張軼，吳紀(jì)凱

（蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇蘇州 215009）

神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)抑郁癥大鼠模型認(rèn)知行為的影響研究

張軼，吳紀(jì)凱*

（蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇蘇州 215009）

目的：探討神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)對(duì)實(shí)驗(yàn)性抑郁癥大鼠模型的認(rèn)知行為的影響及其機(jī)制。方法：32只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、NGF低劑量組及NGF高劑量組，采用孤養(yǎng)及長(zhǎng)期不可預(yù)見性刺激法建立抑郁癥大鼠模型，NGF低劑量組及NGF高劑量組分別給予不同劑量NGF干預(yù)，采用T迷宮實(shí)驗(yàn)觀察4組大鼠認(rèn)知行為變化及海馬區(qū)神經(jīng)元數(shù)目變化。結(jié)果：模型組大鼠T迷宮實(shí)驗(yàn)錯(cuò)誤次數(shù)增多，海馬區(qū)神經(jīng)元數(shù)目降低，NGF干預(yù)組T迷宮實(shí)驗(yàn)錯(cuò)誤次數(shù)減少，海馬神經(jīng)元數(shù)目較模型組增多，并呈現(xiàn)劑量相關(guān)性。結(jié)論：NGF能夠改善抑郁癥大鼠模型認(rèn)知行為障礙，其可能通過(guò)保護(hù)海馬區(qū)神經(jīng)元發(fā)揮作用。

神經(jīng)生長(zhǎng)因子；抑郁癥大鼠；認(rèn)知行為

抑郁癥是心理及生理變化的共同結(jié)果，海馬等邊緣系統(tǒng)中樞部位功能及結(jié)構(gòu)的變化參與抑郁癥的發(fā)病，也是抑郁癥后認(rèn)知行為變化的相關(guān)部位之一，NGF是與神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、損傷后修復(fù)等密切相關(guān)的細(xì)胞因子，本文就NGF對(duì)實(shí)驗(yàn)性抑郁癥大鼠的認(rèn)知行為的保護(hù)作用及機(jī)制進(jìn)行探討。

1 材料及方法

1.1 主要試劑及設(shè)備

神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)因子（武漢博士德生物試劑公司），NSE檢測(cè)試劑盒（浙江碧云天生物試劑公司），熒光顯微鏡，切片機(jī)（上海精密儀器廠），PBS緩沖液等。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模及干預(yù)方法

32只雄性SD大鼠。7～8周齡，清潔級(jí)，蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物采用隨機(jī)數(shù)字表法分為4組，對(duì)照組、模型組、低劑量干預(yù)組及高劑量干預(yù)組，模型組、低劑量干預(yù)組及高劑量干預(yù)組采用孤養(yǎng)及長(zhǎng)期不可預(yù)見性刺激法建立抑郁癥大鼠模型，大鼠分只孤養(yǎng)，不規(guī)律光照，不規(guī)律飲食，不規(guī)律給予高溫環(huán)境及冰水游泳，異味刺激及不規(guī)律點(diǎn)擊足底。共持續(xù)不可預(yù)見刺激24 d，造模開始后，低劑量干預(yù)組及高劑量干預(yù)組分別采用5 000 U/ml及10 000 U/ml NGF蒸餾水溶液腹腔注射，每次1 ml，每日1次，對(duì)照組及模型組采用蒸餾水腹腔注射，每次1 ml，每日1次。24 d后各組大鼠進(jìn)行T迷宮實(shí)驗(yàn)及海馬組織神經(jīng)元細(xì)胞檢測(cè)。

1.3 T迷宮實(shí)驗(yàn)

大鼠造模24 d后進(jìn)行T迷宮實(shí)驗(yàn)，每個(gè)大鼠重復(fù)走迷宮5次，以減少偏向誤差，計(jì)算每只大鼠的錯(cuò)誤平均次數(shù)，考察大鼠認(rèn)知行為能力。

1.4 海馬神經(jīng)元細(xì)胞檢測(cè)

大鼠T迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死，低溫環(huán)境下摘取腦組織，4%低聚甲醛固定，以松果體為界，向頭側(cè)2 mm厚度切取3段，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片后脫臘進(jìn)水，以10%正常血清作用10 min，阻斷切片對(duì)蛋白質(zhì)非特異性吸附，稀釋 NSE單克隆一抗，以0.05 mol/L PBS(pH 7.4內(nèi)含0.1%TritonX-100，下同)洗 5×3 min，加入生物素標(biāo)記的二抗在室溫下反應(yīng) 1 h，PBS洗10×3 min，以緩沖甘油封蓋，在熒光顯微鏡下觀察，取5個(gè)不重疊視野計(jì)算平均值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)量資料采用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 4組大鼠認(rèn)知行為變化

模型組T迷宮實(shí)驗(yàn)錯(cuò)誤次數(shù)較對(duì)照組明顯增多，低劑量組及高劑量組T迷宮錯(cuò)誤次數(shù)少于模型組，高于對(duì)照組，低劑量組T迷宮錯(cuò)誤次數(shù)高于高劑量組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 4組大鼠T迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較（x±s，次）

2.2 4組大鼠海馬組織神經(jīng)元數(shù)量變化

模型組海馬區(qū)神經(jīng)元數(shù)目低于對(duì)照組，低劑量組及高劑量組海馬區(qū)神經(jīng)元數(shù)目高于模型組和對(duì)照組，低劑量組海馬區(qū)神經(jīng)元數(shù)目低于高劑量組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 4組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元數(shù)目比較（x±s）

3 討論

抑郁癥是常見的心理及精神疾病，伴有行為、性格等改變，抑郁癥的發(fā)生與腦部的功能變化及應(yīng)激刺激等有關(guān)，大腦的額葉、顳葉及海馬等皮質(zhì)下結(jié)構(gòu)等與情感、行為等有關(guān)的中樞神經(jīng)部位均與抑郁癥的發(fā)生密切相關(guān)[1]。海馬結(jié)構(gòu)是生物情緒反應(yīng)及行為中樞組成部分，參與對(duì)情緒反應(yīng)的非特異性抑制作用。海馬結(jié)構(gòu)受損后，生物能夠出現(xiàn)強(qiáng)迫行為，人的雙側(cè)海馬損毀，則出現(xiàn) KiUver-Busy綜合征即食欲亢進(jìn)，性活動(dòng)異常，饑餓時(shí)情緒反應(yīng)強(qiáng)烈、性情溫馴 、記憶能力和辨認(rèn)能力下降，有的出現(xiàn)時(shí)間、空間、定向力、注意力喪失，思考能力減退，癡呆，情緒衰減，意識(shí)障礙甚至昏迷[2]。

近年的研究顯示[3]，抑郁癥模型大鼠伴有海馬部位神經(jīng)結(jié)構(gòu)及功能的變化，給予不可預(yù)見刺激的抑郁癥大鼠模型中，海馬區(qū)的神經(jīng)元功能及數(shù)目發(fā)生變化。采用藥物改善海馬區(qū)神經(jīng)元的損傷則有助于改善大鼠的認(rèn)知行為，筆者在研究中發(fā)現(xiàn)，在給予孤養(yǎng)及長(zhǎng)期不可預(yù)見性刺激進(jìn)行抑郁癥誘導(dǎo)后，大鼠的海馬區(qū)的神經(jīng)元數(shù)目減少，說(shuō)明海馬區(qū)神經(jīng)元數(shù)量的減少參與了抑郁癥的發(fā)病，有研究顯示[4]，在抑郁癥患者不僅存在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)及功能異常，神經(jīng)元的內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)水平也發(fā)生下降，而抗抑郁藥治療后，海馬區(qū)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子水平及編碼即應(yīng)BDNFmRNA的表達(dá)水平也發(fā)生上調(diào)，說(shuō)明神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子能夠直接或間接的影響海馬的功能，并且對(duì)海馬區(qū)的神經(jīng)元的損傷具有保護(hù)作用[5-6]。采用外源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)抑郁癥大鼠造模過(guò)程干預(yù)發(fā)現(xiàn)，在給予外源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子干預(yù)后，抑郁癥大鼠模型T迷宮實(shí)驗(yàn)錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少，說(shuō)明大鼠的認(rèn)知行為異常得到改善，并且高劑量組的改善程度明顯優(yōu)于低劑量組，進(jìn)一步檢測(cè)海馬組織的神經(jīng)元數(shù)目也發(fā)現(xiàn)給予神經(jīng)生長(zhǎng)因子后海馬區(qū)的神經(jīng)元數(shù)目增多，同劑量也呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系，說(shuō)明外源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子能夠通過(guò)減輕海馬區(qū)的神經(jīng)元損傷，調(diào)節(jié)海馬功能，對(duì)抑郁癥大鼠的認(rèn)知行為異常發(fā)揮保護(hù)作用。

[1]Warner-schmidt JL,Duman RS.Hippocampal neurogen-esis：opposing efeets of stress and an tidepressant treatment[J].Hippocampus，2006，16(7)：239-249．

[2]李素梅,王建良,白玉娟.抑郁癥與腦部病變和分子生物學(xué)的相關(guān)研究進(jìn)展[J].中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育,2010,8(2):161-163.

[3]張偉駿,陳眉,裘濤.活血祛瘀解郁法對(duì)卒中后抑郁大鼠海馬基因BDNF表達(dá)的研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007,25(7):1410-1411.

[4]Huang TL,Lee CT,Liu YL.Serum brain-derived neurotrophic factor levels in patients with major depreesion:Effects of antidepressants[J].Psychiatry Res，2008,42(7):521-525.

[5]王雪琦，路長(zhǎng)林，孫學(xué)軍.側(cè)腦室微量注射神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)實(shí)驗(yàn)性抑郁癥大鼠抑郁行為和海馬神經(jīng)元損傷的影響[J].中國(guó)行為醫(yī)學(xué)科學(xué)，2002，11(5):481-482.

[6]李鸝，涂自良，杜士明，等，氟西汀對(duì)實(shí)驗(yàn)性抑郁癥大鼠抑郁行為及海馬神經(jīng)元再生的影響[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2006，24(4):280-282.

Effect of nerve growth factor on the congitive-behaviors in an experimental depression model of rats

ZHANG Yi,WU Jikai*(Suzhou Health College,Jiangsu Province,Suzhou 215009,China)

Objective:To investigate the effect and reason of nerve growth factor （NGF）on the congitive-behaviors in an experimental depression model of rats.Methods:32 SD rats were randomly divided into control group,model group,lowdose group and high-dose group,experimental depression model of rats were made by lonely breed and irregular excitation,rats in ow-dose group and high-dose group were interfered with NGF,change of congitive-behaviors were observed with T-type labyrinth test and number of nerve cell in hippocampus were contrasted.Results:Mistake number of T-type labyrinth test was increasing and number of nerve cell in hippocampus was decreasing in control groups,mistake number of T-type labyrinth test was decreasing and number of nerve cell in hippocampus was increasing in low-dose groups and high-dose groups,and the change was correlative with dose.Conclusion:NGF can inprove the disorder of congitive-behaviors in an experimental depression model of rats,that maybe a result of protecting nerve cell in hippocampus.

Nerve growth factor;Depression model of rats;Congitive-behaviors

R-332

A

1674-4721（2010）11（c）-025－02

張軼（1970-），江蘇蘇州；醫(yī)學(xué)學(xué)士；蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，高級(jí)講師；從事生理學(xué)教學(xué)教研。吳紀(jì)凱（1969-），江蘇蘇州；理學(xué)學(xué)士；蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，講師；從事藥理學(xué)教學(xué)教研。

*通訊作者

2010-09-03）