黃 健

江蘇省南通市啟東市中醫(yī)院，江蘇 啟東 226200

消溶排石合劑由金錢(qián)草，六一散，海金沙，雞內(nèi)金，威靈仙，炮山甲，生地逾，冬葵子等中藥組成，具有清濕熱、利尿、排石等功效，在本院應(yīng)用多年，證明對(duì)尿路結(jié)石、膽結(jié)石等疾病有效。為了控制消溶排石合劑的質(zhì)量，保證臨床用藥效果，本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC測(cè)定消溶排石合劑中綠原酸含量的方法。經(jīng)方法學(xué)考察證實(shí)該方法特異性高，回收率和精密度好，結(jié)果滿意。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀系統(tǒng)包括高效液相色譜儀 (Waters 515);P200高壓泵;Waters 2487紫外檢測(cè)器及GJ605型高壓六通進(jìn)樣閥;色譜柱 (Hanbang C－18);數(shù)據(jù)采集及處理采用HS色譜數(shù)據(jù)工作站V4.0+(杭州英譜科技)

1.2 試藥

綠原酸對(duì)照品，中國(guó)藥品生物制品檢定所 (批號(hào)：110753－200413);消溶排石合劑 (批號(hào)：20100512，20090522，20090725，20090730)由本院自制;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)［1]

色譜柱：HangBang C18(200*4.6mm 5μm);流動(dòng)相：乙腈－0.4%磷酸溶液 (11：89v/v);使用前以0.45μM微孔濾膜減壓過(guò)濾，檢測(cè)波長(zhǎng)為UV327nm;流速為1.0ml/min。此條件下綠原酸峰與相鄰峰分離度＞1.5，理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品10.61mg，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.1061mg/ml對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密吸取本品50ml(5支)置100 mL容量瓶中，加甲醇40mL，密塞，搖勻，超聲處理 (功率 300W，頻率50Hz)30分鐘，放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用0.45μM微孔濾膜減壓過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系

取對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣5、10、15、20、25μL，即相當(dāng)于綠原酸0.531，1.062，1.593，2.124，2.655μg的對(duì)照品溶液，測(cè)定峰面積，以綠原酸質(zhì)量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程以及線性范圍，分別為：Y=165748.2646X+827.6242，r=0.9998，綠原酸進(jìn)樣量在0.531～2.655μg范圍內(nèi)峰面積與進(jìn)樣量呈良好線性。

2.5 加樣回收率

精密吸取已知含量的樣品溶液5份，分別置50 mL量瓶中，每份精密加入一定量對(duì)照品溶液，然后用流動(dòng)相稀釋到刻度，照含量測(cè)定方法操作，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 消溶排石合劑加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.6 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

在上述色譜條件下，取綠原酸對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣8次20μL，記錄峰面積，RSD為0.82%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取同一批號(hào)的樣品 (批號(hào)：20100312)按照樣品測(cè)定的方法重復(fù)操作8次，測(cè)得綠原酸平均含量和RSD，結(jié)果表明，重復(fù)性試驗(yàn)RSD為1.52%，表明本法重現(xiàn)性很好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品 (批號(hào)：20100512)新配的供試品溶液分別在0、2、4、8、16、24 h進(jìn)樣20μL，測(cè)定其中綠原酸的峰面積，結(jié)果RSD為1.71% ，表明供試品溶液在24 h穩(wěn)定。

2.9 樣品測(cè)定

取4批樣品，按上述供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測(cè)定含量，分別進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算樣品中綠原酸的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 HPLC測(cè)定消溶排石合劑的含量結(jié)果

3 討論

3.1 根據(jù)所測(cè)四批樣品的含量結(jié)果，消溶排石合劑中綠原酸的平均含量為1.557mg/支，因此可規(guī)定消溶排石合劑中綠原酸 (C16H18O9)不得少于1.40mg/支。

3.2 提取方法的選擇 本實(shí)驗(yàn)曾用幾種方法處理樣品，結(jié)果以本文擬訂的方法結(jié)果最好，且操作簡(jiǎn)便，故選用此法。

3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 綠原酸的分子光譜僅在327nm處有一中等強(qiáng)度的吸收峰，故選擇327nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.4 流動(dòng)相的選擇 先后試驗(yàn)了乙腈－水 (56：44 v/v)，甲醇－水 (45：55 v/v)，結(jié)果用乙腈 －0.4%磷酸溶液(11：89v/v)綠原酸的分離效果最好，本實(shí)驗(yàn)用乙腈－0.4%磷酸溶液 (11：89v/v)為流動(dòng)相，流速為1.0ml/min。經(jīng)過(guò)方法學(xué)考察，證明該方法穩(wěn)定，具有良好的專(zhuān)屬性，可以作為消溶排石合劑質(zhì)量控制方法之一。

［1]任貽軍，周菁麗，李紀(jì)元，高逢喜，等．HPLC法測(cè)定排石康顆粒中綠原酸的含量［J]．中國(guó)藥師，2009，12(9)：1277－1278．