朱 靖 博，遲 曉 君，李 麗

( 大連工業(yè)大學(xué) 生物與食品工程學(xué)院， 遼寧 大連 116034 )

0 引 言

以動(dòng)脈粥樣硬化為主的心腦血管病因其具有“發(fā)病率高，死亡率高，致殘率高，復(fù)發(fā)率高”以及“并發(fā)癥多”的特點(diǎn)，被世界衛(wèi)生組織認(rèn)定為危害人類健康的“頭號(hào)殺手”[1]。動(dòng)脈粥樣硬化是與氧化脅迫、血管內(nèi)壁功能障礙相關(guān)的炎癥性疾病[2]，其中，氧化脅迫在動(dòng)脈粥樣硬化病理過程處于核心地位。丹參酚酸B具有極強(qiáng)的水溶性抗氧化能力和強(qiáng)大的鈣鐵離子螯合能力[3]，研究發(fā)現(xiàn)，其體外抗LDL氧化能力明顯優(yōu)于抗動(dòng)脈粥樣硬化藥probucol(普羅布克)[4]。然而，到目前為止，丹酚酸B對動(dòng)脈粥樣硬化的體內(nèi)活性的研究均通過灌胃的給藥方式，無法避免口服藥物存在的生物利用度差的缺陷。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用丹酚酸B通過腹腔注射的干預(yù)方法，并以辛伐他汀作對照，以血液中高靈敏度C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)及膽固醇與高密度脂蛋白的比值(TC/HDL)聯(lián)合作為評價(jià)指標(biāo)，觀察丹酚酸B對大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的影響，進(jìn)一步探討其作用機(jī)制，旨在為動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防與治療提供新的方法。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 動(dòng)物及飼料

SD大鼠，體重130～150 g，由大連醫(yī)科大學(xué)SPF實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)為SCXK(遼)2008-002。

高脂飼料組成：10% 蛋黃粉，市售；5% 豬油，市售；0.2% 膽固醇，購自北京鴻潤寶順科技有限公司；0.5% 膽鹽，購自北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司；84.3% 基礎(chǔ)飼料，大連醫(yī)科大學(xué)SPF實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.2 藥品及試劑

丹酚酸B(純度98%)由本實(shí)驗(yàn)室提供；維生素D3購自上海通用藥業(yè)股份有限公司；辛伐他汀購自杭州默沙東制藥有限公司；血脂檢測試劑購自中生北控生物科技股份有限公司；大鼠血清hs-CRP檢測試劑，美國ADL公司原裝進(jìn)口試劑。

1.1.3 儀 器

UV-2102 PC型紫外可見分光光度計(jì)，BIO-RAD酶聯(lián)免疫儀，TGL-16B離心機(jī)。

1.2 方 法

1.2.1 動(dòng)物飼養(yǎng)及分組

SD大鼠60只，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為以下6組(n=6)：

Ⅰ，正常對照組；Ⅱ，模型組；Ⅲ，低劑量藥物組[丹酚酸B：2 mg/(kg·d)]；Ⅳ，中劑量藥物組[丹酚酸B：12.5 mg/(kg·d)]；Ⅴ，高劑量藥物組[丹酚酸B：20 mg/(kg·d)]；Ⅵ，辛伐他汀組[辛伐他?。?0 mg/(kg·d)]。

1.2.2 模型制備及給藥

模型組、低劑量藥物組、中劑量藥物組、高劑量藥物組及辛伐他汀組均喂飼高脂飼料，同時(shí)于實(shí)驗(yàn)開始時(shí)腹腔注射維生素D3(40萬U/kg體重)，每隔一天注射一次，共兩次。正常組喂飼普通飼料，同時(shí)腹腔注射生理鹽水做對照。

低劑量藥物組、中劑量藥物組、高劑量藥物組及辛伐他汀組從第5周開始每天注射不同劑量藥物；正常組與模型組注射等量生理鹽水作對照，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

1.2.3 指標(biāo)測定及方法

分別于實(shí)驗(yàn)開始前，造模4周末，8周末，從眼眶取血，取血前禁食12 h。待血液自行凝固后離心分離血清。

參照相應(yīng)試劑盒說明測定血清中各項(xiàng)指標(biāo)。其中，膽固醇(TC)用酶比色法(CHOD-PAT法)檢測，高密度脂蛋白(HDL)用磷鎢酸-鎂沉淀法檢測，高靈敏度C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)用酶聯(lián)免疫法檢測。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用 SPSS 10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)用(x±s)表示，組內(nèi)檢驗(yàn)用T檢驗(yàn)，組間檢驗(yàn)用方差檢驗(yàn)，P<0.05為差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義。

2 結(jié)果與討論

2.1 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中膽固醇(TC)濃度的影響

由表1可見，喂飼高脂飼料及注射大劑量VD3后，丹酚酸B各藥物組，辛伐他汀組及模型組血液中膽固醇濃度具有升高的趨勢，4周末膽固醇濃度與開始時(shí)相比具有顯著性差異(*P<0.05)。經(jīng)過藥物干預(yù)后各藥物組均能降低血液中膽固醇濃度，與藥物干預(yù)前相比具有顯著性差異(△P<0.05)。

表1 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中膽固醇濃度的影響

Tab.1 Effect of salvianolic acid B and simvastatin on the concentration of blood total cholesterol

c(TC)/(mmol·L-1)開始4周末8周末對照組1.45±0.421.14±0.221.29±0.23丹酚酸B低劑量組1.84±0.302.86±0.63*1.37±0.30△丹酚酸B中劑量組1.26±0.402.88±0.72*1.53±0.18△丹酚酸B高劑量組1.73±0.212.44±0.60*1.42±0.26△辛伐他汀組1.93±0.322.48±0.66*1.52±0.26△模型組1.91±0.382.69±0.94*5.74±0.90注:飼養(yǎng)前后組內(nèi)比較:4周末與開始比較,*P<0.05;8周末與4周末比較,△P<0.05。

2.2 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中高密度脂蛋白(HDL)濃度的影響

由表2可見，喂飼高脂飼料及注射大劑量VD3后，丹酚酸B中劑量藥物組，辛伐他汀組及模型組血液中高密度脂蛋白濃度有降低的趨勢，4周末丹酚酸B中劑量組，辛伐他汀組，模型組高密度脂蛋白濃度與開始時(shí)相比具有顯著性差異(*P<0.05)。經(jīng)過藥物干預(yù)后各藥物組血液中高密度脂蛋白膽固醇濃度與藥物干預(yù)前相比無顯著性差異(△P>0.05)。

表2 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中高密度脂蛋白膽固醇(HDL)濃度的影響

Tab.2 Effect of salvianolic acid B and simvastatin on the concentration of blood high density lipoprotein

c(HDL)/(mmol·L-1)開始4周末8周末對照組0.98±0.111.02±0.170.98±0.19丹酚酸B低劑量組1.17±0.261.05±0.500.97±0.19△丹酚酸B中劑量組1.22±0.271.01±0.23*0.95±0.20△丹酚酸B高劑量組1.29±0.401.01±0.210.99±0.18△辛伐他汀組1.58±0.251.00±0.26*0.96±0.20△模型組1.95±0.341.38±0.49*1.07±0.19注:飼養(yǎng)前后組內(nèi)比較:4周末與開始時(shí)比較,*P<0.05; 8周末與4周末比較,△P>0.05。

2.3 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中TC/HDL的影響

由表3可見，喂飼高脂飼料及注射大劑量VD3后，丹酚酸B各藥物組，辛伐他汀組及模型組血液中TC/HDL具有升高的趨勢，4周末TC/HDL與開始時(shí)相比具有顯著性差異(*P<0.05)。經(jīng)過藥物干預(yù)后各藥物組均能降低血液中TC/HDL，與藥物干預(yù)前相比具有顯著性差異(△P<0.05)。

2.4 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中高靈敏度C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)質(zhì)量濃度的影響

由表4可見，喂飼高脂飼料及注射大劑量VD3后，丹酚酸B各藥物組，辛伐他汀組及模型組血液中hs-CRP均有升高的趨勢，4周末血液中hs-CRP質(zhì)量濃度與開始時(shí)相比具有顯著性差異(*P<0.05)。經(jīng)過藥物干預(yù)后各藥物組均能降低血液中hs-CRP質(zhì)量濃度，與藥物干預(yù)前相比具有顯著性差異(△P<0.05)。

表3 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中n(TC)/n(HDL)的影響

Tab.3 Effect of salvianolic acid B and simvastatin on then(TC)/n(HDL) of blood

n(TC)/n(HDL)開始4周末8周末對照組1.45±0.381.15±0.291.39±0.46丹酚酸B低劑量組1.59±0.363.32±1.81*1.43±0.26△丹酚酸B中劑量組1.79±0.453.02±1.18*1.66±0.28△丹酚酸B高劑量組1.48±0.402.47±0.89*1.47±0.32△辛伐他汀組1.25±0.272.62±0.94*1.64±0.42△模型組1.01±0.202.12±0.69*5.66±1.74注:飼養(yǎng)前后組內(nèi)比較:4周末與開始時(shí)比較,*P<0.05;8周末與4周末比較,△P<0.05。

表4 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中hs-CRP質(zhì)量濃度的影響

Tab.4 Effect of salvianolic acid B and simvastatin on the concentration of blood hs-CRP

ρ(hs-CRP)/(μg·mL-1)開始4周末8周末對照組0.02±0.010.02±0.010.02±0.01丹酚酸B低劑量組0.26±0.010.45±0.10*0.34±0.12△丹酚酸B中劑量組0.02±0..010.47±0.15*0.35±0.11△丹酚酸B高劑量組0.02±0.010.43±0.17*0.36±0.14△辛伐他汀組0.04±0.060.40±0.12*0.35±0.11△模型組0.02±0.010.41±0.11*0.40±0.11注:飼養(yǎng)前后組內(nèi)比較:4周末與開始時(shí)比較,*P<0.05;8周末與4周末比較,△P<0.05

2.5 丹酚酸B抑制動(dòng)脈粥樣硬化的量效關(guān)系及與辛伐他汀藥效對比

由表5可見，給予藥物干預(yù)后，對于血液中TC，HDL，TC/HDL以及hs-CRP等指標(biāo)，丹酚酸B低劑量組、丹酚酸B中劑量組、丹酚酸B高劑量組各藥物組間進(jìn)行比較均無顯著性差別(*P>0.05)，且丹酚酸B各藥物組與辛伐他汀組比較亦無顯著性差別(△P>0.05)。

表5 丹酚酸B抑制動(dòng)脈粥樣硬化的量效關(guān)系及與辛伐他汀藥效對比

Tab.5 Dose-effect relationship of the salvianolic acid B inhibiting atherosclerosis and the comparison of efficacy between salvianolic acid B and simvastatin

c(TC)/(mmol·L-1)c(HDL)/(mmol·L-1)n(TC)/n(HDL)ρ(hs-CRP)/(μg·mL-1)對照組1.29±0.230.98±0.191.39±0.460.02±0.01丹酚酸B低劑量組1.37±0.30*△0.97±0.19*△1.43±0.26*△0.34±0.12*△丹酚酸B中劑量組1.53±0.18*△0.95±0.20*△1.66±0.28*△0.35±0.11*△丹酚酸B高劑量組1.42±0.26*△0.99±0.18*△1.47±0.32*△0.36±0.14*△辛伐他汀組1.52±0.260.96±0.201.64±0.420.35±0.11模型組5.74±0.901.07±0.185.70±1.830.40±0.11注:丹酚酸B各藥物組間比較: *P>0.05; 丹酚酸B各藥物組與辛伐他汀組比較,△P>0.05。

3 結(jié) 論

動(dòng)脈粥樣硬化是一種與氧化脅迫、血管內(nèi)壁功能障礙相關(guān)的炎癥性疾病，而丹酚酸B具有極強(qiáng)的水溶性抗氧化能力[5-6]和很強(qiáng)的鈣鐵離子螯合能力，因此有望取得理想的治療效果。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用丹酚酸B通過腹腔注射的干預(yù)方法，并以辛伐他汀作對照，以血液中hs-CRP及TC/HDL聯(lián)合作為評價(jià)指標(biāo)，觀察丹酚酸B對大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的影響，其中，hs-CRP與TC/HDL兩項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合在臨床上診斷陽性率能達(dá)到95%以上[7-8]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丹酚酸B能夠通過降低血脂及血液中hs-CRP水平，治療動(dòng)脈粥樣硬化及其相關(guān)疾病。推其作用機(jī)制是丹酚酸B的極強(qiáng)水溶性抗氧化能力抑制低密度脂蛋白(LDL)氧化形成氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)，從而抑制脂質(zhì)的形成以及炎癥反應(yīng)的發(fā)生，達(dá)到治療動(dòng)脈粥樣硬化的療效。實(shí)驗(yàn)同時(shí)發(fā)現(xiàn)，丹酚酸B生物活性很強(qiáng)，其低劑量[2 mg/(kg·d)]與辛伐他汀[10 mg/(kg·d)]對動(dòng)脈粥樣硬化抑制作用無顯著差異，顯示出其具有預(yù)防與治療動(dòng)脈粥樣硬化的市場潛力。這為動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防和治療提供了新的思路。然而，其治療動(dòng)脈粥樣硬化的作用在目前所取得劑量范圍內(nèi)尚無明顯的劑量依賴關(guān)系。因此，其劑量依賴關(guān)系的劑量范圍還有待進(jìn)一步的深入研究。

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