高立金 郭志鵬

（1、廊坊市藥品檢驗(yàn)所，河北 廊坊 065000 2、新興鑄管公司職工醫(yī)院，河北 武安 056300）

柴黃升板顆粒是由黃芩、大黃、赤芍、羚羊角等13 味中藥制成的制劑，具有舒肝清熱，涼血止血之功效。用于肝膽火旺所致的肌膚發(fā)斑或齒鼻衄，低熱盜汗，口苦咽干，手足心熱，舌紅苔黃，血小板減少性紫癜等疾患。其黃芩具有較好的清熱燥濕，瀉火解毒等生理活性。本文采用靈敏度高、可靠性好的高效液相色譜法，對(duì)該制劑中主要成分黃芩苷的含量測(cè)定方法進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，結(jié)果方法準(zhǔn)確，回收率高，分離度好。

1 儀器與試藥

Lc-2010A 高效液相色譜儀（日本島津），BP211D 電子天平（北京塞多利斯），ks-120D超聲波清洗器（天津金洲，頻率：50Hz）。

對(duì)照品：黃芩苷（批號(hào)：110715-200815，含量95.2%，用前不需干燥處理）購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。柴黃生板顆粒由河北省廊坊市中醫(yī)院制劑室提供（規(guī)格12g·袋-1批準(zhǔn)文號(hào)：冀藥制字Z20051455）。甲醇為色譜純（天津市科密歐），水為自制超純水。

2 色譜條件

色譜柱：SHIMADZU VP-ODSC18(250×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇－水－磷酸（50：50：0.2），流速：1.0ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫 30℃，進(jìn)樣量：10μl。

3 溶液的制備

3.1 供試品溶液的制備

取柴黃生板顆粒的細(xì)粉0.5g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲25分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

3.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對(duì)照品0.01181g，至50ml 容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液，備用。精密量取5ml 置25ml 量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度搖勻，即得濃度為56.26ug·ml-1 的對(duì)照品溶液。

3.3 陰性樣品溶液

按處方比例及工藝制備不含黃芩的陰性樣品，照3.1 項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制得陰性樣品溶液。

4 線性關(guān)系的考察

精密吸取對(duì)照品貯備液，分別配置成系列濃度的對(duì)照品溶液。注入液相色譜儀，照上述色譜條件測(cè)定黃芩苷的峰面積。以對(duì)照品的進(jìn)樣量X（μg）對(duì)峰面積Y 進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=-1.285×105+2.059×104X r=0.9998

結(jié)果表明，黃芩苷的進(jìn)樣濃度在0.1407～2.2486μg之間呈良好的線性關(guān)系。

5 干擾試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，樣品色譜中在與對(duì)照品相同保留時(shí)間處有特征吸收峰，陰性樣品色譜中在此保留時(shí)間處無(wú)特征吸收峰，表明樣品中其他成分對(duì)黃芩苷的檢測(cè)無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1。

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6 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10ul，連續(xù)進(jìn)樣5次，照上述色譜條件，分別測(cè)定峰面積。結(jié)果峰面積的RSD為0.27%。

7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一批供試品（批號(hào)：080722）溶液10μl，照上述色譜條件，每隔4小時(shí)進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定5次，其RSD 為1.04%。

8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品（批號(hào)：080722）6份，按3.1項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，照上述色譜條件，測(cè)的黃芩苷的含量為2.58mg·g-1，其RSD 為0.75%，試驗(yàn)結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

9 加樣回收率試驗(yàn)

取批號(hào)為080722 的樣品6份，每份約0.25g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入對(duì)照品溶液液25ml（精密吸取對(duì)照品貯備液25ml，置 250ml 容量瓶中，制得濃度為28.13μg·ml-1的對(duì)照品溶液），按3.1項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，并照上述色譜條件測(cè)定含量，計(jì)算加樣加收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

10 樣品的測(cè)定

精密吸取供試品溶液10ul,依本文色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算黃芩苷的含量。結(jié)果見(jiàn)表2

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11 討論

11.1 溶劑的選擇

分別采用甲醇、乙醇、70%乙醇、50%甲醇為溶劑進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)采用甲醇為溶劑提取完全，對(duì)色譜峰的峰形影響較小，回收率相對(duì)較好。

11.2 供試品溶液制備方法的選擇

以甲醇為溶劑，采用超聲提取的方法。分別超聲20分鐘、25分鐘、30分鐘制備供試品溶液，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，超聲20分鐘所制得的供試品溶液中黃芩苷的含量相對(duì)較低，超聲25分鐘和30分鐘所制得的供試品溶液中黃芩苷的含量基本相等。

11.3 流動(dòng)相的選擇

分別以不同比例的甲醇－水－磷酸、甲醇－水－冰醋酸、進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明：甲醇－水－磷酸（50：50：0.2）較為適宜，樣品峰的對(duì)稱性、保留時(shí)間、理論踏板數(shù)和分離度都比較理想。

11.4 小結(jié)

利用RP－HPLC 法測(cè)定3 批柴黃升板顆粒中的黃芩苷，為該制劑中黃芩的含量控制提供了重要參考。該方法樣品處理簡(jiǎn)單，結(jié)果穩(wěn)定可靠，重復(fù)性良好，可以作為該制劑質(zhì)量控制的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

[1]中國(guó)藥典[S].2005年版.一部.211

[2]高立金，郭志鵬.RP-HPLC 法測(cè)定柴黃升板顆粒中芍藥苷的含量[J].中國(guó)藥師，2009-09-05.