黃華軾,陳 軍,陳汀波

(1.廣東省深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院,廣東深圳,518101;2.廣州中醫(yī)藥大學(xué),廣東廣州,510405)

麻桂抗感顆粒提取工藝研究

黃華軾1,陳 軍2,陳汀波2

(1.廣東省深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院,廣東深圳,518101;2.廣州中醫(yī)藥大學(xué),廣東廣州,510405)

祛風(fēng)顆粒;正交試驗;鹽酸麻黃堿

麻桂抗感顆粒由麻黃、桂枝、柴胡等多味藥材組成,具有解表散寒、宣肺平喘之功效,以湯劑形式長期應(yīng)用于臨床,療效確切。麻黃為方中君藥,文獻報道麻黃中的主要有效成分麻黃堿具有顯著的鎮(zhèn)咳平喘和利尿作用[1]。本文選擇以鹽酸麻黃堿保留率為指標,對該方提取工藝進行研究。根據(jù)方中藥材的理化性質(zhì),綜合考慮,使用水作為溶媒,通過正交試驗設(shè)計法,優(yōu)選復(fù)方提取工藝條件[2Ο4],為后續(xù)研究提供理論依據(jù),同時亦為其它復(fù)方中麻黃藥材的提取提供參考。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

SHIMADZU高效液相色譜儀,含UV檢測器,LC-20AT泵,SIL-20A自動進樣器,Lab2 solution色譜工作站,十萬分之一分析天平(Met2 tler Toledo CP225D);萬分之一分析天平(Mettler Toledo AB204-N),EYELA N-1000S-W旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

1.2 試藥

麻黃藥材(購于廣東和翔制藥股份有限公司,經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)黃海波副教授鑒定為草麻黃Ephedra sinica Stapf.的干燥草質(zhì)莖),鹽酸麻黃堿對照品(批號171241-200506),乙腈為色譜純,高效液相測定用水為超純水,其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

以Kromasil C18柱為固定相,以乙腈-0. 1%磷酸(5∶95)為流動相,檢測波長為210 nm,流速為1.0 mL/min。

2.2 標準曲線的制備

取鹽酸麻黃堿對照品適量,精密稱定(4.98 mg),置25 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取1～10 mL量瓶中并加甲醇至刻度,搖勻,制成每1 mL含19.92μg的對照品溶液,濾過,即得。

分別精密吸取上述鹽酸麻黃堿對照品溶液2、4、6、8、12、16和20μL注入高效液相色譜儀,測定,記錄峰面積,以鹽酸麻黃堿進樣質(zhì)量對峰面積作工作曲線,得鹽酸麻黃堿回歸方程:y= 2208553.65x+6008.65,r=0.9991,表明鹽酸麻黃堿在0.03984～0.3984μg范圍內(nèi)與峰面積成良好的線性關(guān)系。

2.3 正交實驗

采用L9(34)正交設(shè)計法進行實驗,考察影響提取效果的主要因素:水的用量、提取次數(shù)和提取時間,每個因素設(shè)置3個水平,見表1。

表1 麻桂抗感復(fù)方水提工藝條件考察因素水平表

2.4 實驗方法

按處方比例全方藥材,共9份,照正交表進行實驗,提取液濾過,合并濾液,測定體積,備用。

2.5 鹽酸麻黃堿的測定

2.5.1 麻黃藥材供試品溶液的制備:取本品細粉約0.2 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25 mL,稱定重量,超聲處理(功率160 W,頻率50 kHz)45 min,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過。精密量取續(xù)濾液1 mL,置中性氧化鋁柱(100～200目,1.5 g,內(nèi)徑1 cm)上,用50%甲醇洗脫,收集洗脫液約9 mL,置10 mL量瓶中,加磷酸1滴,用50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,精密吸取10μL,注入液相色譜儀,測定,即得。經(jīng)測定麻黃藥材中鹽酸麻黃堿的含量為1.18%。

2.5.2 復(fù)方供試品溶液制備:各精密量取2.4項下相當于0.5 g(僅提1次者取樣量為1.0 g)麻黃生藥的各提取液,60℃下減壓回收溶劑至約40 mL,加氨水調(diào)節(jié)pH至約11,加乙醚振搖提取5次(50、40、40、30和30 mL),合并乙醚提取液,加磷酸2滴,搖勻,于通風(fēng)櫥中揮干乙醚,殘渣用甲醇轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中并稀釋至刻度,搖勻,精密量取0.5～2mL量瓶中(提2次)或1～5 mL量瓶中(提1次和3次),加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

2.5.3 測定法:分別精密吸取麻黃藥材和復(fù)方供試品溶液各適量,按照上述色譜條件,注入液相色譜儀,測定,即得。

2.5.4 數(shù)據(jù)分析:按照上述正交實驗設(shè)計方案進行實驗,使用高效液相色譜法對鹽酸麻黃堿進行測定,對結(jié)果進行直觀分析和方差分析。

結(jié)果表明,提取次數(shù)(B)及提取時間(A)對鹽酸麻黃堿的提取效果有顯著性影響(P<0.05),且其各水平間差異均較顯著,都以選擇水平(3)即提取3次,時間為2 h、1.5 h、1.5 h為佳;而溶媒用量(C)對其影響較小,各水平間提取效果基本一致,從節(jié)省能源和利于后續(xù)的濃縮干燥工藝考慮宜選擇水平(1),即加8、4、4倍的水進行提取;故該工藝以A3B3C1即用8、4、4倍水提取3次,時間依次為2 h、1.5 h、1.5 h為佳。

2.6 驗證實驗

對所確定的A3B3C1的可靠性與重現(xiàn)性進行驗證;同時與理論最佳工藝即A3B3C3,加12、8、8倍的水提取3次,時間為2 h、1.5 h、1.5 h進行比較。開展實驗如下:

按處方比例稱取復(fù)方各藥材,3份,按上述所優(yōu)選出的最佳工藝條件煎煮即加8、4、4倍的水提取3次,提取時間為2 h、1.5 h、1.5 h;濾過,濾液合并,測定體積,備用。

另按上述方法稱取藥材,考察理論最大提取條件即加12、8、8倍的水提取3次,提取時間為2 h、1.5 h、1.5 h;濾過,濾液合并,測定體積,備用。

驗證實驗中鹽酸麻黃堿的平均保留率為68.27%,與理論最大值76.82%相差不大,且重復(fù)性良好,表明本實驗所確定的提取路線A3B3C1合理、可行。

3 討 論

麻桂抗感顆粒為臨床應(yīng)用多年的驗方,具有解表散寒、宣肺平喘之功效。麻黃為方中君藥,成分主要含有生物堿,尚有部分黃酮、揮發(fā)油等[5Ο6]。其中鹽酸麻黃堿是其主要藥效成分之一,故選為本實驗的考察指標成分。

本實驗通過正交試驗對麻桂抗感顆粒的提取工藝進行優(yōu)選,確定了最佳工藝,即加8、4、4倍的水提取3次,提取時間為2 h、1.5 h、1.5 h。按該工藝進行驗證實驗,結(jié)果鹽酸麻黃堿保留率高,重復(fù)性良好。

加大水的用量雖然能較小程度的提高提取液中鹽酸麻黃堿的保留率,但兩者相比并無顯著性差異,且由于鹽酸麻黃堿在高溫下容易揮發(fā),水用量的大幅度增加,將使后續(xù)的濃縮、干燥時間延長,可能對鹽酸麻黃堿的保留造成不良影響,又不利于節(jié)能[7Ο8]。故本實驗確定工藝條件如正文所述,驗證實驗證明所確定的工藝條件較為合理,易于操作。該實驗結(jié)果為后續(xù)生產(chǎn)的濃縮、干燥等進一步的研究提供了理論依據(jù),亦為復(fù)方中麻黃提取工藝的確定提供參考。

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1672Ο2353(2010)15Ο0100Ο02

2010-06-20