胡錫階，劉祖林，萬衛(wèi)紅

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院貴州省細(xì)胞工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；2.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院法醫(yī)學(xué)鑒定中心法醫(yī)物證鑒定技術(shù)室，貴州遵義563003)

親子鑒定中男性個(gè)體Amelogenin基因座X片斷缺失一例報(bào)道

胡錫階1，2，劉祖林1，2，萬衛(wèi)紅1，2

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院貴州省細(xì)胞工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；2.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院法醫(yī)學(xué)鑒定中心法醫(yī)物證鑒定技術(shù)室，貴州遵義563003)

男性個(gè)體；Amelogenin基因座；X片斷缺失；報(bào)道

我鑒定中心對親子鑒定案例進(jìn)行鑒定分析時(shí)，檢出1例男性個(gè)體Amelogenin基因座X片斷缺失，其STR分型圖上只存在Y染色體Amelogenin擴(kuò)增產(chǎn)物，而無X染色體Amelogenin特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，出現(xiàn)AMELX等位基因缺失，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對象和方法

1.1 對象親子鑒定受檢者爭議父37歲(實(shí)驗(yàn)室編號：2008-0035-1),子5歲(實(shí)驗(yàn)室編號：2008-0035-2)。

1.2 方法DNA的提取采用固相法提取，檢材為EDTA-K2抗凝靜脈血；試劑為Qiagen公司的Generation Capture Column；用美國ABI公司的產(chǎn)品AmpFlSTR誖IdentifilerTM試劑分別對15個(gè)STR基因座(D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539D、2S1338、D19S433、vWA、TPOX、D18S51、D5S818、FGA、)和1個(gè)性別基因座Amelogenin按技術(shù)手冊所給條件進(jìn)行PCR復(fù)合擴(kuò)增，3100 Avant遺傳分析儀進(jìn)行電泳分離，并通過GeneScan Software V3.7軟件、Genotyper Software V3.7軟件進(jìn)行DNA的STR基因分型。后加做Promega公司的PowerPlex16體系,除Amelogenin等相同基因座外，增加其獨(dú)有的Penta D、Penta E基因座，使檢測基因座增加到17個(gè)。等位基因分型結(jié)果見表1，Amelogenin基因座分型圖譜見圖1、圖2。

2 結(jié)果和討論

表1 STR基因分型結(jié)果

圖1 Identifile體系STR分型的Amelogenin基因座圖譜A：等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物ladder；B：父；C：子。父親檢樣的AMELX等位基因缺失，只存在AMELY等位基因

從表1分析可以看到，常染色體上的17個(gè)STR基因座的分型在此案例中都符合孟德爾遺傳規(guī)律，經(jīng)計(jì)算其PI（父權(quán)指數(shù)）為5243925.22，RCP（父權(quán)相對機(jī)會）為99.999980930%；盡管父親的X染色體上Amelogenin等位基因缺失，但大多數(shù)情況下在STR分型中Amelogenin只是生物樣本性別鑒別的有效方法，并不用于親權(quán)指數(shù)的計(jì)算，也不影響親權(quán)結(jié)論的得出，因此在這個(gè)案例中我們作出的是認(rèn)定親生血緣關(guān)系的結(jié)論。

圖2 PowerPlex16體系STR分型的Amelogenin基因座圖譜A：子；B：父；C：等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物ladder。父親檢樣的AMELX等位基因缺失，只存在AMELY等位基因

Amelogenin是編碼牙釉蛋白的基因，為X、Y染色體同源基因,其特異PCR引物最早由FSS（英國法庭科學(xué)服務(wù)部）設(shè)計(jì)，這種引物PCR擴(kuò)增X和Y染色體可同時(shí)分別得到106pb和112bp的特異性產(chǎn)物[1]。正常男性的Amelogenin基因座分型表現(xiàn)為XY，正常女性則分型表現(xiàn)為XX。本案例在用Identifiler體系進(jìn)行分析時(shí)，發(fā)現(xiàn)爭議父的Amelogenin基因座的分型圖譜上只存在Y特異片段的譜帶，而無X特異片段的譜帶，出現(xiàn)AMELX等位基因缺失。不同公司設(shè)計(jì)的引物有可能存在差異，利用不同公司試劑盒檢測相同基因座能在較大程度上避免產(chǎn)生無效等位基因,因此，為了避免不同STR商品試劑盒中引物帶來的影響，我們用PowerPlex16體系來再次驗(yàn)證分析結(jié)果，性別基因座Amelogenin上同樣是X片斷缺失，兩個(gè)不同公司試劑盒檢測結(jié)果一致，可以不考慮“假”突變。

本鑒定中心是首次發(fā)現(xiàn)這種缺失，有資料顯示這一現(xiàn)象在男性的檢驗(yàn)中是3/7000的比例[1]。通常情況下，無論是具有正常染色體核型的男性（46，XY）和女性（46，XX），還是性反轉(zhuǎn)病人（46，XX男性和46，XY女性），因都不可能缺少X染色體，所以AMELX等位基因缺失變異不會導(dǎo)致性別的錯(cuò)判，但如果在產(chǎn)前診斷中，通過這種方法進(jìn)行性染色體數(shù)目異常定量檢測[2]，對一些核型是47，XXY（Klinefelter綜合征）的胚胎，可造成染色體數(shù)目判斷錯(cuò)誤，從而干擾產(chǎn)前診斷的結(jié)果。陳愛萍等對這種AMELX等位基因缺失的樣本進(jìn)行了序列分析，結(jié)果顯示在其引物結(jié)合區(qū)發(fā)生了兩種類型的點(diǎn)突變，并報(bào)道其突變率為0.042%[3]，這些突變影響了引物與DNA模板的結(jié)合和DNA鏈的延伸,導(dǎo)致擴(kuò)增失敗，造成AMELX等位基因的缺失。另外，STR分型時(shí)Amelogenin基因座的非正常結(jié)果不僅出現(xiàn)在X染色體上，Y染色體上也有Amelogenin等位基因的缺失[4]，AMELY等位基因的缺失常導(dǎo)致DNA的STR分型時(shí)男性被誤判為女性,如果用此方法進(jìn)行產(chǎn)前性別鑒定[5]，可造成伴性遺傳病胎兒出生的風(fēng)險(xiǎn)，也可在一些刑偵案件上造成性別錯(cuò)判,因此，對于這些個(gè)案，我們應(yīng)引起高度的重視。在這次鑒定分析中，爭議父除了進(jìn)行DNA的STR分型，還作了染色體核型分析，其核型為正常的46，XY。

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R394.3[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]B[文章編號]1000-2715（2010）01-0079-02

2009-12-30]