楊燕文 馮自豪 亓發(fā)芝

(復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院整形外科,上海 200032)

毛發(fā)移植是治療各種毛發(fā)缺失的有效方法之一,移植后可以獲得永久性的效果。由于自體毛發(fā)移植是基于“供區(qū)優(yōu)勢(shì)”理論,因此個(gè)體毛發(fā)的供區(qū)是有限的,這大大限制了毛發(fā)移植的應(yīng)用。為了提高有限毛囊的利用率,各種研究著眼于毛發(fā)移植的各個(gè)環(huán)節(jié),從毛發(fā)移植的器械選擇[1-2]到毛囊保存的環(huán)境條件[3-4],以及植入毛囊的最佳密度[5]等不同方面著手以提高移植毛發(fā)的存活率。

本研究通過(guò)比較完整毛囊單位、去表皮成分的毛囊和不帶周?chē)Y(jié)締組織毛囊在裸鼠背部生長(zhǎng)的情況,探討表皮成分的有無(wú)、周?chē)Y(jié)締組織的多少,對(duì)游離毛囊生長(zhǎng)的影響,并以此來(lái)指導(dǎo)臨床的操作,確定一種毛發(fā)存活率較高的毛囊制備方式,充分發(fā)揮有限毛囊的作用。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本采集 常規(guī)消毒鋪巾,取青年男性枕部正常帶毛發(fā)頭皮,置于無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液中清洗血污,剪除毛干及多余的脂肪組織,存于無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液(含青霉素400 U?mL-1,鏈霉素100 μ g?mL-1)中。

1.2 游離毛囊制備 在超凈工作臺(tái)內(nèi),放大鏡下將上述組織用手術(shù)刀在硬質(zhì)木板上,分離出單個(gè)完整的毛囊單位。選取未受損傷毛發(fā),隨機(jī)將所得毛囊分成3組,A組20根,余兩組各10根。A組修剪皮膚之外的毛干至皮膚表面,為完整毛囊單位組;B組切去表皮部分,成為去表皮成分的毛囊;C組修剪皮膚之外的毛干至皮膚表面,再切去毛囊周?chē)慕Y(jié)締組織,成為去周?chē)Y(jié)締組織的毛囊。將其保留于無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液(含青霉素400 U?mL-1,鏈霉素 100 μ g?mL-1)中 。

1.3 毛囊植入 戊巴比妥鈉50 mg?kg-1腹腔注射麻醉裸鼠后,用20 mL針頭于裸鼠背部戳孔,并植入事先制備好的完整毛囊單位和去表皮成分毛囊,每側(cè)各10根,將毛干部分保留于表皮外。同樣在另一只裸鼠背部植入完整毛囊單位和去周?chē)Y(jié)締組織毛囊,每側(cè)各10根。

1.4 數(shù)據(jù)采集與處理 植入后即刻和2周時(shí),測(cè)量裸鼠背部植入毛干長(zhǎng)度,計(jì)算生長(zhǎng)長(zhǎng)度(生長(zhǎng)長(zhǎng)度=測(cè)得長(zhǎng)度-初始長(zhǎng)度)。將各組的結(jié)果行方差分析或卡方檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。植入后毛發(fā)共觀察9周,每周拍照,記錄裸鼠背部毛發(fā)情況。

1.5 HE染色 9周后每組各取2根毛囊做HE染色觀察其結(jié)構(gòu)情況。

2 結(jié) 果

2.1 人頭皮毛囊在裸鼠背部移植的生長(zhǎng)情況 本研究將人頭皮毛囊分離后植入裸鼠背部,發(fā)現(xiàn)植入的各組毛囊在前2周均能較好生長(zhǎng)。于植入2周時(shí)測(cè)量各組毛干生長(zhǎng)的長(zhǎng)度,A組毛干平均生長(zhǎng)4.054±1.564 mm,B組毛干平均生長(zhǎng) 4.371±1.538 mm,C組毛干平均生長(zhǎng)3.663±1.525 mm。用一維方差分析各組數(shù)據(jù)顯示：A組毛干的生長(zhǎng)長(zhǎng)度與B、C組均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

自2周以后開(kāi)始有毛發(fā)自裸鼠背部脫落,每周脫落1～2根,毛干的數(shù)量不斷減少。第4周時(shí),A組可見(jiàn)6根毛發(fā),B組可見(jiàn)4根毛發(fā),C組可見(jiàn)7根毛發(fā)。第9周時(shí)原有毛發(fā)毛干已基本消失,部分毛干雖然脫落,但其毛囊開(kāi)口仍然存在。這些毛囊結(jié)構(gòu)隨著時(shí)間的推移,有的逐漸消失,有的再次有纖細(xì)柔軟的黑色毛發(fā)長(zhǎng)出。處死裸鼠后,仍可在其背部皮下見(jiàn)到明顯的毛囊。

2.2 人頭皮毛囊在裸鼠背部移植的存活率 2周時(shí)各組毛囊在裸鼠背部的存活率分別為：A組90%,B組100%,C組 100%。各組間毛發(fā)的存活率無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

2.3 人頭皮毛囊在裸鼠背部移植的組織學(xué)觀察 9周后將裸鼠背部的毛囊進(jìn)行HE染色,可觀察到人頭皮毛囊在裸鼠背部存活,毛囊各層的結(jié)構(gòu)清晰可見(jiàn)(圖 1)。

圖1 裸鼠背部人頭皮毛囊移植的HE染色(10×10)(EP：裸鼠表皮;HF：人頭皮毛囊)

3 討 論

在臨床工作中發(fā)現(xiàn)移植不帶有表皮和周?chē)Y(jié)締組織的毛囊,往往存活率較低。因此,在分離毛囊時(shí)通常會(huì)保留一定的周?chē)M織和表皮。表皮成分或周?chē)Y(jié)締組織成分對(duì)游離毛囊的生長(zhǎng)究竟有無(wú)影響,在毛囊移植的操作中是否要特別注意保留,無(wú)標(biāo)準(zhǔn)可循。Seager[6]研究發(fā)現(xiàn)帶有一定周?chē)M織的毛囊移植生長(zhǎng)率要明顯高于緊貼毛干分離的毛囊。而表皮成分對(duì)毛發(fā)的生長(zhǎng)有無(wú)影響,尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。國(guó)內(nèi)曹筱冬等[7]提出制備毛囊時(shí)在保護(hù)好毛囊的基礎(chǔ)上,盡量去除周?chē)嘤嗟慕M織,毛囊受到破壞和周?chē)M織過(guò)多均會(huì)影響移植毛囊的成活或生長(zhǎng)。

本研究觀察到在移植2周時(shí),完整毛囊單位組與去表皮成分組、去周?chē)Y(jié)締組織組毛干的生長(zhǎng)長(zhǎng)度及存活率均無(wú)顯著差異,說(shuō)明在裸鼠背部這一環(huán)境中,帶有表皮成分的毛發(fā)與其余兩組移植毛發(fā)的生長(zhǎng)速度和存活率相似。原因可能是在裸鼠背部毛發(fā)植入部位的周?chē)嬖谥c人頭皮相似的表皮和結(jié)締組織,且有足夠的血管、神經(jīng)分布。在人頭皮毛發(fā)植入后,可能通過(guò)一些上皮-間質(zhì)間的相互作用,誘導(dǎo)裸鼠的表皮和結(jié)締組織進(jìn)行一定的轉(zhuǎn)變,趨向于具備人頭皮的一些特性,從而彌補(bǔ)被去除表皮成分或周?chē)Y(jié)締組織的作用。此外,毛發(fā)植入裸鼠背部是一個(gè)體內(nèi)培養(yǎng)的環(huán)境,植入的毛囊可以從裸鼠體內(nèi)獲得一些通過(guò)內(nèi)分泌等途徑產(chǎn)生的激素、生長(zhǎng)因子等毛囊生長(zhǎng)所需物質(zhì),從而在一定程度上彌補(bǔ)了毛囊周?chē)砥ぜ敖Y(jié)締組織的部分作用。

根據(jù)本研究的結(jié)果,可認(rèn)為在臨床毛發(fā)移植時(shí),是否帶有表皮或是保留足夠的周?chē)Y(jié)締組織,并不影響植入毛發(fā)的生長(zhǎng)率、存活率。臨床上觀察到的毛發(fā)生長(zhǎng)的差異性,可能主要是由于對(duì)毛囊損傷造成的。無(wú)論是去表皮,還是分離時(shí)過(guò)于靠近毛根,都會(huì)大大增加損傷毛囊的概率,故毛發(fā)移植的關(guān)鍵還是注意保護(hù)毛囊不受損傷。如有必要,可在確保不損傷到毛囊的情況下,去除毛發(fā)的表皮成分或周?chē)Y(jié)締組織,不會(huì)影響到移植后毛發(fā)的生長(zhǎng)。

本研究將人頭皮毛囊模擬毛發(fā)移植的方式,植入裸鼠背部。由于裸鼠背部皮膚較薄,因此采用傾斜插入的方式。插入后保留毛干暴露于體外,與在人體進(jìn)行毛發(fā)移植的操作基本相同。大多文獻(xiàn)研究是將毛囊細(xì)胞植入裸鼠背部皮下[8],或是將毛囊的一部分埋入裸鼠背部皮下,不保留有毛干在皮膚表面[9]。國(guó)內(nèi)有學(xué)者提到本研究的方法,并指出這樣植入后毛發(fā)容易掉落,無(wú)法進(jìn)行觀察。就本研究移植的情況來(lái)看,在每只裸鼠單獨(dú)放置的情況下,頭皮毛囊采用這種方法植入裸鼠后能夠很好的生長(zhǎng),并不需要額外的保護(hù),在短期內(nèi)并不會(huì)因外界因素而掉落。

裸鼠是免疫缺陷的動(dòng)物,因此人頭皮毛發(fā)在裸鼠背部植入后并不出現(xiàn)排異反應(yīng),能很好的生長(zhǎng)。各組毛囊在植入裸鼠背部后均有明顯生長(zhǎng),植入的毛發(fā)2周后開(kāi)始出現(xiàn)脫落,原因可能是植入毛囊所帶有的短暫擴(kuò)增細(xì)胞(TA cell)等已消耗殆盡,毛發(fā)進(jìn)入退行期。每組植入的毛發(fā)3～4 d脫落1根,未脫落的毛發(fā)繼續(xù)生長(zhǎng)。所有植入毛發(fā)至第9周時(shí)均脫落,但可發(fā)現(xiàn)部分毛囊所在位置有纖細(xì)柔軟的毛發(fā)長(zhǎng)出,這一現(xiàn)象在完整毛囊單位組較多。原因可能是該組毛囊受到損傷最小,帶有組織最為完整,還可能存在少量的人頭皮毛囊干細(xì)胞,在一定的環(huán)境下,還能繼續(xù)進(jìn)入新一輪生長(zhǎng)周期。再次生長(zhǎng)出的毛發(fā)比較纖細(xì)柔軟,可能與在植入毛囊和裸鼠背部周?chē)M織相互作用后新生成的真皮乳頭不同于頭皮毛囊的真皮乳頭(前者體積較小)有關(guān)[10-11]。

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