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        高效液相色譜法測定紅花龍膠囊中蛻皮甾酮的含量

        2010-08-28 03:22:50周鋼李維義
        中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用 2010年21期
        關(guān)鍵詞:巴戟天牛膝正丁醇

        周鋼 李維義

        紅花龍膠囊根據(jù)中醫(yī)理論結(jié)合強(qiáng)直性脊柱炎的臨床癥狀由:紅花、地龍、牛膝、黃芪、附子、五加皮、巴戟天、甘草、白花蛇、羌活、獨(dú)活、川芎等十多味中草藥經(jīng)醇提和水煎等方法而組成的復(fù)方膠囊制劑。紅花龍膠囊具有:益氣補(bǔ)腎、活血通絡(luò)、溫經(jīng)止痛的功效,經(jīng)臨床部分應(yīng)用,對強(qiáng)直性脊柱炎有確切的臨床療效。為保障制劑質(zhì)量對紅花龍膠囊中牛膝的有效成分蛻皮甾酮用高效液相色譜法測定含量以控制產(chǎn)品質(zhì)量。

        1 儀器與試藥

        日本Jasco UV-975型高效液相色譜儀,色譜工作站(日本)。中藥材采購于GMP生產(chǎn)企業(yè),其中中藥飲片牛膝經(jīng)蘭州大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室鑒定為莧科植物牛膝Achyranthes bidentata BL的干燥根。甲醇為色譜純,無水乙醇、正丁醇為分析純試劑。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 色譜條件 Bondapak TMC18色譜柱(3.9 mm×300 mm,8 ~10 μm)沃特世公司,流動相:甲醇-水(45:35);流速:0.8 ml/min,柱溫為室溫,檢測波長243 nm,檢測靈敏度0.08AUFS,理論塔板數(shù)以蛻皮甾酮(C27H44O7)計不低于4800,此條件下,樣品中蛻皮甾酮與相鄰成分達(dá)基線分離,且對陰性對照無干擾。

        2.2 對照品溶液的配制取于105℃下干燥至恒重的對照品蛻皮甾酮約5.5 mg,用水飽和的正丁醇定量轉(zhuǎn)溶于5 ml量瓶并稀釋至刻度,搖勻,精密吸取1 ml置于10 ml量瓶中,加水飽和的正丁醇稀釋至刻度,搖勻即得對照品溶液(0.11 mg/ml)。

        2.3 供試品溶液的配制 精密秤取紅花龍膠囊內(nèi)容物5 g(相當(dāng)于10粒量)置100 ml索氏提取器中,加無水乙醇60 ml,回流提取16 h,回收乙醇,蒸干,加蒸餾水10 ml微溫溶解。濾入分液漏斗中,以10 ml微溫蒸餾水分次洗滌儀器和殘渣。用水飽和的正丁醇每次10 ml洗滌,共5次提取,合并提取液,回收提取液。定量轉(zhuǎn)入10 ml容量瓶中,以水飽和的正丁醇稀釋至刻度作為供試品溶液。

        2.4 線性關(guān)系考察 分別吸取對照品溶液6,9,12,15和20 μl,注入高效液相色譜儀測定,將所測得的蛻皮甾酮峰面積與進(jìn)樣量(μg)進(jìn)行回歸,得方程У=147696.4X-16935.8,r=0.9997(n=5),結(jié)果表明蛻皮甾酮進(jìn)樣量在0.66~2.2 μg線性關(guān)系良好。

        2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取蛻皮甾酮對照品溶液(0.11 mg/ml)5 μl,連續(xù)進(jìn)樣5次,測得蛻皮甾酮峰面積平均值為2378915,RSD 1.5%,表明進(jìn)樣精密度良好。

        2.6 重線性試驗(yàn) 取同一批號樣品5份,分別制備5份供試品溶液,按上述色譜條件測定蛻皮甾酮含量,5份平均值為每粒0.92 mg,RSD 2.9%。

        2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號供試品溶液5 μl,分別于0,2,4,8 和 12 h 進(jìn)樣測定,其峰面積均值為 1569645,RSD 1.5%,結(jié)果表明供試品溶液中蛻皮甾酮至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。2.8 回收率試驗(yàn) 精密秤取已知含量的紅花龍膠囊6份,分別精密加入一定的蛻皮甾酮對照品,按樣品測定法進(jìn)行測定。結(jié)果見表1。

        表1 紅花龍膠囊中蛻皮甾酮加樣回收率測定(n=6)

        2.9 樣品測定 取供試品溶液和對照品溶液各5 μl,注入高效液相色譜儀,測定,按外標(biāo)法計算3批樣品結(jié)果分別為每粒 0.89 mg,1.02 mg,1.13 mg。

        3 討論

        3.1 牛膝在紅花龍膠囊組成中所占份額是比較小的量(平均0.92 mg/粒),以此微量的蛻皮甾酮檢測作為產(chǎn)品質(zhì)量的控制標(biāo)準(zhǔn)更有利于監(jiān)控紅花龍膠囊的質(zhì)量。

        3.2 在制備供試品溶液時由于耗時過長(16 h),因此,必須控制好水浴溫度和索氏提取器的密閉性,以防止意外事故的發(fā)生。

        3.3 紅花龍膠囊(紅花、地龍、附子、牛膝、五加皮、黃芪、巴戟天、甘草、白花蛇、羌活、獨(dú)活、川芎等十多味中草藥組成)治療AS獲得了較好的療效?,F(xiàn)代藥理研究表明:黃芪、巴戟天、五加皮等增強(qiáng)免疫作用[1],紅花、牛膝、白花蛇等有鎮(zhèn)痛作用[2、3、4]。紅花龍膠囊具有:益氣補(bǔ)腎、活血通絡(luò)、溫經(jīng)止痛的功效。

        [1]喬智勝.巴戟天對小鼠胸腺萎縮的影響.中西醫(yī)結(jié)合雜志,1991,11(7):415.

        [2]劉愛靜.五加皮提取物對小鼠血清抗體的研究.中成藥研究,1985,7(4):41.

        [3]黃正良.紅花黃色素的鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜研究.中草藥,1984,15(8):34..

        [4]史玉芬.牛膝注射液對巴豆油引起的小鼠耳腫的抑制作用.中國中藥雜志,1988,13(7):44.

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