鄧武軍, 邢廷杰, 黃華南, 陳越華, 雷振東, 陳 劍,張美文, 李 波, 吳承和, 王 勇*

(1.中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所,長沙 410125; 2.中國科學(xué)院研究生院,北京 100049;3.湖南省益陽市大通湖區(qū)農(nóng)業(yè)水利局,413207; 4.湖南省農(nóng)業(yè)廳植保植檢站,長沙 410005)

東方田鼠(Microtus fortis)是洞庭湖地區(qū)的主要農(nóng)業(yè)害鼠之一[1-2],每年汛期受洪水脅迫由湖灘向堤垸內(nèi)遷移,途中大量啃食農(nóng)作物,破壞農(nóng)業(yè)生產(chǎn);同時(shí),東方田鼠也是鉤端螺旋體病、腎綜合征出血熱等疾病的重要媒介生物[3]。在該地區(qū)進(jìn)行的退田還湖以及平垸行洪等工程,大大擴(kuò)大了東方田鼠的棲息地[4],使東方田鼠繁殖期延長,給當(dāng)?shù)厥蠛Ψ乐螏砹艘欢ǖ睦щy。近年來,洞庭湖區(qū)東方田鼠種群數(shù)量和分布范圍仍有繼續(xù)擴(kuò)增趨勢,進(jìn)入新一輪暴發(fā)期。2005年和2007年的汛期,洞庭湖地區(qū)水位上漲,均暴發(fā)了罕見的特大規(guī)模鼠害[5-6],鼠害防控形勢嚴(yán)峻。

國內(nèi)抗凝血滅鼠劑敏感性研究[7-8]主要針對褐家鼠(Rattus norvegicus)、黃胸鼠(R.f lavipectus)和小家鼠(Mus musculus)等家棲鼠種,東方田鼠對抗凝血滅鼠劑敏感性研究僅見對殺鼠靈的報(bào)道[9]。抗凝血滅鼠劑在同一地區(qū)連續(xù)使用6～10年鼠類會產(chǎn)生不同程度的抗藥性[10],從而導(dǎo)致滅鼠效果下降。為預(yù)防和防治洞庭湖地區(qū)東方田鼠對第1代抗凝血滅鼠劑產(chǎn)生抗藥性,在使用第2代抗凝血滅鼠劑之前,有必要了解東方田鼠對其敏感性,為將來進(jìn)行抗藥性監(jiān)測提供科學(xué)依據(jù)。為此,作者于2007年8-10月測定了東方田鼠對溴敵隆的敏感性。

1 材料與方法

1.1 藥物來源及餌料配制

濃度為98%的溴敵隆原藥由農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所提供。市售新鮮面粉、玉米粉按1∶1混合作餌料。用精確度為0.0001 g的天平稱取原藥,并用二甲基甲酰胺完全溶解后,加乙醇稀釋,再按比例與水混合,倒入誘餌,并充分混合,平鋪于盤中,在60℃烘箱中烘干,即得0.0002%溴敵隆毒餌供試。

1.2 試鼠來源

試鼠捕自益陽市大通湖區(qū)北洲子鎮(zhèn)的防洪大堤護(hù)坡和湖灘。

1.3 試驗(yàn)方法

采用無選擇性攝食試驗(yàn)方法[7]。試鼠實(shí)驗(yàn)室內(nèi)適應(yīng)7 d以上,選擇成年(體重40 g以上)、健康、非孕、無外傷的個(gè)體,單籠飼養(yǎng)。試驗(yàn)前稱體重、鑒別雌雄、對應(yīng)鼠籠進(jìn)行編號并記錄。先供給無毒前餌2 d,每天稱消耗量并更換新餌,第2天食餌量少于全部試鼠平均攝食量1/5者淘汰。接著,按體重大小(雌雄分開)隨機(jī)分為5組,分別供給毒餌 1、2、4、6、8 d,每天稱消耗量并更換新餌,第1天吃毒餌太少(不及前1天誘餌消耗量的1/10)者淘汰。食毒期結(jié)束后,存活鼠移至干凈飼養(yǎng)籠正常飼養(yǎng)觀察,試驗(yàn)總期限(食毒期+觀察期)30 d。記錄出血日期、部位及死亡日期。將死亡鼠剖檢,既沒有外出血體征又沒有內(nèi)出血病變者淘汰。試驗(yàn)期產(chǎn)仔,以及既無出血體征又無內(nèi)出血病變者淘汰。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS軟件[11]進(jìn)行幾率單位加權(quán)回歸法(Bliss法)的計(jì)算,先將試鼠按性別分開計(jì)算食毒期與其對應(yīng)死亡率的關(guān)系,然后將性別之間對藥物的敏感性進(jìn)行檢驗(yàn),如果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義則雌雄數(shù)據(jù)合并,求得回歸方程和 LFP50、LFP98、LFP99及其95%置信限。

2 結(jié)果與分析

2.1 食毒期與對應(yīng)死亡率的關(guān)系

試鼠共89只,其中雌鼠46只,雄鼠43只,測定結(jié)果見表1。攻毒第2天開始出現(xiàn)死鼠,最后1只死于第19天,死亡高峰為開始攻毒后5～12 d。試驗(yàn)各分5個(gè)食毒期,最低食毒期 1 d,雌鼠死亡率為63.6%,雄鼠死亡率為50.0%;最高食毒期6 d,雌雄鼠死亡率均為100%。通過食毒期與其對應(yīng)死亡率之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,雌雄鼠對溴敵隆的敏感性無顯著差異(t＜t0.05,表2)。故將雌雄鼠數(shù)據(jù)合并,統(tǒng)計(jì)出敏感度基數(shù),得到LFP50、LFP98和 LFP99及其 95%置信限分別為0.94(0.43～1.33)、5.63(3.51～20.83)d和7.14(4.15～33.52)d(表3)。

表1 東方田鼠攝食不同時(shí)間0.0002%溴敵隆毒餌的試驗(yàn)結(jié)果

續(xù)表1

表2 東方田鼠對溴敵隆的敏感性比較1)

表3 東方田鼠對0.0002%溴敵隆毒餌的敏感度基數(shù)

2.2 個(gè)體差與敏感度

最敏感的個(gè)體是1 d食毒期組的雄鼠,體重47.1 g,食毒第2天死亡,致死劑量0.042 mg/kg;而最耐藥的個(gè)體是4 d食毒期組的雄鼠,體重51.2 g,存活劑量0.559 mg/kg,其劑量為前者的13.3倍。合計(jì)存活鼠平均攝藥劑量0.199 mg/kg;死亡鼠平均攝藥劑量0.558 mg/kg。雌鼠平均致死劑量0.556 mg/kg,雄鼠平均致死劑量0.560 mg/kg,兩者無顯著差異。

2.3 死亡時(shí)間

在89只試鼠中,死亡74只,存活15只,死亡時(shí)間為開始攻毒后2～19 d,死亡高峰時(shí)間為開始攻毒后5～12 d,平均死亡時(shí)間為開始攻毒后9.8 d,屬于抗凝血滅鼠劑的慢性中毒死亡時(shí)間范圍。其中雌鼠38只,平均死亡時(shí)間為開始攻毒后9.5 d;雄鼠36只,平均死亡時(shí)間為開始攻毒后10.1 d。

2.4 出血病變情況

死亡鼠全部進(jìn)行解剖,觀察出血病變情況,均符合抗凝血滅鼠劑的毒理作用。在死亡鼠中,少數(shù)個(gè)體出現(xiàn)外出血體征,多以口、鼻、耳等出血為主,眼、陰道、尿道、爪尖、肛門亦見。經(jīng)解剖觀察,內(nèi)出血癥狀多為心、肺、胸腔滲血或淤血,其次為肝臟淤血、缺血或青黑,胃、腸、消化道和腹腔出血等癥狀。個(gè)別鼠在試驗(yàn)期間曾有輕微中毒癥狀,但后來又恢復(fù)正常。

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明,洞庭湖區(qū)的東方田鼠對溴敵隆滅鼠劑十分敏感,用正常使用濃度(0.005%)1/25倍的毒餌LFP50為0.94 d,而 LFP99卻為 7.14 d,這是由于東方田鼠對溴敵隆敏感性的個(gè)體差異較大。從表3(LFP99以及95%置信限)可看出,按WHO新修訂為用LFP99取整天數(shù)作為抗藥性檢驗(yàn)食毒期[12],故本地區(qū)東方田鼠對0.0002%的溴敵隆毒餌食毒期超過8 d存活為產(chǎn)生抗藥。

溴敵隆雖然在全國許多地區(qū)使用,但只有少數(shù)地區(qū)作過敏感性本底資料的測定,全國范圍內(nèi)的抗藥性標(biāo)準(zhǔn)仍未制訂。敏感性本底調(diào)查要求在未使用或很少使用過該類滅鼠劑的地區(qū)捕鼠做試驗(yàn),如果一旦大量使用該類滅鼠劑,該地區(qū)的正常敏感性本底資料將丟失。故筆者于2007年8-10月在洞庭湖區(qū)益陽市大通湖區(qū)北洲子鎮(zhèn)的防洪大堤護(hù)坡和湖灘捕捉東方田鼠進(jìn)行敏感性測定,以期對該藥物的抗藥性標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

根據(jù)WHO推薦的方法,我國對第1代抗凝血滅鼠劑已有了統(tǒng)一的抗性監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)[7,12],黑線姬鼠和長爪沙鼠攝食0.005%殺鼠靈毒餌分別13 d和11 d存活,灰倉鼠和大足鼠攝食0.025%殺鼠靈毒餌分別為29 d和7 d存活為抗性鼠。但有關(guān)第2代抗凝血滅鼠劑的抗藥性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)尚未統(tǒng)一。有待今后繼續(xù)開展本地區(qū)的敏感性本底調(diào)查。丹麥以小家鼠攝食0.01%溴敵隆毒餌19 d存活視為抗性鼠[13]。姚丹丹等[14]認(rèn)為黃胸鼠攝食0.0002%溴敵隆毒餌8 d存活為抗性鼠。本研究測定東方田鼠對溴敵隆的敏感性本底水平,國內(nèi)尚未見有關(guān)報(bào)道,這可為今后進(jìn)行東方田鼠對溴敵隆滅鼠劑的抗藥性監(jiān)測以及建立第2代抗凝血滅鼠劑的抗藥性標(biāo)準(zhǔn)提供參數(shù)。本試驗(yàn)的開展還能為今后控制和防治洞庭湖區(qū)東方田鼠大規(guī)模暴發(fā)提供科學(xué)指導(dǎo)。

[1] 王勇,王克林,張美文,等.洞庭湖區(qū)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)格局及措施對農(nóng)田害鼠種群數(shù)量的影響研究[J].中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2005,13(1):148-151.

[2] 陳安國,郭聰,王勇,等.洞庭湖區(qū)東方田鼠種群特性和成災(zāi)原因研究[M]∥中國獸類生物學(xué)研究.北京:中國林業(yè)出版社,1995:31-38.

[3] 李波,張美文,王勇,等.東方田鼠首次在城市為害調(diào)查[J].中國人獸共患病雜志,2005,21(5):437-439.

[4] 張美文.洞庭湖區(qū)退田還湖工程對小型獸類群落的影響[D].長沙:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué),2006.

[5] 張美文,李波,王勇.洞庭湖區(qū)東方田鼠2007年暴發(fā)成災(zāi)的原因剖析[J].農(nóng)業(yè)現(xiàn)代化研究,2007,28(5):601-605.

[6] 李波,王勇,張美文,等.洞庭湖區(qū)東方田鼠種群數(shù)量預(yù)警[J].植物保護(hù),2007,33(2):134-136.

[7] 董天義.抗凝血滅鼠劑應(yīng)用研究[M].北京:中國科學(xué)技術(shù)出版社,2001:1-46.

[8] 董天義,閻丙申.3種新抗凝血?jiǎng)┒攫D防制家棲鼠實(shí)驗(yàn)室效果評價(jià)[J].醫(yī)學(xué)動物防制,2004,20(6):333-337.

[9] 陳劍,張美文,黃華南,等.東方田鼠對殺鼠靈的敏感性測定[J].中國媒介生物學(xué)及控制雜志,2008,19(2):87-89.

[10] Lund M.Rodent resistance to the anticoagulant rodenticides,with particular reference to Denmark[J].Bull World Health Orgen,1972,47(5):611-618.

[11]SPSS Inc.SPSS 10.0 for windows[M].SPSS Inc.USA.1999.

[12]鼠類抗藥性監(jiān)測協(xié)作組.家棲鼠對抗凝血滅鼠劑抗藥性檢驗(yàn)方法[J].中國媒介生物學(xué)及控制雜志,1991,2(5):339-340.

[13]Misenheimer T M,Lund M,Baker E M,et al.Biochemica1 basis of warfarin and bromadiolone resistance in the house mouse Mus musculus domesticus[J].Biochem Pharmalol,1994,47(4):673-678.

[14]姚丹丹,梁練,胡杰,等.湛江地區(qū)黃毛鼠對溴敵隆的敏感性研究[J].中國媒介生物學(xué)及控制雜志,2008,19(1):1-3.