焦立新,林乾飛,鞠瑞青,綦翠華

(1.長春市中心血站,吉林 長春 130033;2.濟南大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)學(xué)系)

538例新生兒溶血三項檢查及抗體鑒定分析

焦立新1,林乾飛1,鞠瑞青1,綦翠華2*

(1.長春市中心血站,吉林 長春 130033;2.濟南大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)學(xué)系)

*通訊作者

新生兒溶血病(HDN)是由于母嬰血型不合,母親體內(nèi)產(chǎn)生的IgG血型免疫抗體通過胎盤進入胎兒體內(nèi),使胎兒紅細胞破壞。血型血清學(xué)檢查能為新生兒溶血病患兒的換血和治療提供依據(jù),筆者對538例新生兒黃疸患者進行了溶血三項檢測和抗體鑒定試驗[1],現(xiàn)報告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 2007年6月至2008年12月,長春市各臨床醫(yī)院兒科送檢的新生兒黃疸血樣。新生兒平均日齡是4天,男302例,女236例。

1.2 儀器與試劑 血型血清學(xué)專用離心機、數(shù)顯電熱恒溫水溫箱;聚凝胺試劑購自中山市生科試劑儀器有限公司;抗人球蛋白試劑、抗A和抗B血清、ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細胞、木瓜酶、篩選細胞和譜細胞購自上海血液生物醫(yī)藥有限公司。

1.3 方法 取新生兒血樣3 000 rpm離心5 min,分離血漿和細胞,再繼續(xù)進行直接抗人球蛋白試驗、血清游離抗體測定試驗、紅細胞抗體放散及測定試驗、ABO血型系統(tǒng)以外的抗體篩查及鑒定試驗。

1.3.1 血型鑒定 取小試管分別標(biāo)記 -A、-B、-D,分別加入患兒和母親 3%紅細胞懸液1滴,試劑抗血清1滴,1 000 rpm離心1 min后判定結(jié)果;母親血型鑒定還需做反定型,待檢血清2滴分別加入A、B、O標(biāo)準(zhǔn)紅細胞各1滴,離心后判定結(jié)果。

1.3.2 直抗試驗 患兒3%紅細胞懸液1滴,加抗人球蛋白試劑1滴,1 000 rpm離心1 min后判定結(jié)果。

1.3.3 血清游離抗體試驗 取小試管3支,分別標(biāo)記Ac、Bc、Oc,各加入患兒血清2滴,再分別加入標(biāo)準(zhǔn)A、B、O紅細胞各 1滴,將試管置于37℃30 min,三洗后加抗球蛋白試劑1滴,1 000 rpm離心1 min后判定結(jié)果。

1.3.4 紅細胞抗體放散及測定試驗(熱放散法)(1)取三洗后患兒壓積紅細胞0.5-1 ml,加等量生理鹽水置試管中,試管放入56℃水浴中10min(期間不停振搖),取出后置56℃熱套管內(nèi),立即2 000 rpm離心5 min吸取上清液(即放散液);(2)小試管3支,標(biāo)記EAc、EBc、EOc后,分別加入5%酶處理A、B、O紅細胞各1滴,將吸取的放散液均勻分在三支試管中,將試管置于37℃30 min,三洗后加抗球蛋白試劑1滴,1 000 rpm離心1 min后判定結(jié)果。

1.3.5 紅細胞血型抗體篩查試驗(1)取小試管3支,分別標(biāo)記 S1、S2、S3后,加入相應(yīng)篩選細胞各 1滴和患兒紅細胞放散液各2-5滴,試管置37℃30 min,三洗后加抗球蛋白試劑1 000 rpm離心1 min后判定結(jié)果。

1.3.6 紅細胞血型抗體鑒定試驗進一步用鹽水、聚凝胺法、抗球蛋白試驗進行抗體鑒定試驗。所有實驗操作均嚴(yán)格按照《中國輸血技術(shù)操作規(guī)程》(血站部分,1997版)進行操作。

1.4 結(jié)果判斷

1.4.1 新生兒溶血病游離、釋放試驗的判定 患兒血清或紅細胞放散液中檢測到針對其紅細胞抗原的抗體為陽性結(jié)果。

1.4.2 通過直抗、游離、釋放試驗確定為ABO新生兒溶血病的方法(見表1)。

1.4.3 其他血型系統(tǒng)HDN的診斷方法:綜合分析母子ABO和Rh血型、直抗和游離放散試驗結(jié)果,可判斷是否存在其他血型系統(tǒng)引起新生兒溶血可能性。如果不能除外,則需要用紅細胞放散液進一步做血型抗體鑒定。

2 結(jié)果

2.1 新生兒血型血清學(xué)檢測,明確母嬰血型不合ABO-HDN診斷192例(35.7%),ABO-HDN可疑65例(12.0%),排除 ABO-HDN 281例 (52.2%)。

2.2 母-嬰血型分布及新生兒血型血清學(xué)結(jié)果(見表2)。

表1 ABO新生兒溶血病的診斷方法

表2 母-嬰血型分布及血型血清學(xué)結(jié)果

2.3 紅細胞抗體篩查和鑒定試驗結(jié)果 ABO血型系統(tǒng)以外的抗體鑒定試驗陽性有5例(已經(jīng)排除合并ABO溶血病),陽性率為0.93%。鑒定結(jié)果如下:抗-D 3例(母親均為Rh陰);抗-E 1例;抗-c 1例。

3 討論

新生兒溶血病是由于孕婦體內(nèi)存在與胎兒紅細胞不配合的IgG性質(zhì)血型抗體,引起的同種被動免疫性疾病。理論上,凡是以 IgG性質(zhì)出現(xiàn)的血型抗體都可以引起新生兒溶血病,其中ABO系統(tǒng)最常見,其次為Rh系統(tǒng)。

HDN的主要癥狀和體征有水腫、黃疸、貧血和肝脾腫大,黃疸深者可能并發(fā)核黃疸。癥狀輕重一般取決于孕婦體內(nèi)IgG抗體種類及效價、胎兒代償性造血能力以及免疫功能等因素。通過血清學(xué)檢查可分析母嬰血型是否不合、母親血清中是否存在與患兒紅細胞相對應(yīng)IgG性質(zhì)的抗體、患兒紅細胞是否被來自母親抗體所致敏,從而對新生兒溶血病進行診斷和治療。

檢測Rh系HDN的同時,注意母嬰ABO系HDN的并存,患兒的血樣本檢查包括直抗、ABO和 Rh血型定型、乙醚放散試驗、游離試驗,排除合并ABO溶血病。如果Rh系HDN的三項試驗為陽性,即可證實嬰兒的紅細胞被來自母體的IgG抗體致敏,需以缺乏該Rh抗體相應(yīng)抗原的A(B)紅細胞與嬰兒紅細胞放散液反應(yīng)檢測證實。

Rh新生兒溶血病的直抗都相當(dāng)強,當(dāng)直抗≥2+時,釋放試驗最好用乙醚放散,放散液做一組譜細胞,如此項試驗陽性,就可以直接確診為由免疫抗體所致的溶血病?？贵w篩選和鑒定常使的試驗方法有鹽水介質(zhì)試驗法、抗球蛋白試驗、聚凝胺法。

抗體鑒定的方法可按抗體的血清學(xué)行為和試驗的具體條件選擇[2,3]。為換血的新生兒配血當(dāng)新生兒紅細胞直抗陽性時,只需作主管配血,分別做鹽水、聚凝胺法、抗球蛋白法;當(dāng)母嬰ABO血型配合時,配血盡量用母親血清代替嬰兒血清進行配血;當(dāng)母嬰ABO血型不配合時,配血應(yīng)用嬰兒細胞放散液代替血清進行配血。本組病例檢測陽性率約36%,且大多數(shù)為ABO溶血,說明基層單位開展ABOHDN檢測可以基本解決新生兒溶血病診斷問題。

總之,溶血三項檢測在新生兒溶血病診斷中具有重要意義,其中以釋放試驗難度較大,實驗中應(yīng)注意放散時的溫度、放散液的量、離心轉(zhuǎn)速和時間等[4、5],確保實驗的準(zhǔn)確性。由于臨床上ABO系統(tǒng)溶血病最為常見,因此放散方法也以熱放散為主,遇到特殊情況,可考慮乙醚放散和抗體鑒定。試管法是經(jīng)典的檢測方法,操作比較煩瑣且耗時,但是結(jié)果可靠。由于微柱凝膠卡使用簡便、快捷,如果凝膠卡的質(zhì)量經(jīng)過確認,也可以采用該方法進行檢測。

[1]李 勇,楊貴貞.人類紅細胞血型學(xué)實用理論與實驗技術(shù)[M].北京:中國科學(xué)技術(shù)出版社,1999.173-187.

[2]賴福才,王梁平,彭道波,等.112例O型孕婦新生兒溶血病檢測[J].臨床血液學(xué)雜志,2004,17(5):284.

[3]徐蘊華,劉善英.母兒血型不合的診斷與治療[J].中國實用婦科與產(chǎn)科雜志,2001,17(10):583.

[4]劉達莊.免疫血液學(xué)[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2002.224-225.

[5]安萬新.輸血技術(shù)學(xué)[M].北京:北京科學(xué)技術(shù)文獻出版社,2006.91-101.

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2009-06-21)