柴欣樓 黃小龍 張永生

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué),100029 2.中國中醫(yī)藥出版社3.北京中醫(yī)藥大學(xué)附屬東方醫(yī)院）

冠狀動脈嚴(yán)重狹窄,造成心肌細(xì)胞缺血缺氧,是冠心病的主要病理機(jī)制。經(jīng)皮冠狀動脈內(nèi)球囊擴(kuò)張成形術(shù)(Percutaneoustransluminalcoronaryangioplasty,PTCA)可恢復(fù)冠狀動脈前向血流,已成為治療冠心病的基石。由于血管的彈性回縮及血管內(nèi)膜增厚,術(shù)后半年內(nèi)再狹窄的發(fā)生率高達(dá)40%～60%[1,2]。因而成為目前的研究熱點(diǎn)。中醫(yī)對其的認(rèn)識也不斷提高,但是其所屬的證候不甚明確,本實(shí)驗(yàn)以PTCA術(shù)后大耳白兔為研究對象,旨在觀察 PTCA術(shù)后實(shí)驗(yàn)動物的癥狀學(xué)。

實(shí)驗(yàn)材料

1.實(shí)驗(yàn)動物 :清潔級健康新西蘭兔[提供單位:北京海淀興旺動物養(yǎng)殖場,動物合格證號:SCXK(京)2006-0006]20只 ,雄性,體重2.5±0.3kg。

主要藥品與試劑:①阿司匹林腸溶片(北京天惠藥業(yè)股份有限公司,批號:H10940191,50mg/片)。②鹽酸普魯卡因注射液(北京市永康藥業(yè)有限公司,批號:H11020574,2ml:40mg/支)。③烏拉坦(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號:T20070921,化學(xué)純CP500g)。④肝素鈉注射液(江蘇常州千紅生化制藥有限公司,批號:H32002066,2ml:12500U/支)。⑤注射用青霉素鈉(華北制藥股份有限公司,批號:H13020657,80萬U/瓶)。⑥甲醛溶液(濟(jì)南魯康化學(xué)工業(yè)有限公司,批號:T02010242,分析純500ml)。⑦安爾碘皮膚消毒劑(上海利康消毒高科技有限公司,批號:20080421,40ml/瓶)。⑧ICAM-1試劑盒、VCAM-1試劑盒、MCP-1試劑盒(購買于武漢博士德生物工程有限公司)。

主要實(shí)驗(yàn)儀器:①SigmaK15臺式低溫高速冷凍離心機(jī)(博萬力行儀器有限公司)。②電子天平DT-201A(江蘇常熟金羊天平儀器廠)。③全自動生化分析儀(型號:OLYMPUSAU640日本造)。④DADEBEHRING(型號:BN-Prospec,美國 造)。⑤STAR72600酶標(biāo)儀(型號:ICAP-9000,美國Jarrel-ASH公司)。⑥數(shù)碼成像軟件(SPOT-ⅡDiagnotisticinstrument inc.美國)。

動物分組:按計(jì)算器隨機(jī)數(shù)隨機(jī)分組編號:正常組6只,模型組6只,中藥組8只。

實(shí)驗(yàn)方法

動脈粥樣硬化模型的建立:新西蘭兔分組適應(yīng)性喂養(yǎng) 1周后,中藥組(瓜蔞 2.14g/kg,生曬參0.64g/kg,酒大黃0.43g/kg)、模型組均給予高脂飼料(1%膽固醇+7.5%蛋黃粉+8%脂肪+83.5%普通兔全價(jià)飼料)100g/日喂養(yǎng) 6周,6周后中藥組及模型組采用球囊拉傷術(shù)損傷髂動脈。術(shù)后均繼續(xù)以高脂飲食喂養(yǎng)5周。正常組全程給予普通兔飼料喂養(yǎng),各組均自由飲水。

手術(shù)方法:術(shù)前3天服用阿司匹林腸溶片25mg/日,術(shù)前禁食12h,不禁水。兔耳緣靜脈注射部位備皮,75%酒精消毒,普魯卡因注射液局部表面麻醉后靜推10%烏拉坦10ml/kg,同時推入2%肝素鈉注射液5ml。麻醉5min后,兔無明顯掙扎,角膜反射遲鈍,心率增快,將其仰臥位固定于兔臺,右腹股溝區(qū)剪毛備皮,安爾碘局部消毒3次。尋找股動脈搏動部位,剪開皮膚約3cm開口,逐層分離筋膜及肌肉,暴露股神經(jīng)及股靜脈,于股靜脈內(nèi)下方找到股動脈后,分離股動脈與周圍組織長約2cm段,遠(yuǎn)心端用絲線結(jié)扎,近心端套活結(jié)并加上動脈夾。將眼科鑷柄墊于股動脈下,距離動脈結(jié)扎端較近部位剪一“V”形切口,將導(dǎo)管沿切口向近心端插入,拉緊活結(jié),放松動脈夾,再稍放松活結(jié),迅速將導(dǎo)管插入股動脈10～15cm,回拉至髂動脈,連接手推壓力泵,注入肝素生理鹽水,球囊充水約5個大氣壓后緩慢回拉,減除球囊壓力后再次向前推進(jìn)球囊導(dǎo)管。重復(fù)3次后拔出,結(jié)扎股動脈近心端,逐層縫合,傷口以安爾碘消毒,用生理鹽水沖洗傷口周圍3遍,臀部注射青霉素鈉80萬U/日(連用3天),待兔蘇醒后放回兔籠,術(shù)后8h予生理鹽水10ml口服。

在此過程中系統(tǒng)觀察精神狀態(tài)、活動性、毛色、毛質(zhì) 、毛狀 、耳郭 、望目色 、望舌 、舌形 、苔色 、舌下絡(luò)脈 、舌靜脈瘀黑伸展度、爪色、浮腫、傷口愈合、滲血滲液、食欲、飲食量、活動量等。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

一般狀態(tài)觀察:術(shù)后1～7天,各組大耳白兔均出現(xiàn)毛發(fā)雜亂、活動緩慢、精神遲鈍等表現(xiàn),與手術(shù)過程后失血、疼痛有關(guān)。術(shù)后7～10天,模型組、中藥組宏觀表現(xiàn)中精神狀態(tài)、毛色、毛質(zhì)、毛狀、耳郭、目色、舌形、苔色 、舌下絡(luò)脈 、舌靜脈 、伸展度 、爪色 、浮腫 、傷口愈合 、滲血滲液、食欲等未見顯著性差異。

各組新西蘭兔腹主動脈內(nèi)膜、中膜面積及內(nèi)膜/中膜面積比值比較見表1。

表1 各組新西蘭兔腹主動脈內(nèi)膜、中膜面積及內(nèi)膜/中膜比值

結(jié)果顯示:模型組、中藥組腹主動脈內(nèi)膜、中膜面積及內(nèi)膜/中膜比值較正常組有顯著性差異;中藥組內(nèi)膜面積及內(nèi)膜/中膜比值較模型組有顯著性差異。

體重:各組兔子術(shù)后體重比較見表2。

表2 各組兔子術(shù)后體重比較

結(jié)果顯示:PTCA術(shù)后20天中藥組兔子的體重比模型組兔子更接近于正常。

各組兔子術(shù)后活動性比較見表3。

表3 各組兔子術(shù)后活動性比較

結(jié)果顯示:PTCA術(shù)后20天中藥組兔子的活動性明顯好于模型組兔子。

中藥組和模型組兔子術(shù)后傷口愈合程度比較見表4。

表4 中藥組和模型組兔子術(shù)后傷口愈合程度比較

PTCA術(shù)后20天中藥組兔子的傷口愈合情況好于模型組兔子。

結(jié)論

通過正常組、中藥組、模型組大耳白兔髂動脈球囊擴(kuò)張成形術(shù)后宏觀四診信息望診的采集及分析得出:通過中藥治療,大耳白兔髂動脈球囊擴(kuò)張成形術(shù)后比不治療恢復(fù)情況更好。

討論

目前常用的球囊拉傷術(shù)模型包括兔的髂動脈、犬的股動脈和冠狀動脈及豬的冠狀動脈[1]。兔的優(yōu)點(diǎn)是易捕捉麻醉,操作簡單、價(jià)廉、喂養(yǎng)方便及側(cè)支血管豐富,可在術(shù)后保證側(cè)支循環(huán)。缺點(diǎn)為髂動脈反應(yīng)性高,易發(fā)生血管痙攣。本實(shí)驗(yàn)采用純種新西蘭白兔,用與血管直徑約為1.2∶1比例的球囊過度擴(kuò)張髂動脈,使得髂動脈血管損傷程度盡可能保持一致。病理結(jié)果顯示,模型組與正常組相比,內(nèi)膜和中膜都有不同程度的增厚,說明家兔髂動脈球囊損傷內(nèi)膜增生模型復(fù)制成功,為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。

中醫(yī)認(rèn)為,球囊損傷模型是氣虛血瘀模型,但缺乏相應(yīng)的證候動物模型的評價(jià)體系[2](該體系包括動物的宏觀表現(xiàn)、臨床疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)、證候診斷標(biāo)準(zhǔn)和證候臨床生物學(xué)標(biāo)志4個部分)。為此,本課題對大耳白兔進(jìn)行了宏觀表征的直接觀察(包括動物一般狀態(tài)、運(yùn)動、飲食、呼吸、體重 、舌象等內(nèi)容);但由于動物在望、聞、問、切四診信息的采集上存在一定困難,且大多數(shù)體征模型組和用藥組均無差異,故而單純依賴觀察手段進(jìn)行辨證是不夠的,借助其他實(shí)驗(yàn)手段或采用更新的實(shí)驗(yàn)儀器是動物模型辨證的必然選擇。

本課題對動物宏觀表征進(jìn)行了直接觀察,由于采用的是局部球囊損傷模型,而且飼喂的時間較短,再加上動物本身皮毛厚又不能問診,所以動物四診信息采集丟失的信息較多,單純靠動物宏觀表征難以鑒定其病癥,要密切結(jié)合動物的生物學(xué)信息。

[1]何學(xué)令,尹海林,等.動脈粥樣硬化動物模型研究的現(xiàn)狀及存在的問題.實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)與管理,2006,23(4):41-43.

[2]沈自尹.中醫(yī)虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn).中西醫(yī)結(jié)合雜志,1986,6(10):598.