滑峰 王競(jìng) 谷俊東 李書軍 劉紅雨 周清華

肺癌是目前在全球范圍內(nèi)對(duì)人類健康威脅最大的惡性腫瘤之一，關(guān)于肺癌的基礎(chǔ)及臨床研究已經(jīng)成為腫瘤研究領(lǐng)域的重要內(nèi)容[1,2]。對(duì)肺癌病因的研究已經(jīng)明確，腫瘤易感性的不同是影響人群患病率的重要因素，因而對(duì)肺癌易感性的研究是當(dāng)前肺癌研究領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)，主要研究方向是單核苷酸多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系的研究[3]。人髓過氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）是一種I相代謝酶，廣泛存在于肺巨噬細(xì)胞內(nèi)，具有代謝煙草中的多環(huán)芳烴的作用，因此被認(rèn)為與肺癌的易感性有關(guān)[4,5]。London[6]于1997年報(bào)告了關(guān)于MPO G-463A位點(diǎn)與肺癌易感性關(guān)系的研究后，近十余年先后有近30余位研究者報(bào)告了這一位點(diǎn)與肺癌易感性的關(guān)系的研究，但結(jié)果存有爭(zhēng)議，而且研究人群、樣本量、研究方法不一致。本研究采用meta分析的方法對(duì)已發(fā)表的研究結(jié)果進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，以進(jìn)一步評(píng)價(jià)MPO-463位點(diǎn)多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索 檢索中國(guó)學(xué)術(shù)期刊網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫(kù)（CNKI）、萬方數(shù)據(jù)庫(kù)、維普數(shù)據(jù)庫(kù)、Pubmed、Ovid、Elsevier數(shù)據(jù)庫(kù)，收集國(guó)內(nèi)外公開發(fā)表的“關(guān)于MPO-463位點(diǎn)多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系”的獨(dú)立病例對(duì)照研究，中文文獻(xiàn)檢索詞為：“髓過氧化物酶”、“MPO”、“myeloperoxidase”、“肺癌”、“肺腫瘤”，分別作為關(guān)鍵詞、自由詞、主題詞進(jìn)行檢索；英文文獻(xiàn)檢索詞為：“MPO”“myeloperoxidase”、“l(fā)ung cancer”、“l(fā)ung neoplasm”，分別作為主題詞、自由詞進(jìn)行檢索。為盡量避免漏查文獻(xiàn)，對(duì)所有檢索文獻(xiàn)中提供的參考文獻(xiàn)進(jìn)行二次檢索，相關(guān)綜述文章、有關(guān)會(huì)議的摘要均被檢索，以發(fā)現(xiàn)可能的合格研究。以上檢索工作由3個(gè)研究者獨(dú)立完成，文獻(xiàn)檢索截止日期為2009年11月18日。

1.2 文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn) ①研究方法符合流行病學(xué)要求；②基因分型方法可信；③文獻(xiàn)提供基因型頻數(shù)、比值比（odds ratio, OR）及95%CI；④研究人群為高加索人群及東亞人群。

1.3 文獻(xiàn)剔除標(biāo)準(zhǔn) ①研究方法不符合流行病學(xué)要求；②基因分型技術(shù)不可信，研究質(zhì)量較差；③重復(fù)研究人群資料；④不能提供原始數(shù)據(jù)資料；⑤其他研究人群。

1.4 數(shù)據(jù)提取 3個(gè)研究者獨(dú)立提取納入的每個(gè)研究的相關(guān)數(shù)據(jù)，如有異議，與第4個(gè)研究者協(xié)商解決，然后匯總數(shù)據(jù)，提取以下內(nèi)容：①文獻(xiàn)作者、研究對(duì)象國(guó)家和種族背景、發(fā)表年代和雜志名稱；②納入研究總的例數(shù)，病例和對(duì)照組研究對(duì)象的定義和特點(diǎn)；③病例和對(duì)照組的等位基因和基因型的分布情況；④基因分析樣本來源和采用的方法；⑤病例和對(duì)照組研究對(duì)象是否符合Hardy-Weinberg遺傳平衡。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 按照meta分析的要求整理原始文獻(xiàn)并摘錄數(shù)據(jù)，對(duì)各研究的基因分布進(jìn)行Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)。由于部分研究?jī)H提供了GG、AG+AA兩種基因型分布的頻數(shù)，而且AA型在人群中的比例很低，本研究只進(jìn)行了AA+AG/GG兩種基因型比較的系統(tǒng)評(píng)價(jià)。應(yīng)用統(tǒng)計(jì)分析軟件Review manager 4.2分析AA+AG/GG的OR值及95%可信區(qū)間（95% confidence interval, 95%CI），繪制OR值分布圖。對(duì)所得的OR值取自然對(duì)數(shù)In（OR），進(jìn)行齊性檢驗(yàn)，根據(jù)一致性結(jié)果選擇相應(yīng)的數(shù)據(jù)合并方法。若各研究結(jié)果間無異質(zhì)性，則采用Mantel-Haenszel固定效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并，計(jì)算合并OR及95%CI；若結(jié)果間存在異質(zhì)性，則選用Dersimonian-Laird隨機(jī)效應(yīng)模型計(jì)算。進(jìn)行敏感性分析，繪制漏斗圖并采用Egger法對(duì)發(fā)表結(jié)果是否偏倚進(jìn)行評(píng)估。

2 結(jié)果

2.1 納入分析研究的一般資料 根據(jù)文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)，共納入文獻(xiàn)20篇，其中來自歐洲高加索人群報(bào)道13篇，中國(guó)人群報(bào)道3篇，韓國(guó)人群3篇，日本及高加索人群混合研究1篇，納入文獻(xiàn)的發(fā)表時(shí)間為1997年-2008年，病例診斷均符合WHO標(biāo)準(zhǔn)，基因分型均使用公認(rèn)的、科學(xué)的檢測(cè)方法。14項(xiàng)研究進(jìn)行了性別配對(duì)，16項(xiàng)進(jìn)行了年齡配對(duì)。一般資料見表1。

2.2 高加索人群MPO G-463A與肺癌關(guān)聯(lián)性分析

2.2.1 meta分析結(jié)果 納入數(shù)據(jù)的歐洲高加索人群13項(xiàng)研究累計(jì)病例5 381例，對(duì)照5 827例。通過對(duì)各研究的AA+AG/GG結(jié)果的異質(zhì)性檢驗(yàn)，得χ2值為25.17（P=0.02），認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行分析得合并OR值為0.91（95%CI: 0.81-1.02），z值為1.68（圖1）。

2.2.2 敏感性分析 換用固定效應(yīng)模型，改用統(tǒng)計(jì)效應(yīng)指標(biāo)為Peto odds ratio，合并OR值未見明顯改變，剔除樣本量最大的Xu等[15]的研究后，計(jì)算合并OR值未見明顯改變，提示結(jié)果穩(wěn)定。

2.2.3 發(fā)表偏倚的評(píng)估 發(fā)表偏倚評(píng)估所得漏斗圖的圖形對(duì)稱性差，應(yīng)用SAS程序擬合Egger檢驗(yàn)，提示有發(fā)表偏倚（t=2.67, P=0.02）（圖2）。

2.3 東亞人群MPO G-463A與肺癌關(guān)聯(lián)性分析

2.3.1 meta分析結(jié)果 納入數(shù)據(jù)的亞洲人群7項(xiàng)研究累計(jì)病例1 558例，對(duì)照1 755例。通過對(duì)各研究的AA+AG/GG結(jié)果的異質(zhì)性檢驗(yàn)，得 值為14.83（P=0.02），認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行分析得合并OR值為0.83（95%CI: 0.63-1.09），z值為1.35（圖3）。

2.3.2 敏感性分析 改用固定效應(yīng)模型計(jì)算，合并OR值為0.82，未見明顯改變，改用統(tǒng)計(jì)效應(yīng)指標(biāo)為Peto odds ratio,合并OR值未見明顯改變，剔除樣本量最大的Park等[10]的研究后，計(jì)算合并OR值未見明顯改變，提示結(jié)果穩(wěn)定。2.3.3 發(fā)表偏倚的評(píng)估 發(fā)表偏倚評(píng)估所得漏斗圖的圖形基本對(duì)稱，應(yīng)用SAS程序擬合Egger檢驗(yàn)，未見明顯發(fā)表偏倚（t=-0.39, P=0.71）（圖4）。

表 1 納入分析的20項(xiàng)研究一般資料Tab 1 The characteristic of the studies included

圖 1 高加索人群MPO G-463A與肺癌關(guān)聯(lián)性分析森林圖Fig 1 The forest plot of the meta analysis for the Caucasians

圖 2 高加索人群MPO G-463A與肺癌關(guān)聯(lián)性分析漏斗圖Fig 2 The funnel plot of the meta analysis for the Caucasians

圖 3 東亞人群MPO G-463A與肺癌關(guān)聯(lián)性分析森林圖Fig 3 The forest plot of the meta analysis for East Asians

圖 4 東亞人群MPO G-463A與肺癌關(guān)聯(lián)性分析漏斗圖Fig 4 The funnel plot of the meta analysis for the East Asians

3 討論

考慮到MPO G-463A在不同種族的差異分布（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp ref.cgi?rs=2333227），本研究只收集以歐洲高加索人群及東亞中日韓人群為研究對(duì)象的文獻(xiàn)進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，檢索到符合要求的文獻(xiàn)28篇。其中重復(fù)報(bào)道文獻(xiàn)3篇，2篇沒有提供詳細(xì)基因頻數(shù)，2篇為系統(tǒng)評(píng)價(jià)，1篇研究質(zhì)量較差，予以剔除。共計(jì)納入研究文獻(xiàn)20篇，其中高加索人群研究13篇，東亞人群研究6篇，1篇研究人群為高加索及日本人群[12]。分析各個(gè)獨(dú)立研究樣本人群的流行病學(xué)資料，可以看到納入研究人群的性別、年齡、地域、吸煙狀況、飲食習(xí)慣、職業(yè)暴露、肺癌病理類型等具有明顯差異性，其中11項(xiàng)研究[6,7,11-14,20,22,24,25]的病例樣本量小于300，距離遺傳關(guān)聯(lián)性研究對(duì)樣本量的要求有一定差距，因此單個(gè)獨(dú)立研究所得到的結(jié)果有可能會(huì)是假陽性或者假陰性。對(duì)兩種人群發(fā)表偏倚的評(píng)價(jià)，從所作出的漏斗圖形態(tài)及參考Egger法所計(jì)算出的t值，認(rèn)為在高加索人群研究中有發(fā)表偏倚，但不明顯，在東亞人群研究中沒有偏倚。由于部分文獻(xiàn)只給出了AG+AA基因型的頻數(shù)，而且AA為少見基因型，本研究以AA+AG/GG的合并OR值為效應(yīng)指標(biāo)。

對(duì)高加索人群的分析，采用固定效應(yīng)模型計(jì)算得到的合并OR值為0.94（95%CI: 0.87-1.02），異質(zhì)性檢驗(yàn)P值為0.02，改用隨機(jī)效應(yīng)模型，計(jì)算合并OR值為0.91（95%CI: 0.81-1.02），由于部分進(jìn)行亞組人群分析的研究分類標(biāo)準(zhǔn)不一致，無法進(jìn)行亞組人群的meta分析。剔除樣本量最大的Xu等[15]的研究，結(jié)果無明顯改變，提示敏感性分析得到的結(jié)果是穩(wěn)定的。對(duì)東亞人群的分析，采用固定效應(yīng)模型計(jì)算得到的合并OR值為0.82（95%CI:0.70-0.97），異質(zhì)性檢驗(yàn)P值為0.02，改用隨機(jī)效應(yīng)模型，計(jì)算合并OR值為0.83（95%CI: 0.63-1.09）。有3篇文獻(xiàn)進(jìn)行了亞組分析，但分組不同，而且樣本量有限，所以未進(jìn)行亞組人群的meta分析。剔除樣本量最大的Park[10]的研究，結(jié)果無明顯改變，提示敏感性分析的到的結(jié)果是穩(wěn)定的。

Taioli等[14,26,27]對(duì)這一問題先后做了系統(tǒng)評(píng)價(jià)。其中Feyler于2002年第一次做了meta分析，對(duì)高加索人群分析計(jì)算的結(jié)果是0.82（95%CI: 0.66-1.02），共納入研究6篇。Kiyohara僅僅計(jì)算了AA基因型的合并OR值為0.70。Taioli進(jìn)一步研究了此問題，對(duì)納入的15篇文獻(xiàn)進(jìn)行meta分析計(jì)算的合并OR值為0.91（95%CI: 0.84-0.99），研究人群主要為高加索人群。他利用其中的10篇文獻(xiàn)[6,12-14,16,18-20,22,28]進(jìn)行的pooled analysis得出的AG基因型OR值為0.88（95%CI: 0.80-0.97），AA基因型的合并OR值為0.71（95%CI: 0.57-0.88），但人群為混合人群，而且其中有2篇文獻(xiàn)[13,20]采用的數(shù)據(jù)與公開發(fā)表文獻(xiàn)上的數(shù)據(jù)有差異?？偟膩碚f，這些研究的結(jié)果與我們是一致的。

髓過氧化物酶是一種糖蛋白，主要存在于白細(xì)胞中，大量的體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以及以人體為對(duì)象的實(shí)驗(yàn)研究提示髓過氧化物酶的異質(zhì)性可能與肺癌易感性具有潛在的關(guān)聯(lián)[29-31]。通過對(duì)已發(fā)表文獻(xiàn)的系統(tǒng)評(píng)價(jià)，我們認(rèn)為髓過氧化物酶基因G-463A位點(diǎn)兩種基因型在肺癌人群中分布具有差異性，但在總體人群中的潛在作用是微弱的，對(duì)單個(gè)基因多態(tài)性的研究，意義是十分有限的。