周振宇 谷元廷

多細(xì)胞生物體細(xì)胞數(shù)量恒定取決于細(xì)胞增殖與凋亡間的動(dòng)態(tài)平衡，破壞平衡可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。Survivin是凋亡抑制蛋白家族的一個(gè)新成員，是迄今發(fā)現(xiàn)最強(qiáng)的凋亡抑制因子［1］。近年研究表明，Survivin與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究旨在探討乳腺癌組織中Survivin蛋白的表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，為臨床治療及提高患者的生存率提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 43例乳腺癌標(biāo)本選自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院乳腺科2008年至2009年手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的組織標(biāo)本，均為浸潤性導(dǎo)管癌，術(shù)前未行任何化療、放療。本組患者年齡30～72歲，中位年齡51歲。臨床分期:Ⅰ期和Ⅱ期16例，Ⅲ期和Ⅳ期27例。其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例。按組織學(xué)分級(jí)為:高中分化30例，低分化13例;另取癌旁5 cm外經(jīng)病理證實(shí)的正常乳腺組織作為正常對(duì)照。

1.2 Survivin的檢測 采用免疫組織化學(xué)鏈酶抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP)法染色，SP試劑盒購于北京中山生物技術(shù)有限公司，用兔抗人Survivin多克隆抗體(武漢博士德生物工程有限公司)檢測Survivin的表達(dá)，嚴(yán)格按照說明書操作。已知陽性乳腺癌切片作為陽性對(duì)照，PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判定:以細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，400倍鏡下計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞，≥10%為陽性，〈10%為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 Survivin蛋白表達(dá)結(jié)果 Survivin在正常乳腺組織中不表達(dá)，腫瘤組織中Survivin蛋白陽性染色顆粒主要定位于腫瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)，細(xì)胞膜亦可有少量著色，周圍間質(zhì)亦見少量陽性染色。正常組Survivin陽性表達(dá)率為0%(0/12)，乳腺癌組Survivin蛋白陽性表達(dá)率62.8%(27/43)，乳腺癌組Survivin蛋白陽性表達(dá)率顯著高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 Survivin蛋白陽性表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Survivin蛋白陽性表達(dá)率(75%，21/28)顯著高于無淋巴轉(zhuǎn)移組(46.2%，6/15)(P＜0.05);根據(jù)臨床病理分期，Ⅰ+Ⅱ期組與Ⅲ+Ⅳ期組之間Survivin蛋白陽性表達(dá)率(50.0%νs70.4%)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);隨臨床分期增加及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，Survivin蛋白陽性表達(dá)率逐漸升高(P＜0.05)。見表1。另外，Survivin蛋白陽性表達(dá)與患者年齡及分化程度無關(guān)(P＞0.05)。

表1 Survivin與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

近年來，乳腺癌的發(fā)病率呈明顯上升趨勢，嚴(yán)重影響著女性的生活質(zhì)量及威脅其生命。因此，探討乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移的機(jī)制，成為目前研究的熱點(diǎn)。多細(xì)胞生物體細(xì)胞數(shù)量恒定取決于細(xì)胞增殖與凋亡間的動(dòng)態(tài)平衡，破壞平衡可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。在惡性腫瘤病變中，細(xì)胞增殖和凋亡同時(shí)增加，但增殖速率明顯大于凋亡速率。當(dāng)抑制腫瘤細(xì)胞增殖和/或促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，則會(huì)影響腫瘤的生長。Survivin基因是一個(gè)新近發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制基因［1］，具有強(qiáng)大的凋亡抑制功能，其異常表達(dá)與多種人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)［2］，是聯(lián)系細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡界面的重要因子。在大多數(shù)腫瘤均有表達(dá)，為腫瘤靶向治療提供了一個(gè)良好的前景。

細(xì)胞凋亡主要有兩條途徑:死亡受體途徑和線粒體途徑，兩條途徑最終都通過激活下游效應(yīng)因子使細(xì)胞凋亡。1997年耶魯大學(xué)的Altieri等［1］利用效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體1(EPR1)cDNA在人類基因組文庫中雜交篩選并克隆產(chǎn)生了1個(gè)IAP基因家族新成員，即Survivin基因，因可延長細(xì)胞的生存，故又名生存素。組織分布上Survivin只表達(dá)于胚胎和發(fā)育的胎兒組織，除胸腺、生殖腺外不見于其他終末分化的正常成人組織。相反在大多數(shù)腫瘤組織中均可檢測到Survivin的表達(dá)［3，4］。Survivin的主要生物學(xué)功能就是抗凋亡，可以直接粘附于活化的效應(yīng)因子上，使其不能發(fā)揮作用，從而阻斷細(xì)胞凋亡過程，是目前已知作用最強(qiáng)的凋亡抑制蛋白。

本研究顯示，Survivin在正常乳腺組織中不表達(dá)，乳腺癌中Survivin表達(dá)率顯著高于正常乳腺組織，提示Survivin基因的表達(dá)發(fā)生在乳腺癌惡性轉(zhuǎn)化的早期，表明Survivin基因與乳腺癌的發(fā)生有關(guān)。Survivin基因在乳腺癌組織中的表達(dá)可能抑制了異常突變的細(xì)胞的凋亡，從而擾亂了細(xì)胞生長和凋亡途徑，促使細(xì)胞逃離生長監(jiān)控，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。對(duì)Survivin蛋白的檢測可作為早期乳腺癌的輔助診斷。Tanaka等［5］研究表明，Survivin在乳腺癌組織中的陽性率為70.7%，而在癌旁正常乳腺組織中無表達(dá)。與本結(jié)果相似。Aziz等［6］檢測皮膚癌和癌前病變組織，發(fā)現(xiàn)皮膚癌組織中Survivin基因高表達(dá)(87%)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)在皮膚癌前病變中有Survivin基因部分表達(dá)，認(rèn)為Survivin基因的表達(dá)與皮膚角化細(xì)胞轉(zhuǎn)化有關(guān)，Survivin基因表達(dá)可能參與皮膚癌的發(fā)生、發(fā)展，從而認(rèn)為Survivin基因的表達(dá)是癌變?cè)缙谑录?/p>

本研究證實(shí)，根據(jù)臨床病理分期，乳腺癌Ⅰ期組與Ⅱ組期之間Survivin蛋白陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Survivin蛋白陽性表達(dá)率顯著高于無淋巴轉(zhuǎn)移組;隨臨床分期增加及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，Survivin蛋白陽性表達(dá)率逐漸升高。提示Survivin基因不但參與乳腺原位腫瘤形成過程的調(diào)節(jié)，促進(jìn)其發(fā)展，可能還參與乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程的調(diào)節(jié)，在轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮作用。Sarela等［7-8］認(rèn)為，在惡性腫瘤中，脫落的癌細(xì)胞因?yàn)镾urvivin對(duì)凋亡的抑制而受到了保護(hù)，得以繼續(xù)存活并分裂增殖，進(jìn)而形成腫瘤鄰近或遠(yuǎn)離部位的轉(zhuǎn)移，從而引起預(yù)后不良。關(guān)于預(yù)后情況本組正在跟蹤調(diào)查之中。

Survivin的異常表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，其在乳腺癌中的高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床病理分期密切相關(guān)，可能是影響乳腺癌預(yù)后的重要分子指標(biāo)。

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