高 鵬,李 立,張麗娜

(長春市中心醫(yī)院干部一療區(qū),吉林長春 130051;2.吉林大學(xué)第三醫(yī)院呼吸內(nèi)科;3.長春市中心醫(yī)院消化內(nèi)科)

慢性肺源性心臟病患者血小板糖蛋白CD61、CD62p表達(dá)與臨床研究

高 鵬1,李 立2*,張麗娜3

(長春市中心醫(yī)院干部一療區(qū),吉林長春 130051;2.吉林大學(xué)第三醫(yī)院呼吸內(nèi)科;3.長春市中心醫(yī)院消化內(nèi)科)

*通訊作者

有資料顯示,在肺心病死亡患者的尸檢中約有89.8%的病例存在著肺細(xì)小動脈原位血栓形成[1]。表明肺心病患者存在出血、凝血和纖溶功能變化,易致血栓形成。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)肺心病患者血小板表面CD61、CD62p表達(dá)增強,體內(nèi)存在血小板活化,這可能是導(dǎo)致血栓形成的一個主要原因,故測定血小板表面CD61、CD62p表達(dá)對判斷肺心病病人的病情和預(yù)后有一定的意義。

本研究收集長春市中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科2006年10月至2007年2月間住院的肺心病急性發(fā)作患者30例作為研究組,同時收集10例同期健康人作為對照組,采用流式細(xì)胞儀測定CD61、CD62p陽性血小板百分率,旨在探討肺心病病人是否存在血小板活化及血小板活化在肺心病發(fā)生發(fā)展中的作用,為臨床治療提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 病例資料

2006年10月至2007年2月間于長春市中心醫(yī)院呼吸科住院的肺心病急性發(fā)作病人30例,男性16例,女性14例,年齡范圍 55至71歲,平均年齡62.25歲。臨床診斷符合1977年全國第二次肺心病專業(yè)會議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)。正常對照組10例健康人,男性7例,女性3例,年齡范圍 56至 72歲,平均年齡62.63歲。所有觀察者均無慢性肝腎疾病,糖尿病,心腦血管及血液系統(tǒng)疾病,未使用阿斯匹林、潘生丁、肝素等影響血小板功能的藥物。

1.2 試劑與儀器

Beckman-Coulter公司生產(chǎn)的EPICS ELITE型流式細(xì)胞儀;北京離心機廠生產(chǎn)LDZ-5-2型自動平衡離心機;日本三洋MPR-510型試劑冷藏柜。

異硫氫酸熒光素(FITC)標(biāo)記的抗CD61單克隆抗體及藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的抗CD62p單克隆抗體(Beckman-Coulter公司);PBS緩沖液(本室自配)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,組間比較采用t檢驗。

2 結(jié)果

見表1。

表1 兩組CD61、CD62p陽性血小板百分率

3 討論

血小板活化釋放出多種分子標(biāo)志物,CD61、CD62p是最具特異的血小板活化分子標(biāo)志物。CD61是相對分子質(zhì)量為14.5萬、介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)相互作用的表面糖蛋白,靜息及活化血小板表面均有大量GPⅡb/Ⅲa分子表達(dá),當(dāng)強烈的激活劑刺激血小板活化時,以隱蔽狀態(tài)分布的GPⅡb/Ⅲa也表達(dá)在血小板表面[2]。CD62p是血管粘附分子家族中的一員,主要儲存在血小板α顆粒及中等以上大血管內(nèi)皮細(xì)胞的Weiber-Palade小體內(nèi),當(dāng)血小板和血管內(nèi)皮細(xì)胞受到凝血酶、組胺、TNF-α、缺氧、氧自由基等刺激后,α顆粒和Weiber-Palade小體質(zhì)膜迅速與細(xì)胞膜融合,幾秒至幾分鐘內(nèi)CD62p在細(xì)胞表面表達(dá)達(dá)到高峰[3,4,5]。CD62p是血小板活化最特異的分子標(biāo)志,其表達(dá)強度在活化和非活化血小板之間差別最明顯[6],因此是目前最常用的血小板活化標(biāo)志物。本實驗結(jié)果顯示30例肺心病患者CD61、CD62p陽性血小板分別為87.34±4.62,44.23±7.28,對照組為83.25±3.20,32.17±6.97,實驗組較對照組升高,與國外多個學(xué)者研究結(jié)果一致,證實肺心病患者外周血小板CD61、CD62p表達(dá)水平高于正常人,體內(nèi)存在血小板活化。

目前研究發(fā)現(xiàn),肺心病病人血小板活化通過以下機制參與肺動脈高壓的形成:(1)血小板活化,CD62p表達(dá)增加,而CD62p介導(dǎo)血小板、白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附,使肺小血管血液粘滯度增加,血液呈現(xiàn)為高凝狀態(tài),促進(jìn)肺動脈高壓及肺細(xì)小動脈原位血栓形成;(2)血小板活化后可釋放 PAF、TXA2、5-HT等生物活性物質(zhì),造成肺血管痙攣(TXA2為目前發(fā)現(xiàn)的最強烈的縮血管物質(zhì)之一),肺循環(huán)阻力增加。血小板活化同時釋放ADP等活化血小板物質(zhì),進(jìn)一步放大ADP及其它血小板激動劑的活化作用[7];(3)血小板活化后,其膜上CD61表達(dá)增強,通過纖維蛋白原的“橋鏈”連接作用形成血小板與血小板的聚集,最終形成血栓[8],造成肺循環(huán)阻力增加;(4)細(xì)菌毒素釋放入血,損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞,由于炎癥因子促使EC和血小板CD62p表達(dá)增強,并介導(dǎo)血小板與內(nèi)皮細(xì)胞間的粘附。

總之,肺心病病人血小板表面CD61、CD62p表達(dá)增強,血小板存在活化,且血小板活化參與肺心病的形成,這與臨床上使用抗血小板藥物有效抑制活化血小板、緩解肺動脈高壓、減少并發(fā)癥、改善預(yù)后的治療提供了理論依據(jù)。

[1]王 辰,杜敏捷.慢性肺源性心臟病急性發(fā)作期肺細(xì)小動脈血栓形成的研究[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,1997,77:123.

[2]Pierschke EIB,Grant RA.Correlats betweet fibrinogen bingding to human platelets and platelets aggregability[J].Blood,1981,55:841.

[3]周 同,董德長.細(xì)胞粘附分子研究進(jìn)展[J].上海免疫學(xué)雜志,1995,15(1):58.

[4]Wagner DD.P-selectin chases a butterfly[J].J Clin Invest,1995,95(5):1955.

[5]Barkalow FJ,Barkalow KL,Mayadas TN,et al.Dimerization of P-selectin in platelets and endothelial cells[J].Blood,2000,96(9):3070.

[6]MetzelaarMJ,Heijnen HF,Six ma JJ,et al.Identification of a 33-Kd protein associated with the alpha-granule membrane(GMP-33)that is expressed on the surface of activated platelets[J].Blood,1992,79(2):372.

[7]Moritz MW,Reimers RC,Baker RK,et al.Role of cytoplas mic and releasable ADP in platelet aggregation induced by laminar shear stress[J].J Lab Clin Med,1983,101:537.

[8]Peerschke EIB.Recognition of platelet associated fibrinogen by polyclonal antibodies:correlation with platelet aggregation[J].Blood,1992,79:2082.

1007-4287(2010)06-0905-02

2009-04-26)