曾榮華 鄧雪媚 盧慧嫻 莫肇江 劉 燕

1 廣東省肇慶市第一人民醫(yī)院藥劑科（526021）

2 廣東省肇慶醫(yī)學(xué)專(zhuān)科學(xué)校（526021）

復(fù)方丹參片是2005年版《中國(guó)藥典》一部收載的品種，由丹參、三七和冰片三昧藥組成，有活血化瘀、理氣止痛之功效，用于心血管疾病可顯著擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加血流量，減少心肌耗氧量，改變血液流變性。同時(shí)也能改善糖尿病患者心、腦血管及神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥的癥狀及體征。三七是復(fù)方丹參片的重要藥物組成，國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道[1-3]。對(duì)不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的本品的含量比較只是針對(duì)丹參中主要成分丹參酮ⅡA和丹酚酸B。三七總皂苷含量變化幅度較大，致使藥品質(zhì)量和療效存在很大的差異。三七中的主要有效成分是人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1，已有文獻(xiàn)報(bào)道采用HPLC法測(cè)定以上成分的含量來(lái)控制制劑的質(zhì)量[4,5]。本文采用HPLC法，同時(shí)對(duì)復(fù)方丹參片中的三七總皂苷3種主要有效成分進(jìn)行了含量測(cè)定，可用于控制復(fù)方丹參片的質(zhì)量，保證其臨床用藥有效性提供參考。

1 資料與方法

1.1 資料

儀器與試劑：Agilentl100高效液相色譜儀（美國(guó)惠普公司）；Agilentl100系列可變波長(zhǎng)檢測(cè)器；Diamonsil C18柱（5μm，250mm×4.6mm，迪馬公司）；BP211D電子分析天平（北京塞多利斯天平有限公司）；KQ100型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

人參皂苷Rg1（批號(hào)：110703-200637）、人參皂苷Rb1（批號(hào)：110704-200634）、三七皂苷R1（批號(hào)：110745-200619），對(duì)照品均供含量測(cè)定用，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。實(shí)驗(yàn)中乙腈為色譜純，水為純凈水，甲醇為分析純；復(fù)方丹參片（廣州白云山中藥廠(chǎng)）。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（5μm，250mm×4.6mm）；以乙腈為流動(dòng)相A，0.05%磷酸水溶液為流動(dòng)相B，進(jìn)行二元梯度洗脫，洗脫程序[6]：0→12min流動(dòng)相A 22%，12→20min流動(dòng)相A 22%→28%，20→60min流動(dòng)相A 28%→43%；流動(dòng)相B 81%→64%；流速：1.0mL/min；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm，進(jìn)樣量為10μL。

1.2.2 供試品溶液的制備

取復(fù)方丹參片20片(除去包衣)，研碎，精密稱(chēng)取約0.8g，加乙醚10mL，超聲5min，過(guò)濾，棄去濾液，殘?jiān)鼡]干溶劑，加20mL甲醇于水浴上回流60min，放冷，過(guò)濾，濾液蒸干，加水微熱溶解，定容至5mL，搖勻，精密吸取上清液1.00mL，加于E固相萃取小柱上（小柱先用5mL甲醇和5mL純水預(yù)先沖洗處理）[7]，分別用5mL純水和5mL 20%甲醇水溶液洗脫，棄去洗脫液，再用5mL 70%的甲醇水溶液洗脫，收集洗脫液，水浴蒸干，用甲醇定容至1mL，用微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為供試品溶液。

1.2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥的人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及三七皂苷R1對(duì)照品適量，分別加甲醇制成：人參皂苷Rg1質(zhì)量濃度為0.462mg/mL、人參皂苷Rb1質(zhì)量濃度為0.368mg/mL，三七皂苷R1質(zhì)量濃度為0.105mg/mL的溶液，將三者混合作為對(duì)照品溶液。

2.1.4 缺三七陰性對(duì)照溶液的制備

按2005年版中國(guó)藥典中復(fù)方丹參片中的處方，取處方中除三七外的其余藥材按制劑工藝制成缺三七的陰性對(duì)照品，按2.2項(xiàng)下的供試品制備方法處理得缺三七陰性對(duì)照液，精密吸取溶液10μL進(jìn)行測(cè)定

結(jié)果顯示：在該色譜條件下，人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及三七皂苷R1能夠達(dá)到基線(xiàn)分離，陰性對(duì)照液在三七皂苷R1和人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的相同保留時(shí)間位置上未見(jiàn)色譜峰，說(shuō)明其他成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2 結(jié) 果

2.1 線(xiàn)性關(guān)系試驗(yàn)

精密吸取混合對(duì)照品1、5、9、13、17μL注入液相色譜儀測(cè)定，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算回歸方程，結(jié)果如表1所示。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)結(jié)果表

2.2 精密度試驗(yàn)

分別精密吸取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1對(duì)照品溶液，于測(cè)定條件下進(jìn)樣10μL，分別重復(fù)進(jìn)樣5次。以3種組分峰面積分別計(jì)算，結(jié)果人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1的RSD分別為3.02%、3.18%、3.35%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.3 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的供試品，按供試品溶液制備項(xiàng)下操作，平行制備6份，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品含量。結(jié)果樣品中測(cè)得人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1平均含量分別為5.47、5.13、1.608mg/g，人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1的RSD分別為3.17%，4.24%、2.31%。測(cè)定結(jié)果表明，本方法重現(xiàn)性符合要求。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)供試品，室溫下放置，分別在0、2、4、8、10、24h進(jìn)樣，結(jié)果人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1的RSD分別為2.46%、3.57%、3.46%。表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量的供試品（批號(hào)為20061111，每片含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1分別為5.75、4.91、1.55mg，每片重0.3118g），分別精密加入一定量的人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1對(duì)照品，按供試品溶液制備項(xiàng)下操作，重復(fù)操作5份，按色譜條件測(cè)定含量，計(jì)算回收率，見(jiàn)表2～表4。

2.6 樣品測(cè)定

取3批復(fù)方丹參片內(nèi)容物，分別按“2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理樣品及測(cè)定，結(jié)果批號(hào)為071001、071104、071205的樣品測(cè)得的三七總皂苷含量分別為10.25、12.10和9.96 mg/粒。

3 討 論

由于三七屬于貴細(xì)藥材，2005年版《中國(guó)藥典(一部)》復(fù)方丹參片項(xiàng)下僅有丹參成分的含量測(cè)定，對(duì)三七成分僅有薄層色譜鑒別，一些廠(chǎng)家為了降低成本，采用少投料、用劣藥來(lái)降低成本，進(jìn)行惡意競(jìng)爭(zhēng)，

表2 人參皂苷Rg1加樣回收率實(shí)驗(yàn)（n=5）

表3 人參皂苷Rb1加樣回收率實(shí)驗(yàn)

表4 三七皂苷R1加樣回收率實(shí)驗(yàn)

而現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能有效控制該品種的質(zhì)量，建議增加三七的含量測(cè)定，以保證復(fù)方丹參片療效。同時(shí)還應(yīng)考慮中藥生產(chǎn)的現(xiàn)狀以及中藥的特殊性，對(duì)生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)原料的購(gòu)人、加工以及投料生產(chǎn)的全過(guò)程進(jìn)行有效監(jiān)控。實(shí)驗(yàn)證明，對(duì)君藥三七建立含量測(cè)定方法，能有效地監(jiān)控本品內(nèi)在質(zhì)量，有助于發(fā)揮處方應(yīng)有的療效，保證患者用藥安全有效。

[1] 尹愛(ài)群,劉群,邱明豐.不同廠(chǎng)家復(fù)方丹參片中丹參酮ⅡA的含量測(cè)定[J] .中國(guó)中藥雜志,2006,31(20)：1729-1731.

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