王美珍

云南省紅河州食品藥品檢驗(yàn)所,云南 蒙自 661100

1 標(biāo)準(zhǔn)品、實(shí)驗(yàn)用菌液的制備

標(biāo)準(zhǔn)品：慶大霉素,批號(hào) 130326-200314,規(guī)格 638u/mg,中國(guó)藥品生物制品檢定所。

實(shí)驗(yàn)用菌液的制備：實(shí)驗(yàn)菌,短小芽孢桿菌 (Bacillus pumilus,63202號(hào))芽孢懸液。取短小芽孢桿菌 (63202)工作用菌種普通瓊脂斜面培養(yǎng)物,加滅菌生理鹽水 3-4毫升將菌苔洗下,制成懸液,用吸管將此懸液接種至盛有培養(yǎng)基 I號(hào) (pH7.8-8.0)大試管斜面內(nèi),在 37℃培養(yǎng) 7天。取菌苔涂片,革蘭氏染色鏡檢,應(yīng)有芽孢 85%以上,用滅菌水將芽孢洗下,制成芽孢懸液,合并至滅菌大試管內(nèi),在 70℃水浴加熱 30分鐘,將芽孢懸液移至滅菌離心管內(nèi),rmp1500,離心 20分鐘。同法離心沉淀,共操作 3次。將菌懸液移至滅菌試管內(nèi),再置 70℃水浴加熱 30分鐘。4-8℃保存,可使用 6-12個(gè)月。

2 培養(yǎng)基、供試樣品

培養(yǎng)基供試樣品名稱(chēng) 批號(hào) 生產(chǎn)廠家 樣品名稱(chēng) 規(guī)格 批號(hào) 生產(chǎn)廠家抗生素檢定培養(yǎng)基I(pH7.8-8.0) 080414 北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司硫酸慶大霉素片 4萬(wàn)單位/片 20080103 廣東臺(tái)城制藥有限公司硫酸慶大霉素片 4萬(wàn)單位/片 20080601 大同云崗制藥有限公司抗生素檢定培養(yǎng)基I(pH7.8-8.0) 070824 中國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)技術(shù)研究所硫酸慶大霉素顆粒 10mg/袋 080302 河北華威得菲爾藥業(yè)有限公司硫酸慶大霉素顆粒 10mg/袋 0801001 華北制藥集團(tuán)制劑有限公司

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

培養(yǎng)基測(cè)定結(jié)果樣品名稱(chēng)硫酸慶大霉素片 (廣東臺(tái)城制藥有限公司) 硫酸慶大霉素片 (大同云崗制藥有限公司)試品間 回歸 偏離平行 測(cè)定效價(jià) 平均可信限率 試品間 回歸 偏離平行 測(cè)定效價(jià) 平均可信限率北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司 P＞0.05 P＜0.01 P＞0.05 108.7% 5.2% P＞0.05 P＜0.01 P＞0.05 98.7% 3.8%中國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)技術(shù)研究所P＞0.05 P＜0.01 P＞0.05 102.2% 5.0% P＞0.05 P＜0.01 P＞0.05 91.4% 4.5%北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司 P＜0.01 P＜0.01 P＞0.05 91.1% 4.3%P＜0.01 P＞0.05 P＞0.05 P＜0.01 P＜0.01 P＜0.01 P＞0.05 P＞0.05 P＞0.05 86.8%85.7%83.0%4.2%5.6%4.6%中國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)技術(shù)研究所P＞0.05 P＜0.01 P＞0.05 99.2% 4.7% P＞0.05 P＜0.01 P＞0.05 101.7% 5.1%

4 討論

從以上四個(gè)樣品的檢測(cè)結(jié)果可以看出,使用相同培養(yǎng)基對(duì)同一個(gè)樣品進(jìn)行多次測(cè)定時(shí),測(cè)得結(jié)果之差大約為1-5%,而使用不同廠家的培養(yǎng)基,測(cè)得結(jié)果之差 ＞5%。培養(yǎng)基的性質(zhì)不同對(duì)抑菌圈清晰度及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確度影響較大。在抗生素微生物檢定法的整個(gè)試驗(yàn)中,從標(biāo)準(zhǔn)品、供試品的取樣到培養(yǎng)基、緩沖液配制及實(shí)驗(yàn)菌種的制備各個(gè)環(huán)節(jié)均不容忽視。在日常工作中我們常常會(huì)碰到抑菌圈破裂、呈卵圓形、橢圓形甚至無(wú)圈等不正常情況。通過(guò)從多方面分析原因,有時(shí)重新選擇另一個(gè)批號(hào)或者廠家的培養(yǎng)基就能得到滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。另外,配制培養(yǎng)基及緩沖液的純化水也很重要,因?yàn)楦鞯厮|(zhì)酸度不一,按照藥典規(guī)定配制的培養(yǎng)基及緩沖液的 pH值也不相同,這就需要我們對(duì)配制好的培養(yǎng)基及緩沖液的 pH值進(jìn)行校對(duì)。在氨基糖苷類(lèi)抗生素的檢測(cè)中,培養(yǎng)基及緩沖液的 pH值對(duì)抑菌圈的形成影響很大,酸度越高得到的抑菌圈就越小。所以對(duì)檢測(cè)效價(jià)在合格與不合格邊緣的抗生素藥品,應(yīng)再換另一個(gè)廠家或批號(hào)的培養(yǎng)基進(jìn)行再次試驗(yàn),根據(jù)兩次結(jié)果進(jìn)行比較,從而得到比較準(zhǔn)確的測(cè)定數(shù)據(jù)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).抗生素微生物檢定法 《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄ⅪA：79-84.

[2]張治錟.抗生素藥品效價(jià)的微生物檢定─管碟法 《抗生素藥品檢驗(yàn)》1987,12-21,59-65.

[3]桑國(guó)衛(wèi),等.抗生素微生物檢定法 《中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》2000,376-377.