王 軍，陳祎平，梁振益

（海南大學(xué) 材料與化工學(xué)院，海南 海口 570228）

丹參中迷迭香酸的提取工藝研究

王 軍，陳祎平，梁振益*

（海南大學(xué) 材料與化工學(xué)院，海南 ?？?570228）

以迷迭香酸的提取率為驗(yàn)證指標(biāo)，采用溶劑提取法對(duì)丹參中迷迭香酸進(jìn)行提取工藝研究.在單因素、單水平條件下采用正交設(shè)計(jì)L9（34），考察料液比、乙醇濃度、提取溫度、提取時(shí)間4個(gè)影響因素，用硫酸亞鐵比色法和高效液相色譜法分別對(duì)提取物中迷迭香酸進(jìn)行定性和定量分析.結(jié)果表明：最佳工藝條件為乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)90％，提取溫度60℃，料液比1∶15，提取時(shí)間3h，浸提2次.在最佳條件下迷迭香酸的提取率為91.3 4％.

丹參；迷迭香酸；提取工藝

丹參（Salvia Miltiorrhiza Bge.）為唇形科植物，以根入藥，主產(chǎn)于四川、山東、浙江等省，全國(guó)大部分地區(qū)有分布，主要用于祛瘀止痛、活血調(diào)經(jīng)、養(yǎng)心除煩等.對(duì)冠心病、心血管病常服療效好，對(duì)慢性肝炎、早期肝硬化等疾病也有良好效果.迷迭香酸（Rosmarinic acid簡(jiǎn)稱RosA）是一種多功能酚酸類化合物，作為抗氧化劑，它具有極強(qiáng)的清除體內(nèi)自由基的活性，其抗氧化性強(qiáng)于咖啡酸、綠原酸、葉酸等［1-2］，能抑制內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)節(jié)的低密度脂蛋白的氧化，還具有抗病毒活性.Arda等發(fā)現(xiàn)變豆菜的醇提取物具有抗HIV（人類免疫缺陷病毒）的活性，其中發(fā)揮作用的主要物質(zhì)是RosA［3］.本文以溶劑法從丹參中提取迷迭香酸，確定迷迭香酸的最佳提取溶劑.采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，用硫酸亞鐵比色法和高效液相色譜法分別對(duì)提取物中迷迭香酸進(jìn)行定性、定量研究，確定迷迭香酸的最佳提取工藝，為進(jìn)一步開發(fā)和利用丹參提供依據(jù).

1 儀器、試劑與材料

高效液相色譜（Jasco-1586（雙泵），UV-1570紫外檢測(cè)器，CO-1560柱箱，LEO超聲波清洗器，大連華洋科技儀器有限公司）；PPENDORF微量移液器（德國(guó)）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)Heidolph LABOROTA 4000）；真空干燥箱（德國(guó)BINDER）；UV-2450紫外可見分光光度計(jì)（日本島津株式會(huì)社公司）.

RosA標(biāo)準(zhǔn)品（ALEXIS CORPORATION ALEXIS USA，San Diego，CA 92121/USA），甲醇、乙腈均為色譜純，水為超純水，無(wú)水乙醇、甲醇、石油醚、硫酸亞鐵、醋酸鈉、乙酸乙酯、檸檬酸等均為國(guó)產(chǎn)分析純，干制丹參（購(gòu)于海南源安隆藥業(yè)有限公司）.

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 硫酸亞鐵比色法測(cè)定丹參中RosA的含量［4］

精密稱取105℃干燥4 h的RosA標(biāo)準(zhǔn)品6.5mg，置于25mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解，稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液.取丹參提取液作為樣品溶液.用微量移液器分別移取對(duì)照品溶液和樣品溶液各0.40mL，分別加入0.1mol/L NaAc緩沖溶液（pH6.0）9.54mL和新配的 0.2mol/L FeSO4溶液60.0 μL，充分混勻后，室溫暗處反應(yīng)30 min，使顯色完全，于572 nm比色，測(cè)定吸光度.

2.2 RosA的含量測(cè)定

2.2.1 高效液相色譜法測(cè)定條件

色譜條件：色譜柱為Waters C18（150×3.9 mm，5 um）；流動(dòng)相為甲醇-0.1％磷酸水溶液（40∶60）；流速為0.8 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為330 nm；靈敏度為0.16AFUS；柱溫為室溫（25℃）.

2.2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取105℃干燥4 h的RosA標(biāo)準(zhǔn)品6.5mg，置于25 mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解，稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液.

2.2.3 供試品溶液的制備

精密稱取丹參粉末2.0g，按L9（34）正交實(shí)驗(yàn)表所列進(jìn)行提取，提取過程保持溶劑回流狀態(tài)，所得提取液用鹽酸調(diào)pH值至2.0～4.0，過濾或抽濾，將清液用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去乙酸乙酯，濃縮液經(jīng)真空干燥制得丹參提取物，精密稱取100.0 mg提取物加甲醇溶解并稀釋至10 mL，搖勻，即為供試品溶液.

2.2.4 測(cè)定

吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，在上述色譜條件下進(jìn)樣20μL分析，根據(jù)HPLC色譜圖中的峰面積，按外標(biāo)法定量，計(jì)算出樣品中RosA的含量和提取率.

3 結(jié)果與討論

3.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

3.1.1 提取溶劑的選擇

稱取丹參粉末2.0g，分別用水、質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5％甲酸、甲醇、乙醇作溶劑，以1∶25的物料比，在60℃水浴中提取2h，按2.1項(xiàng)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1.

表1 不同提取溶劑對(duì)提取效果的影響Table.1 The influence of solvent on extract effect

由表1可以看出最佳的提取溶劑是乙醇.

3.1.2 乙醇濃度的選擇

稱取丹參粉末2.0g，分別用質(zhì)量分?jǐn)?shù)30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％乙醇50 mL，在60℃水浴中提取2 h，按2.1項(xiàng)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表2.

表2 乙醇濃度對(duì)提取效果的影響Table.2 The influence of ethanol concentration on extract effect

從表2可以看出隨著乙醇濃度的增加，提取物的吸光度逐漸升高，當(dāng)乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到80％時(shí)，提取物的吸光度最高.隨后，乙醇濃度再增加，吸光度稍微降低.為了回收溶劑和濃縮方便，選擇乙醇的最佳提取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90％.

3.1.3 料液比的選擇

稱取丹參粉2.0g，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)80％乙醇分別配制1∶10、1∶15、1∶20、1∶25料液比（g/mL），在60℃水浴中提取2 h，按2.1項(xiàng)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3.

表3 料液比對(duì)提取效果的影響Table.3 The influence of ratio of liquid-solid on extract effect

從表3可以看出，隨著溶劑量的增加，提取物的吸光度逐漸升高，且增加的頻率逐漸平緩.由于料液比增加，會(huì)給后處理工序增加困難，而且增加生產(chǎn)成本，在保證提取效果的同時(shí)，應(yīng)盡量減少溶劑用量和降低蒸發(fā)濃縮負(fù)荷，因此選擇最佳料液比為1∶15.

3.1.4 提取時(shí)間的選擇

稱取丹參粉末2.0g，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)80％乙醇溶液，以1∶15的料液比，在60℃水浴中提取1，2，3，4和8 h，按2.1 項(xiàng)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表4.

表4 提取時(shí)間對(duì)提取效果的影響Table.4 The influence of extract time on extract effect

提取時(shí)間決定著生產(chǎn)的周期，是生產(chǎn)工藝研究中一個(gè)十分重要的影響因素，它決定著生產(chǎn)成本和能源的消耗.從表4可以看出：隨著提取時(shí)間的增加，其吸光度平緩的增大，但到了3 h以后又逐漸減小.因此選擇最佳提取時(shí)間為3 h.

3.1.5 提取溫度的選擇

稱取丹參粉2.0g，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)80％乙醇溶液為溶劑，以1∶15的物料比，在60，80和90℃水浴中提取3 h，按2.1項(xiàng)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表5.

隨著溫度的升高，提取物的吸光度平緩減少，可能是因?yàn)橐掖荚?0℃左右沸騰，在接近沸點(diǎn)時(shí)提取溫度太高，雜質(zhì)的溶出量增加而受到影響.所以最佳的提取溫度為60℃.

表5 提取溫度對(duì)提取效果的影響Table.5 The influence of extract temperature on extract effect

3.2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

以不同提取工藝條件下丹參中迷迭香酸的含量為指標(biāo)，以單因素各影響因子為研究對(duì)象，進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，結(jié)果見表6.

表6的結(jié)果說(shuō)明，各因素對(duì)迷迭香酸提取效果的影響程度依次為B＞A＞D＞C，因素C、D無(wú)顯著性差異，這說(shuō)明提取溫度和提取時(shí)間在正交設(shè)計(jì)的4水平內(nèi)對(duì)迷迭香酸的含量無(wú)顯著性影響，而提取時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)延長(zhǎng)操作周期，對(duì)生產(chǎn)不利.因素A、B有顯著性差異，說(shuō)明乙醇濃度和料液比對(duì)迷迭香酸的含量有很大的影響，綜合各因素的k值比較，A2B3C1D2為最佳提取條件.即料液比1∶15、質(zhì)量分?jǐn)?shù)90％的乙醇溶液、提取溫度60℃、提取時(shí)間3 h.

3.3 提取次數(shù)的選擇

通過正交實(shí)驗(yàn)得到最佳提取工藝條件，按此條件，分別提取l，2，3，4次，以迷迭香酸的提取率為檢測(cè)指標(biāo)，考察提取次數(shù)對(duì)提取工藝的影響，每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)做3次，結(jié)果見表7.從表7可以看出，2次提取就可將大部分迷迭香酸提出，提取率達(dá)91.34％.再增加提取次數(shù)，提取率提高不明顯.從經(jīng)濟(jì)角度考慮，本試驗(yàn)采用2次提取.

表7 浸提次數(shù)對(duì)提取率的影響（n=3）Table.7 Effect of extraction times on extraction rate

3 結(jié)論

結(jié)合單因素和正交實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，得出丹參中迷迭香酸的最佳提取工藝是：料液比1∶15，溶劑為質(zhì)量分?jǐn)?shù)90％的乙醇溶液；提取溫度60℃，提取時(shí)間3 h，浸提2次，在此最佳條件下，迷迭香酸的提取率為91.34％.

表6 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table.6 The result of straight intersect experiment

lipoprotein by rosmary and plant phenolics[J].Agric Food Chem，1997，45（3）：578-582.

［3］Arda N，Goeren N，Kuru A，et al.Saniculoside N froMSanicula europaea L[J].Med Chem，1997，60（11）：1170-1173.

［4］殷清華，梁振益，陳祎平.薄荷中迷迭香酸的提取工藝研究[J].食品科技.2008（9）：174-176.

［1］Chen J H，Ho C T.Antioxidant activities acid and its related hydroxycinnamic acid compounds[J].Agric Food Chem，1997，45（7）：2374-2378.

［2］Pearson D A，F(xiàn)rankel E N.Aeschbach R，et al.Inhibition of endothelia cell-mediated oxidation of low-density

責(zé)任編輯：畢和平

Study on the Extractive Technology of Rosmarinic Acid froMSalvia Miltiorrhiza Bge

WANG Jun，CHEN Yiping，LIANG Zhenyi*（College of Materials and Chemical Engineering，Hainan University，Haikou 570228，China）

The optimuMconditions for extracting rosmarinic acid froMSalvia Miltiorrhiza Bge with solvents was obtained with the extraction rate.Influencing factors such as the ratio of solid to liquid，ethanol concentration，extraction temperature and extracting time were studied by using L9（34）with single factor and single level.Colorimetry was adopted to conduct qualitative analysis and High performance liquid chromatography（HPLC）was used to determine Rosmarinic acid content.The optimuMextraction process was ascertained：ethanol concentration 90％；extraction temperature 60℃；material to solvent 1：15；extraction time 3h and extraction for twice.The extraction rate of Rosmarinic acid was 91.34％in the optimized conditions.

Salvia Miltiorrhiza Bge；rosmarinic acid；extraction process

TQ 914.1

A

1674-4942（2010）01-0076-04

2009-11-11

*通訊作者