吳曉華，閆金輝，楊曉暉

（滄州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河北滄州 061001）

腦梗死發(fā)病與多種因素有關(guān)，由于缺血缺氧，腦組織產(chǎn)生一系列病理改變，引發(fā)“瀑布式”自由基連鎖反應(yīng)，產(chǎn)生大量自由基，造成廣泛且嚴(yán)重的生物膜脂質(zhì)過氧化，使膜通透性增加，結(jié)構(gòu)遭到破壞，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷。目前認(rèn)為自由基是參與腦缺血性損害發(fā)生的重要因素之一[1]。血管內(nèi)皮功能障礙是多種心腦血管疾病的共同病理機制，其突出表現(xiàn)為內(nèi)皮依賴性血管舒張功能障礙，主要由NO減少及氧自由基增加所致[2]。本文中筆者檢測急性腦梗死患者血漿一氧化氮（NO）及一氧化氮合成酶（NOS）含量的變化，進(jìn)一步了解NO及其合成酶在腦梗死急性期的變化規(guī)律，探討其對腦梗死發(fā)病過程的病理生理意義，有助于對腦梗死患者的診斷及康復(fù)治療。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本組患者均來自于河北省滄州市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科2009年3月4日～2010年2月2日的住院患者，且所有病例均經(jīng)過頭顱CT或MRI檢查確診，診斷符合全國第四次腦血管病會議標(biāo)準(zhǔn)。其中，腦梗死組患者42例，男28例，女14例；年齡最大78歲，最小45歲，平均（67±8）歲。對照組18例均為血站健康獻(xiàn)血員，其中，男7例，女11例；平均年齡（59±8）歲。所有腦梗死組患者的采血時間，最早為患者入院后第1天，最晚為入院后第24天，且均于清晨臥位時空腹抽取靜脈血2 ml，于24 h內(nèi)通過抗凝、3 000 r/min離心機離心15 min后提取血清，將每例患者血清均分裝于4個EP離心管中，封存于-80℃冰箱中成批備用。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑 采用上海7200型可見光分光光度計。NO和NOS試劑測定盒購于南京建成生物工程研究所。

1.2.2 檢測方法 嚴(yán)格按照試劑盒說明書中的操作程序進(jìn)行，為了避免反復(fù)凍融影響標(biāo)本質(zhì)量，筆者將NO、tNOS及i NOS所有指標(biāo)統(tǒng)一測定，并且采用編號雙盲的方法檢測所有標(biāo)本。按照試劑盒標(biāo)注方法配制各種試劑，配置及測定步驟嚴(yán)格按照操作規(guī)程完成，應(yīng)用分光光度儀550 nm，0.5 cm光徑，采用分光光度儀比色法檢測各管吸光度值。

1.2.3 計算方法 根據(jù)各測試管所測吸光度值，按說明書給出的計算公式計算NO、tNOS及iNOS的含量，結(jié)果分別以μmol/L、U/ml和 U/ml表示。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

腦梗死患者血清NO、NOS含量變化，見表1。與健康對照組比較，腦梗死組 NO 含量明顯降低（P＜0.05）；tNOS 及 iNOS 含量無顯著性差異（P＞0.05）。

表1 腦梗死患者血清NO、NOS含量變化（±s）Tab.1 Change of NO,NOS of the serum in the patients with cerebral infarction(±s)

表1 腦梗死患者血清NO、NOS含量變化（±s）Tab.1 Change of NO,NOS of the serum in the patients with cerebral infarction(±s)

與健康對照組比較，★P＜0.05，*P＞0.05 但有降低趨勢，△P＞0.05 但有上升趨勢

組別 NO（μmol/L） iNOS（U/ml）60.51±22.41★86.26±24.80腦梗死組健康對照組15.77±1.65△15.03±1.54 tNOS（U/ml）27.89±2.35*28.00±1.96

3 討論

自從NO被認(rèn)識以來，其在腦血管病發(fā)病中所起的作用一直是研究的重點。近來研究的結(jié)果有分歧，研究較為一致的觀點認(rèn)為NO是由NOS催化L-精氨酸生成的一種含氮化合物，可以使血管平滑肌松弛，且能抑制血小板聚集。大量研究表明，內(nèi)皮細(xì)胞可以在生理條件下不斷合成基礎(chǔ)量的NO，并不斷釋放以抑制血管對收縮因子的反應(yīng)，抑制血小板聚積和黏附，從而維持血管的舒張狀態(tài)，保持生理水平所需的腦血流量[3]，但產(chǎn)生過多或過少的NO都將導(dǎo)致腦組織的病理性損傷[4]。

NOS是合成NO的關(guān)鍵因素，在腦缺血中發(fā)揮神經(jīng)元保護(hù)和神經(jīng)毒性的雙重作用[5]。它有三種亞型，神經(jīng)元型（nNOS）、內(nèi)皮型（eNOS）、誘導(dǎo)型（iNOS），均已在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中得到實驗證實，神經(jīng)元型（nNOS）和內(nèi)皮細(xì)胞型（eNOS）在生理狀態(tài)下即有表達(dá)，統(tǒng)稱為原生型酶（cNOS）。有多種細(xì)胞可產(chǎn)生NOS。在腦缺血時eNOS活性升高，從而引起NO生成增多，致缺血區(qū)腦血管擴張，改善缺血區(qū)血供，對缺血腦組織起到保護(hù)作用。相反nNOS、iNOS在腦缺血后起損害作用，nNOS在腦缺血較早階段起損害作用，iNOS的損害作用發(fā)生在腦缺血稍后階段[6]。

腦梗死患者血清NO含量的改變，國內(nèi)報道不一。有研究表明，腦血管病急性期，腦組織缺血后可同時誘導(dǎo)內(nèi)皮性NOS和神經(jīng)元性NOS的表達(dá)及活性上調(diào)，并合成釋放大量的NO，致腦梗死急性期NO升高[7]。也有研究報道，腦梗死組患者血漿NO含量較健康對照組顯著降低，尤其在伴有高血壓的腦梗死患者中更為明顯[8]。本實驗研究顯示，腦梗死患者的血清NO含量顯著降低。急性腦血管病患者均具有不同程度的腦動脈血管硬化，其中部分患者還合并有高血壓疾病，這些患者的動脈內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷，合成和釋放的NO減少[9]。當(dāng)腦梗死急性發(fā)作時，大腦局部的組織出現(xiàn)缺血、缺氧及細(xì)胞腫脹，進(jìn)一步加重了顱內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，而缺氧不僅可直接抑制內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO，還可產(chǎn)生超氧化物等自由基使NO滅亡，從而導(dǎo)致NO的合成和釋放更進(jìn)一步減少，導(dǎo)致血管痙攣，加重了腦梗死。

本實驗顯示NOS含量變化不顯著，但是tNOS有降低趨勢、iNOS有上升趨勢。有報道提示，廣泛分布于腦組織中的NOS受到NO的負(fù)反饋調(diào)節(jié)[10]。當(dāng)NO含量降低時反饋性導(dǎo)致NOS的降低減緩或使其有所升高，但也有研究發(fā)現(xiàn)，在腦缺血亞急性期出現(xiàn)的炎性浸潤等改變可以激活iNOS，而產(chǎn)生大量的NO，并且可促使非毒性刺激因素（感染、血壓波動、脫水等）進(jìn)一步加重腦組織損傷[11]，而通過應(yīng)用iNOS抑制劑可阻斷NO介導(dǎo)的毒副作用。本研究顯示 NOS含量變化不明顯，也可能是因為觀察例數(shù)、時間限制所致。

有研究人員通過動物實驗發(fā)現(xiàn)，NO含量于腦缺血病灶處顯著增多，而多數(shù)報道表明，腦梗死患者腦脊液中的NO含量增多，血清中的NO含量減少[12]。本實驗結(jié)果提示，急性腦梗死患者的血清NO含量下降，可能是由于腦梗死發(fā)生時血管內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷，致cNOS的活力下降，導(dǎo)致NO生成和釋放減少。腦梗死形成過程中產(chǎn)生的大量氧自由基及超氧陰離子可與NO反應(yīng)，生成過氧亞硝酸陰離子，從而縮短NO的半衰期[4]，致使NO含量下降。

本實驗結(jié)果顯示，腦梗死患者血清NO含量明顯降低，NOS雖無顯著性改變，但tNOS有降低趨勢、iNOS有上升趨勢，提示NO及其酶含量的改變參與了腦梗死的病理生理改變過程，促進(jìn)了疾病的發(fā)生和發(fā)展。如果能把不同時期的含量變化規(guī)律進(jìn)一步明確，并分期研究，且采取不同措施給予治療，將會帶來重要的臨床意義。例如，已證實體內(nèi)NO生成不足或NO信號的傳導(dǎo)異常與腦血管等多種疾病的形成和發(fā)展關(guān)系密切，臨床就可以開展并設(shè)計NO供體型藥物的新藥研究[13]。其重要的臨床意義有待深入研究。

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