nèi)的濃度梯度變化,使分子擴(kuò)散加快;另一方面,高流速下的流動(dòng)相會(huì)在柱內(nèi)有回流和旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng),從而形成旋渦,也會(huì)加快溶質(zhì)分子從流動(dòng)相到固定相的傳質(zhì)過(guò)程[13]。在這種情況下,大分子的基質(zhì)成分如蛋白質(zhì)等,還未能擴(kuò)散進(jìn)入填料顆粒內(nèi)部就已被洗出柱外,而小分子的待測(cè)物則可以保留下來(lái),與基質(zhì)分離?，F(xiàn)在常用一個(gè)無(wú)量綱的參數(shù)雷諾數(shù)(Reynolds num ber,Re)來(lái)說(shuō)明這種流態(tài)。雷諾數(shù)是表征流體流動(dòng)特性的一個(gè)重要參數(shù),Re=uρd/μ,其中u是流動(dòng)相的線速度,ρ是流動(dòng)相密度,d是柱內(nèi)徑(開(kāi)管柱)或柱填料顆粒粒徑(填充柱),μ是流動(dòng)相的黏度系數(shù)。雷諾數(shù)越大,越容易產(chǎn)生渦流狀態(tài)。為此,渦流系統(tǒng)采用了大粒徑(20～60μm)填料,并使流動(dòng)相在高流速下運(yùn)行來(lái)得到較大的雷諾數(shù)。在開(kāi)管柱中,一般認(rèn)為臨界雷諾數(shù)為2 000,小于這個(gè)臨界值為層流狀態(tài),反之為渦流狀態(tài)。而在填充柱中,臨界雷諾數(shù)還存有爭(zhēng)議[13-15]。目前較一致的觀點(diǎn)是:(1)從層流態(tài)到渦流態(tài)的過(guò)程是漸變的,存在一個(gè)過(guò)渡狀態(tài);(2)填充柱的臨界雷諾數(shù)比開(kāi)管柱低得多。對(duì)于填充柱中臨界雷諾數(shù)的問(wèn)題,還需要流體動(dòng)力學(xué)方面的進(jìn)一步研究。

當(dāng)然,渦流色譜技術(shù)的快速分離能力是毋庸置疑的。隨著該技術(shù)的發(fā)展,已經(jīng)出現(xiàn)了各種商品化的渦流色譜柱,其性能各有差異,對(duì)不同極性的化合物具有不同的萃取能力。目前商品柱主要分為4類(lèi):反相柱、正相柱、離子交換柱、混合模式柱,詳細(xì)的分類(lèi)見(jiàn)表1。Asperger等[16]在測(cè)定水中痕量農(nóng)藥時(shí)比較了硅膠填料柱Turbo C18、TurboPhenyl(粒徑均為50μm)和聚合物填料柱Oasis HLB(35μm)、Cyclone(50μm)的性能。結(jié)果表明,在保留能力、洗脫效率、洗脫體積等方面,聚合物填料柱都要優(yōu)于硅膠填料柱,更適于對(duì)痕量化合物的富集。Sadagopan等[17]評(píng)價(jià)了Cohesive Cyclone柱和Polar Plus柱,認(rèn)為可根據(jù)化合物的親脂性質(zhì)來(lái)選擇富集柱的類(lèi)型,這樣可加快樣品分析方法的建立。

表1 渦流色譜柱的主要類(lèi)型Tab le1 M a in types of TFC colum ns

2 應(yīng)用

渦流色譜已經(jīng)發(fā)展成為一種直接進(jìn)樣、快速凈化和分離生物樣品的前處理技術(shù),它的主要應(yīng)用模式有:單柱模式、雙柱模式和多柱模式。單柱模式中,渦流色譜柱直接與檢測(cè)器相連,主要用于凈化樣品;雙柱模式中,在渦流色譜柱和檢測(cè)器之間添加了分析柱,渦流柱主要用于對(duì)目標(biāo)成分的富集;多柱模式中,多個(gè)渦流色譜柱通過(guò)切換閥與分析柱相連,可實(shí)現(xiàn)不同目的的高通量樣品分析。

2.1 單柱模式

該模式由單渦流色譜柱與檢測(cè)器組成。在進(jìn)行分析時(shí),樣品中的小分子待測(cè)物會(huì)保留在渦流柱上,生物大分子被高流速的流動(dòng)相洗脫除去,然后更改流動(dòng)相把保留在柱上的分析物直接洗脫至檢測(cè)器中進(jìn)行定性定量分析,如圖2所示。單柱模式主要適用于單個(gè)化合物的分析。Ayrton等[18]運(yùn)用該模式,對(duì)血清中的單一藥物進(jìn)行了快速、直接分析。首先以4mL/m in的水相將血清樣品直接上樣于渦流色譜柱中,蛋白質(zhì)和其他的生物大分子被洗脫,待測(cè)物在柱中富集。隨后降低流速,并提高有機(jī)相的比例,將保留于渦流柱上的化合物沖入質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè),每個(gè)樣品分析時(shí)間僅需2.5m in,線性范圍為5～1 000 ng/mL。Z imm er等[19]比較了渦流色譜單柱模式、SPE、LLE3種樣品前處理方法,結(jié)果表明渦流色譜的樣品處理效果要好于自動(dòng)SPE和手工LLE,且分析時(shí)間大大縮短。但是,當(dāng)單柱模式用于多個(gè)化合物同時(shí)定性定量分析時(shí),由于其分離效率有限,難以滿(mǎn)足高分辨、高靈敏分析的要求,此時(shí)則需要使用雙柱模式。

圖2 單柱模式的渦流色譜Fig.2 S ingle-co lum n m ode of tu rbu len t flow chrom a tography

2.2 雙柱模式

該模式主要由單渦流色譜柱、切換閥、單分析柱以及檢測(cè)器組成,渦流色譜柱主要用于純化和富集待測(cè)物。首先,萃取用流動(dòng)相將樣品帶入渦流柱,清除蛋白質(zhì)等成分后,通過(guò)柱切換,分析用流動(dòng)相將樣品從渦流柱沖入分析柱進(jìn)行分離,隨后進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),如圖3所示。與單柱模式相比,其優(yōu)勢(shì)明顯,該系統(tǒng)已廣泛用于生物樣品的在線分析。Jem al等[20]使用該模式對(duì)血清中的普伐他汀及其同分異構(gòu)體進(jìn)行了含量測(cè)定,通過(guò)添加分析柱,2種異構(gòu)體可在2.8m in內(nèi)得到很好的分離,普伐他汀的回收率為50%,其異構(gòu)體回收率為90%。Herm an[21]使用渦流色譜雙柱模式建立了高通量藥物篩選的通用方法。該方法已經(jīng)被用來(lái)篩選了1 000多種化合物,處理的生物基質(zhì)包括血漿、尿液、腦勻漿、肝勻漿、腸液、腦脊液等,99%以上的分析實(shí)驗(yàn)符合所需的靈敏度和重現(xiàn)性。渦流色譜柱還可以和手性柱聯(lián)用,如W u等[22]以沙丁胺醇旋光異構(gòu)體為研究對(duì)象,建立了一種簡(jiǎn)單、有效、高通量分析血漿中手性藥物的方法。該方法總分析時(shí)間僅8m in,線性范圍為2.5～2 500nmol/L,2種異構(gòu)體基本達(dá)到基線分離。Krebber等[23]利用雙柱模式測(cè)定了多種食用動(dòng)物的不同組織中恩氟沙星及其代謝物環(huán)丙沙星的殘余量,目標(biāo)物的回收率為72%～105%,這也是渦流色譜技術(shù)首次用于多種動(dòng)物組織的分析。Jem al等[24]比較了渦流色譜雙柱模式與液-液萃取法,處理100個(gè)樣品,前者的處理時(shí)間僅為后者的1/4。

圖3 雙柱模式的渦流色譜Fig.3 Coup led-co lum n m ode of tu rbu len t flow chrom a tography

2.3 多柱模式

該模式使用多個(gè)渦流色譜柱對(duì)樣品進(jìn)行純化和富集。在應(yīng)用過(guò)程中,渦流柱一般采取并聯(lián)方式,具體過(guò)程如圖4所示。渦流柱A首先進(jìn)樣洗脫,當(dāng)柱A與分析柱、檢測(cè)器相連對(duì)待測(cè)物進(jìn)行分析時(shí),渦流柱B用適當(dāng)溶劑清洗及平衡。柱A的在線測(cè)定過(guò)程結(jié)束時(shí),柱B開(kāi)始進(jìn)樣,從而縮短進(jìn)樣循環(huán)時(shí)間,增大樣品分析通量。Hsieh等[25]使用雙渦流柱并聯(lián)-單分析柱-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng),對(duì)血清中的GW572016(專(zhuān)利藥)進(jìn)行了定量分析,進(jìn)樣循環(huán)時(shí)間僅需0.8 m in;通過(guò)進(jìn)一步增加切換閥和分析柱,進(jìn)樣循環(huán)時(shí)間可減少到0.4m in。此方法適用于藥物的高通量體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)研究。O ng等[26]比較了雙柱模式和多柱模式,結(jié)果發(fā)現(xiàn),采用雙柱模式,單次分析時(shí)間需要4m in;而采用雙渦流柱并聯(lián)模式,完成一次分析僅需2.08m in,分析速度提高了近1倍。但是,多柱模式殘留較高,達(dá)到0.24%;雙柱模式殘留則相對(duì)較低,小于0.04%。B ayliss等[27]使用4根渦流色譜柱和4通道多噴霧器質(zhì)譜儀并行分析,組成了高通量分析系統(tǒng)。不同于上面提到的并聯(lián)閥切換系統(tǒng),該系統(tǒng)對(duì)4根渦流柱同時(shí)進(jìn)樣分析,每小時(shí)可處理120個(gè)樣品,定量限達(dá)5ng/mL。M allet等[28]對(duì)渦流色譜的多種使用模式進(jìn)行了比較,待測(cè)物為酸性藥物二氟尼柳和堿性藥物氯馬斯汀,基質(zhì)為大鼠血漿,結(jié)果表明,雙柱模式比單柱模式的質(zhì)譜峰更加尖銳,峰形好,信噪比高。多柱并聯(lián)模式和雙柱模式在峰形上沒(méi)有明顯差別,但分析時(shí)間短,適用于大量樣品的分析。然而多柱模式使用了多個(gè)切換閥和色譜柱,比起單柱模式易產(chǎn)生交叉污染,不過(guò)只要閥切換時(shí)間合適,就可以把污染降到最低。

渦流色譜技術(shù)最大的特點(diǎn)是富集小分子化合物的同時(shí)除去生物大分子化合物,作者所在實(shí)驗(yàn)室根據(jù)這一特點(diǎn),設(shè)計(jì)了雙渦流柱串聯(lián)模式用于篩選靶蛋白結(jié)合成分,并已成功用于中藥復(fù)雜體系中活性成分群的篩選,其流程如圖5所示[29]。該系統(tǒng)的主要?jiǎng)?chuàng)新在于TFC技術(shù)的正反結(jié)合使用:渦流柱A的使用方式與一般情況相反,它將未能與靶蛋白結(jié)合的小分子雜質(zhì)保留下來(lái),靶蛋白與配體結(jié)合的復(fù)合物則被純化收集、洗脫至解離線圈并在線解離,使活性配體從靶蛋白上游離出來(lái),然后進(jìn)入渦流柱B(如圖5中的上圖所示)。渦流柱B的使用方式則與一般情況相同,解離后游離配體被富集在TFC柱的前端,而靶蛋白質(zhì)則被洗脫至廢液,保留的配體進(jìn)入LC-MS進(jìn)行定性定量分析(如圖5中的下圖所示)。該模式為渦流色譜柱的使用開(kāi)辟了新的方向。

目前,上述提及的3種渦流色譜分析模式已廣泛用于生物樣品的分析,表2總結(jié)了3種模式在不同生物基質(zhì)中的應(yīng)用,包括對(duì)血漿[30-36]、血清[25,37]、尿液[38,40,41]以及其他生物基質(zhì)(腦漿[26]、透析液[41]、組織[23]等)的分析。

圖4 并聯(lián)多柱模式的渦流色譜Fig.4 Parallel configuration of multi-dimensional column mode of turbulent flow chromatography

3 現(xiàn)存問(wèn)題與發(fā)展趨勢(shì)

與傳統(tǒng)的萃取技術(shù)相比,渦流色譜技術(shù)與液相色譜、質(zhì)譜在線聯(lián)用可對(duì)復(fù)雜的生物樣品直接進(jìn)樣測(cè)定,而不受樣品中蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的干擾,分析速度快、效率高、靈敏度和選擇性好。目前,該技術(shù)已經(jīng)在生物分析中得到了廣泛的應(yīng)用。

圖5 串聯(lián)多柱模式的渦流色譜Fig.5 Tandem configuration of multi-dimensional-column mode of turbulent flowchroma to graphy

表2 渦流色譜在生物樣品分析中的應(yīng)用Table2 Applications of TFC in the analysis of biological samples

不過(guò)由于是直接進(jìn)樣,污染物殘留就成為一個(gè)不可避免的問(wèn)題。自動(dòng)進(jìn)樣器、色譜柱、切換閥等都可能會(huì)有殘留物,其中40%的污染來(lái)源于自動(dòng)進(jìn)樣器。因此在進(jìn)樣時(shí)應(yīng)注意定量環(huán)的量程,避免滿(mǎn)量程進(jìn)樣,進(jìn)樣結(jié)束后需仔細(xì)清洗進(jìn)樣針和定量環(huán)[46]。而渦流柱的污染問(wèn)題可采取反沖方式清洗殘余蛋白質(zhì)、洗脫結(jié)束后用多種溶劑沖洗渦流柱等手段來(lái)加以解決[47]。G rant等[48]針對(duì)殘留問(wèn)題使用了新型切換閥材料(PAEK)并改裝了自動(dòng)進(jìn)樣器,提高了除殘留效率,縮短了整體分析時(shí)間。渦流色譜技術(shù)的另一個(gè)缺點(diǎn)是柱壽命較短。Mallet等[28]使用渦流柱進(jìn)樣200次(每次進(jìn)樣量200μL)后,色譜峰發(fā)生變形,分離效率降低。這是由于生物樣品中的污染物在渦流柱中積累已達(dá)到飽和,堵塞了填料孔,使柱壓升高,分離效率下降。Zeng等[49]設(shè)計(jì)了新的清洗方法來(lái)延長(zhǎng)渦流柱壽命。他們使用高濃度(15%)乙酸水溶液上樣來(lái)洗脫血漿樣品中的蛋白質(zhì),90%四氫呋喃溶液清洗渦流柱和分析柱以除去柱中殘留的脂質(zhì);進(jìn)樣2 000次后,測(cè)定結(jié)果未發(fā)生顯著變化。

隨著技術(shù)的發(fā)展,渦流色譜的應(yīng)用也趨于多樣化。Fairhurst等[50]將渦流技術(shù)用于分子印跡色譜,然而在高流速下,印跡微球聚合物和非印跡微球聚合物在分離普萘洛爾異構(gòu)體時(shí)沒(méi)有顯著的差異。不過(guò)微球型聚合物仍然表現(xiàn)出了較好的應(yīng)用前景,在渦流條件下,該聚合物可以有效萃取血漿中的普萘洛爾,同傳統(tǒng)的C18色譜柱相比,基線更平穩(wěn)且無(wú)雜峰干擾。Zeng等[51]將渦流柱和整體柱聯(lián)用,渦流柱純化,整體柱分析,測(cè)定了血漿中的芬氟拉明、替馬西泮、奧沙西泮、它莫西芬等堿性藥物。由于渦流柱和整體柱都可以采用高流速,單個(gè)樣品分析過(guò)程僅用1.2m in,連續(xù)10h分析樣品407份,系統(tǒng)柱壓升高不到30%。在限進(jìn)填料(RAM)中,渦流技術(shù)也得到了應(yīng)用[52,53]。限進(jìn)填料外表面涂覆親水性基團(tuán),利用體積排阻原理,使蛋白質(zhì)等大分子不被保留排入廢液;內(nèi)表面鍵合各種反相基團(tuán),可以吸附小分子分析物,但限進(jìn)填料柱一般只采用常規(guī)流速。Vintiloiu等[52]制備了限進(jìn)色譜柱(ADS,50mm×0.76mm,40～63μm),并使其在5mL/m in的高流速下達(dá)到渦流狀態(tài),從而大大縮短了分析時(shí)間,并具有良好的線性、重現(xiàn)性和回收率。由于限進(jìn)填料表面的生物相容性,阻止了蛋白質(zhì)和固定相中疏水基團(tuán)的結(jié)合,使萃取柱壽命延長(zhǎng)。另外,微渦流柱的出現(xiàn)也彌補(bǔ)了普通渦流柱壽命短的缺陷。這種色譜柱內(nèi)徑更窄,一般為0.5mm,因此可以在低流速下達(dá)到渦流狀態(tài)。微渦流柱還可以降低溶劑消耗量,提高質(zhì)譜靈敏度,減少殘留[54]。Chassaing等[47]使用微渦流柱進(jìn)樣1 000次后,柱壓未升高且污染殘留影響不明顯。

表2 (續(xù))Table2 (Con tinued)

4 展望

綜觀國(guó)外發(fā)表的有關(guān)渦流色譜技術(shù)的論文,雖然已取得了很大的進(jìn)展,但是渦流色譜應(yīng)用的樣品基質(zhì)絕大部分局限在生物體液方面,尤其是血液樣品,分析物又多為化學(xué)藥物,其應(yīng)用領(lǐng)域有待于進(jìn)一步發(fā)掘。近幾年在應(yīng)用基質(zhì)方面已經(jīng)有所擴(kuò)展,有文獻(xiàn)報(bào)道應(yīng)用渦流色譜對(duì)蜂蜜[55]和河水[16,56]中的化合物進(jìn)行測(cè)定,但在分析物方面還沒(méi)有進(jìn)一步拓寬的報(bào)道。當(dāng)前中藥受到了越來(lái)越多的關(guān)注,為了闡明中藥的效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制,中藥藥理學(xué)、中藥藥動(dòng)學(xué)的研究快速發(fā)展起來(lái)。然而由于中藥的復(fù)雜性,樣品的前處理過(guò)程難度較大,對(duì)中藥成分中活性化合物的確定和篩選亦十分困難。在國(guó)家自然科學(xué)基金等項(xiàng)目的資助下,作者所在課題組正在嘗試將渦流色譜技術(shù)應(yīng)用于中藥分析,旨在提高分析效率。相信隨著研究工作的不斷深入,渦流色譜技術(shù)的不斷發(fā)展,其在分析領(lǐng)域必將發(fā)揮出更大的潛力。

[1] Hagestam I H,Pinkerton T C.Anal Chem,1985,57(8):1757

[2] Bonfiglio R,King R C,O lah T V,et al.Rap id Comm un mass Spectrom,1999,13(12):1175

[3] Xu R N,Fan L,Rieser M J,et al.J Pharm B iom ed Anal,2007,44(2):342

[4] Gordien J B,Pigneux A,Vigouroux S,et al.J Pharm B iom ed Anal,2009,50(5):932

[5] Cham bers E,Wagrow ski-D iehlD M,Lu Z,et al.J Chromatogr B,2007,852(1/2):22

[6] Polson C,Sarkar P,Incledon B,et al.J Chromatogr B,2003,785(2):263

[7] Ridgw ay K,Lalljie S P D,Sm ith R M.J Chromatogr A,2007,1153(1/2):36

[8] W ille S M R,Lam bert W E E.Anal B ioanal Chem,2007,388(7):1381

[9] Zhou S N,Ouyang G,Paw liszyn J.J Chromatogr A,2008,1196/1197(4):46

[10] Pretorius V,Sm uts T W.Anal Chem,1966,38(2):274

[11] M artin M,Guichon G.Anal Chem,1982,54(9):1533

[12] Quinn H M,Takarew ski J J.International Patent,WO97/16724.[1997-05-1]

[13] W ilson ID.B ioanalytical Separations//Sm ith R.Handbook of Analytical Separations.Am sterdam:Elsevier,2003:91

[14] Knox J H.Anal Chem,1966,38(2):253

[15] Hlushkou D,Tallarek U.J Chromatogr A,2006,1126(1/2):70

[16] Asperger A,Efer J,Koal T,et al.J Chromatogr A,2002,960(1/2):109

[17] Sadagopan N,Pabst B,Cohen L.J Chromatogr B,2005,820(1):59

[18] Ayrton J,Dear G J,Leavens W J,et al.Rap id Comm un mass Spectrom,1997,11(18):1953

[19] Zimm er D,Pickard V,Czem borW,et al.J Chromatogr A,1999,854(1/2):23

[20] Jem al M,Xia Y Q,Whigan D B.Rap id Comm un Mass Spectrom,1998,12(19):1389

[21] Herm an J L.Rap id Comm un mass Spectrom,2002,16(5):421

[22] W u S T,Xing J,Apedo A,et al.Rap id Comm un Mass Spectrom,2004,18(21):2531

[23] Krebber R,Hoffend F J,Ruttm ann F.Anal Chim Acta,2009,637(1/2):208

[24] Jem alM,Huang M,J iang X,et al.Rap id Comm un Mass Spectrom,1999,13(21):2125

[25] Hsieh S,Tobien T,Koch K,et al.Rap id Comm un Mass Spectrom,2004,18(3):285

[26] Ong V S,Cook K L,Kosara C M,et al.Int J Mass Spectrom,2004,238(2):139

[27] Bayliss M K,Little D,M allett D N,et al.Rap id Comm un mass Spectrom,2000,14(21):2039

[28] M allet C R,M azzeo J R,Neue U.Rap id Comm un Mass Spectrom,2001,15(13):1075

[29] Zhou J L,An J J,Li P,et al.J Chromatogr A,2009,1216(12):2394

[30] Xu Y,W illson K J,Anderson M D G.J Chromatogr B,2009,877(16/17):1634

[31] Zhou S,Zhou H,Larson M,et al.Rap id Comm un Mass Spectrom,2005,19(15):2144

[32] Bai F,Fraga C H,Tagen M,et al.J Chromatogr B,2009,877(18/19):1709

[33] Xia YQ,Whigan D B,Pow ellM L,et al.Rap id Comm un mass Spectrom,2000,14(2):105

[34] Srinubabu G,Patel R S,Shedbalkar V P,et al.J Chromatogr B,2007,860(2):202

[35] M ao Y,HuangM Q,Xia YQ.J Pharm B iom ed Anal,2007,43(5):1808

[36] Xu X,Yan K X,Song H,et al.J Chromatogr B,2005,814(1):29

[37] Du L,M usson D G,Wang A Q.Rap id Comm un mass Spectrom,2005,19(13):1779

[38] Xu Y,W illson K J,M usson D G.J Chromatogr B,2008,863(1):64

[39] Herm an J L.Rap id Comm un mass Spectrom,2005,19(5):696

[40] Cohesive Technologies Inc.A Turbulent Flow Chromatography App licationin D rugsof Abuse:Amphetam ines.LCGC North Am erica Supp l,2005,Vol84.(2005-12-02).http://Chromatographyonline.findanalytichem.com/lcgc/App+Notes+Pharm a/A-Turbulent-Flow-Chromatography-Application-in-D ru/Article Standard/Article/detail/211498

[41] Zeng W,M usson D G,Fisher A L,et al.J Pharm Biomed Anal,2008,46(3):534

[42] Sm alley J,Marino A M,Xin B,et al.J Chromatogr B,2007,854(1/2):260

[43] Lavén M,Markides K,L。angstr¨om B.J Chromatogr B,2004,806(2):119

[44] Smalley J,Kadiyala P,Xin B,et al.J Chromatogr B,2006,830(2):270

[45] Liesener A,Karst U.J Sep Sci,2005,28(14):1658

[46] Chassaing C,Luckw ell J,MacraeP,et al.Chromatographia,2001,53(3/4):122

[47] Chassaing C,Stafford H,Luckw ell J,et al.Chromatographia,2005,62(1/2):17

[48] Grant R P,Cam eron C,ShelleyM M.Rap id Comm un Mass Spectrom,2002,16(18):1785

[49] Zeng W,Fisher A L,M usson D G,et al.J Chromatogr B,2004,806(2):177

[50] Fairhurst R E,Chassaing C,Venn R F,et al.B iosens B ioelectron,2004,20(6):1098

[51] Zeng H,Deng Y,Wu J T.J Chromatogr B,2003,788(2):331

[52] Vintiloiu A,M ullettW M,Papp R,et al.J Chromatogr A,2005,1082(2):150

[53] Sch¨afer C,Lubda D.J Chromatogr A,2001,909(1):73

[54] Turnpenny P,Fraier D,Chassaing C,et al.J Chromatogr B,2007,856(1/2):131

[55] M ottier P,Hamm el Y A,Grem aud E,et al.J Agric Food Chem,2008,56(1):35

[56] Takino M,Daishim a S,Nakahara T.Rap id Comm un Mass Spectrom,2003,17(5):383

Application of turbulent flow chromatography in the analysis of biological samples

LIU Peng,ZHOU Jianliang,AN Jingjing,LI Ping＊
(Key Laboratory of Modern Chinese Medicines,Ministry of Education,Department of Pharmacognosy,China Pharmaceutical University,Nan jing 210009,China)

O658

A

1000-8713(2010)02-0168-07

＊通訊聯(lián)系人:李 萍,教授,研究方向?yàn)樯幓钚猿煞峙c質(zhì)量評(píng)價(jià).Tel:(025)85391244,E-m ail:lip ing2004@126.com.

“十一五”國(guó)家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專(zhuān)項(xiàng)(No.2009ZX09502-020)和中國(guó)藥科大學(xué)研究生創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(No.02704006-522).

2009-08-28

DO I:10.3724/SP.J.1123.2010.00168