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        致康膠囊對體內(nèi)血栓形成的影響

        2010-09-10 05:13:06李越劉夢潔劉靜解恩義曹永孝西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系西安市710061
        中國藥房 2010年39期
        關(guān)鍵詞:小鼠影響模型

        李越,劉夢潔,劉靜,解恩義,曹永孝(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系,西安市 710061)

        致康膠囊對體內(nèi)血栓形成的影響

        李越*,劉夢潔,劉靜,解恩義,曹永孝#(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系,西安市 710061)

        目的:研究致康膠囊對體內(nèi)血栓形成的影響。方法:用角叉菜膠生理鹽水溶液復(fù)制小鼠尾靜脈血栓形成模型,用膠原蛋白-腎上腺素誘導(dǎo)小鼠腦血栓形成模型。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)分為生理鹽水、凝血酶和致康膠囊高、低劑量組。與生理鹽水組比較,致康膠囊高、低劑量組的血栓發(fā)生率無顯著差異;與生理鹽水組比較,致康膠囊高、低劑量組小鼠死亡率無顯著差異。結(jié)論:致康膠囊不增加體內(nèi)血栓形成。

        致康膠囊;血栓形成;小鼠

        *碩士研究生。研究方向:藥理學(xué)。電話:029-82655140。E-mail:liyue.0105@spu.xjtu.edu.cn

        #通訊作者:教授,博士。研究方向:新藥藥理評價(jià)。電話:029-82655140。E-mail:yxy@xjtu.edu.cn

        致康膠囊由大黃、黃連、三七、白芷、阿膠、龍骨、白及、沒藥、海螵蛸、茜草、龍血竭、甘草、珍珠、冰片、淀粉組成,具有清熱涼血、化瘀止血的功能,主要用于崩漏、嘔血及便血等的治療[1,2]。雖然臨床上并未見其增加血栓形成的不良反應(yīng),但缺乏相關(guān)的實(shí)驗(yàn)資料。本實(shí)驗(yàn)用小鼠尾靜脈血栓形成模型和小鼠腦血栓形成模型研究致康膠囊對體內(nèi)血栓形成的影響,以為其提供理論依據(jù)。

        1 儀器與材料

        1.1 儀器

        TGL-20B-C型高速臺式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);ALT04型分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)。

        1.2 試藥

        致康膠囊(西安千禾有限責(zé)任公司,批號:20090615);凝血酶凍干粉(長春國奧藥業(yè)有限公司,批號:20071203);Ⅰ型膠原蛋白(瑞典Wolsen公司,批號:G9879);鹽酸腎上腺素注射液(上海禾豐制藥有限公司,批號:090903);角叉菜膠(美國Sigma公司)。

        1.3 動物

        ICR小鼠,♀♂兼用,體質(zhì)量20~24 g,由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供(實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號:SYXK(陜)2007-003)。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 致康膠囊對角叉菜膠引起小鼠尾靜脈血栓形成的影響

        ♂小鼠48只,隨機(jī)分為4組,即生理鹽水、凝血酶(150 IU·kg-1)和致康膠囊高、低劑量(1.5、0.5 g·kg-1)組。生理鹽水和致康膠囊高、低劑量組ig給藥,每天1次,連續(xù)7 d;凝血酶組第5天尾iv給藥。第6天,給各組小鼠腰背部sc 1%的角叉菜膠生理鹽水溶液20 mL·kg-1[3]。觀察注射角叉菜膠復(fù)制模型后72 h內(nèi)各組小鼠血栓的情況,計(jì)算血栓發(fā)生率(發(fā)生血栓的鼠數(shù)/組內(nèi)動物數(shù)×100%)。測量發(fā)生血栓鼠鼠尾形成血栓的長度,計(jì)算血栓長度占整個鼠尾的百分比。結(jié)果表明,生理鹽水組的血栓發(fā)生率為50%,凝血酶組的血栓發(fā)生率高于生理鹽水組(P<0.05),而致康膠囊高、低劑量組的血栓發(fā)生率與生理鹽水組比較無顯著差異(P>0.05)。凝血酶組形成的血栓長度及其與鼠尾長度的比值與生理鹽水組比較有增高趨勢,但無顯著差異(P>0.05),而致康膠囊高、低劑量組的血栓長度及其與鼠尾長度的比值與生理鹽水組相當(dāng)。致康膠囊對角叉菜膠血栓模型小鼠鼠尾血栓發(fā)生率的影響見表1;對小鼠血栓長度的影響見表2;對小鼠尾血栓長度與鼠尾長度比的影響見表3。

        表1 致康膠囊對角叉菜膠血栓模型小鼠鼠尾血栓發(fā)生率的影響Tab 1 Effect of Zhikang capsule on the formation rate of caudal venous thrombosis model induced by carrageenan in mice

        2.2 致康膠囊對膠原蛋白-腎上腺素誘導(dǎo)小鼠腦血栓形成的影響

        表2 致康膠囊對角叉菜膠血栓模型小鼠血栓長度的影響(±s,n=12)Tab 2 Effect of Zhikang capsule on the length of thrombosis in thrombosis model mice induced by carrageenan(±s,n=12)

        表2 致康膠囊對角叉菜膠血栓模型小鼠血栓長度的影響(±s,n=12)Tab 2 Effect of Zhikang capsule on the length of thrombosis in thrombosis model mice induced by carrageenan(±s,n=12)

        組別生理鹽水組凝血酶組致康膠囊高劑量組致康膠囊低劑量組尾長/cm 8.6±0.4 8.6±0.4 8.3±0.5 8.6±0.5復(fù)制模型后不同時間體內(nèi)血栓長度/cm 20 h 0.9±0.6 1.2±0.8 0.8±0.3 0.9±0.3 24 h 1.3±0.8 1.5±0.7 0.9±0.2 1.4±0.7 40 h 1.4±0.6 1.7±0.6 1.3±0.5 1.5±0.6 48 h 1.5±0.7 1.8±0.6 1.6±0.7 1.6±0.4 72 h 1.5±0.6 1.7±0.5 1.3±0.6 1.2±0.4

        表3 致康膠囊對角叉菜膠小鼠血栓模型小鼠尾血栓長度與鼠尾長度比的影響(±s,n=12)Tab 3 Effect of Zhikang capsule on the length ratio of thrombosis to tail in thrombosis model mice induced by carrageena(±s,n=12)

        表3 致康膠囊對角叉菜膠小鼠血栓模型小鼠尾血栓長度與鼠尾長度比的影響(±s,n=12)Tab 3 Effect of Zhikang capsule on the length ratio of thrombosis to tail in thrombosis model mice induced by carrageena(±s,n=12)

        組別生理鹽水組凝血酶組致康膠囊高劑量組致康膠囊低劑量組尾長/cm 8.6±0.4 8.6±0.4 8.3±0.5 8.6±0.5造模后不同時間鼠尾血栓長度與鼠尾長比值/%20 h 10.7±6.5 13.8±8.6 9.6±3.0 10.2±3.2 24 h 14.7±8.4 17.8±8.2 10.8±2.6 16.4±8.6 40 h 16.4±7.7 19.8±7.8 15.9±5.9 16.9±7.7 48 h 17.1±9.0 21.0±7.2 18.6±8.0 18.8±5.0 72 h 17.9±6.6 19.4±6.1 15.6±6.5 14.9±5.7

        2.2.1 腦血栓形成誘導(dǎo)劑制備:稱取膠原蛋白60 mg,浸泡于10 mL生理鹽水中過夜,8 000 r·min-1勻漿2 min后加生理鹽水至40 mL,3 000 r·min-1離心10 min,取上清液。另取濃度為1 mg·mL-1的鹽酸腎上腺素2支加入上述上清液中,加生理鹽水至50 mL,備用。

        2.2.2 分組、給藥、指標(biāo)測定:分組及給藥同“2.1”項(xiàng)下方法操作。生理鹽水和致康膠囊高、低劑量組ig給藥,每天1次,連續(xù)7 d;凝血酶組第6天尾iv給藥,150 IU·kg-1。末次給藥30 min后每只大鼠尾iv血栓形成誘導(dǎo)劑(膠原蛋白480 μg、腎上腺素16 μg)[4],20 s注射完,觀察小鼠反應(yīng)。1~15 min后可見小鼠四肢麻痹、癱瘓或死亡。15 min內(nèi)四肢麻痹未恢復(fù)者為麻痹陽性。觀察注入誘導(dǎo)劑后動物的麻痹、癱瘓或死亡數(shù),以癱瘓或死亡率的百分率表示,計(jì)算藥物對小鼠血栓形成的作用。各組麻痹、癱瘓的小鼠數(shù)及百分率之間無顯著性差異。凝血酶組的死亡率顯著高于生理鹽水組(P<0.05),而致康膠囊高、低劑量組的死亡率與生理鹽水組比較無顯著差異(P>0.05)。致康膠囊對膠原蛋白-腎上腺素誘導(dǎo)小鼠腦血栓形成的影響見表4。

        表4 致康膠囊對膠原蛋白-腎上腺素誘導(dǎo)小鼠腦血栓形成的影響Tab 4 Effect of Zhikang capsule on the formation of cerebral thrombosis in mice induced by collagen-adrenaline

        3 討論

        致康膠囊具有清熱涼血、化瘀止血的功能,主要用于崩漏、嘔血及便血等的治療。致康膠囊治療Ⅰ、Ⅱ度內(nèi)痔出血效果滿意[5]。其聯(lián)合蒙脫石散劑治療42例上消化道出血,能明顯縮短嘔血停止時間和大便潛血轉(zhuǎn)陰時間[2]。治療人工流產(chǎn)術(shù)后500例,能縮短陰道出血時間、減少出血量、減輕腹痛、防止感染以及促進(jìn)月經(jīng)周期恢復(fù)[6];對放置宮內(nèi)節(jié)育器后引起的陰道出血、藥物流產(chǎn)后出血和有良好的治療效果[1,3,7]。致康膠囊治療宮頸糜爛后陰道出血療效顯著[8];對腎挫裂傷有迅速止血和明顯促進(jìn)愈合作用[9];對應(yīng)激性潰瘍出血、急診創(chuàng)傷出血有明顯的止血作用[1,10]。

        促進(jìn)血栓形成是止血藥首先應(yīng)考慮的不良反應(yīng),臨床上雖然未見致康膠囊促進(jìn)血栓形成的報(bào)道,但仍缺乏實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)也在正常小鼠腰背部sc角又菜膠溶液,小鼠尾尖出現(xiàn)暗紅色血栓形成區(qū),逐漸向尾根部擴(kuò)大到一定范圍,48~72 h后,經(jīng)紫色變?yōu)楹谏?,與正常尾部分界明顯,可根據(jù)尾部皮膚顏色判定血栓出現(xiàn)率和平均長度。隨后血栓形成區(qū)逐漸萎縮,最終自行脫落。本研究表明,凝血酶能增加角又菜膠致小鼠尾部血栓發(fā)生率,而致康膠囊對角又菜膠引起的小鼠尾部血栓形成無明顯影響。尾iv血栓形成誘導(dǎo)劑后,腦內(nèi)形成血栓后引起小鼠癱瘓或死亡。凝血酶能增加血栓誘導(dǎo)劑導(dǎo)致的小鼠腦(心)血栓形成,提高死亡率,而致康膠囊對誘導(dǎo)劑導(dǎo)致的小鼠腦(心)血栓形成及死亡無明顯影響。本研究表明,致康膠囊對小鼠尾靜脈血栓形成模型和小鼠腦血栓形成模型并未見明顯影響。致康膠囊每粒0.3 g,人口服1次2~4 g,1日3次,按60 kg體質(zhì)量計(jì)算,平均日劑量0.045 g·kg-1。本研究所用致康膠囊的劑量0.5~1.5 g·kg-1,是人劑量的11~33倍,因此推測致康膠囊不會促進(jìn)人體內(nèi)的血栓形成。

        藥理學(xué)研究表明,致康膠囊的止血功能主要是刺激局部血管收縮,顯著減少出血量;縮短血漿復(fù)鈣時間和凝血酶原時間,延長優(yōu)球蛋白溶解時間;促進(jìn)組織修復(fù),升高創(chuàng)面中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、堿性成纖維細(xì)胞生長因子、纖維連接蛋白的含量。能增加血小板的數(shù)量,但血小板的數(shù)量仍在正常值范圍內(nèi)。致康膠囊有活血化瘀作用。由于在出血情況下,機(jī)體正在調(diào)動全身的凝血系統(tǒng),在致康膠囊的促進(jìn)下,使凝血系統(tǒng)發(fā)揮作用,產(chǎn)生止血作用。體內(nèi)的凝血系統(tǒng)和抗凝系統(tǒng)處在動態(tài)平衡中,在出血的情況下,凝血系統(tǒng)的功能傾向于加強(qiáng),而抗凝系統(tǒng)的功能傾向于減弱,此時致康膠囊容易產(chǎn)生促進(jìn)凝血止血作用;而當(dāng)體內(nèi)的凝血功能增強(qiáng),傾向于形成血栓時,體內(nèi)的凝血系統(tǒng)功能必然受到抑制,而致康膠囊的促進(jìn)凝血作用不易發(fā)揮,因而很難形成血栓。

        [1]于兆安,于首元.致康膠囊和西咪替丁治療應(yīng)激性潰瘍出血的臨床觀察[J].中國醫(yī)藥,2009,4(12):979.

        [2]謝志翔,梁志明,熊銘知.致康膠囊聯(lián)合蒙脫石散劑治療上消化道出血42例療效觀察[J].吉林醫(yī)學(xué),2009,30(1):56.

        [3]唐 菲,王 豪,劉維俊.氫溴酸檳榔堿抗血栓作用[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2009,29(5):791.

        [4]劉曉婷,藺新英.豆豉激酶對實(shí)驗(yàn)性小鼠體內(nèi)血栓形成的影響[J].食品與藥品,2006,8(6):39.

        [5]劉繼永,陶愛明.致康膠囊治療內(nèi)痔出血的臨床療效觀察[J].臨床軍醫(yī)雜志,2009,37(3):422.

        [6]趙桂芳.致康膠囊用于人工流產(chǎn)后的療效觀察[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2008,17(9):1 324.

        [7]林偉平,蔣盈盈,沈景豐.致康膠囊對放置宮內(nèi)節(jié)育器后陰道出血的影響[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2008,17(11):1 662.

        [8]吳益鳴.致康膠囊用于微波治療宮頸糜爛后陰道流血[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2008,17(9):1 342.

        [9]任連成.致康膠囊治療腎挫裂傷出血36例療效觀察[J].中國基層醫(yī)藥,2005,12(10):1 404.

        [10]周有生,張進(jìn)祥,汪 洋,等.致康膠囊治療急診創(chuàng)傷出血的臨床療效觀察[J].中國藥業(yè),2001,10(7):54.

        Effect of Zhikang Capsules on Thrombosis in Vivo

        LI Yue,LIU Meng-jie,LIU Jing,XIE En-yi,CAO Yong-xiao(Dept.of Pharmacology,College of Medicine,Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710061,China)

        OBJECTIVE:To study the effect of Zhikang capsules on thrombosis in vivo.METHODS:The mice caudal venous thrombosis model and cerebral thrombosis model were induced by carrageenan normal saline solution and collagen-adrenalin,respectively.RESULTS:Model mice were divided into NS group,thrombin group and Zhikang caupsule high-do-se and low-dose groups.Compared with NS group,the incidence of mice caudal venous thrombosis in Zhikang capsules high-dose and low-dose groups was not significant difference.Compared with NS group,mortality of model mice in Zhikang capsule high-dose and low-dose groups was not significant difference.CONCLUSION:Zhikang capsule doesn’t induce thrombosis in vivo.

        Zhikang capsule;Formation of thrombosis;Mice

        R285.5;R97

        A

        1001-0408(2010)39-3675-03

        2009-11-17

        2010-03-18)

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